五蓮山野生迎紅杜鵑組織快繁技術(shù)

李媛+侯可雷

摘要：以野生迎紅杜鵑幼嫩枝芽為試驗材料，進行組織培養(yǎng)技術(shù)研究。結(jié)果表明：當(dāng)年生野生迎紅杜鵑嫩枝的最佳消毒方法為，先用0.25 g/L多菌靈浸泡45 min，然后用75%乙醇溶液消毒30 s，再用0.1% HgCl2消毒6 min；最佳啟動培養(yǎng)基配方為Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.5 g/L瓊脂粉，pH值5.5，該條件下誘芽率達到89.73%；最佳繼代增殖培養(yǎng)基配方為1/2 Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA；最適生根培養(yǎng)基配方為Read+0.5 mg/L NAA+20 g/L蔗糖。

關(guān)鍵詞：迎紅杜鵑；正交設(shè)計；組織培養(yǎng)

中圖分類號：S685.210.4+3 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0055-02

杜鵑花是世界著名的園林觀賞植物，也是我國十大傳統(tǒng)名花之一，與龍膽、報春并稱為世界三大高山野生花卉^[1]。我國杜鵑花栽培歷史悠久，種質(zhì)資源豐富，在環(huán)境綠化、園林觀賞等方面應(yīng)用很廣^[2-3]。五蓮山位于山東省日照市，是我國野生杜鵑花資源的主要分布地之一，擁有迎紅杜鵑（Rhododendron mucronulatum）、映山紅（Rhododendron simsii）、照山白（Rhododendron micramthum）等三大品系共40多個杜鵑花品種，是長江以北地區(qū)最大的野生杜鵑花棲息地^[4]。迎紅杜鵑別稱迎山紅、萬荊子、藍荊子、尖葉杜鵑等^[5]，屬杜鵑花科杜鵑花屬的落葉灌木，生于山地灌叢及石砬子上，喜光、喜濕潤，稍耐陰，耐寒冷，喜酸性土壤，忌高溫、干旱，花粉紅絢麗，秋葉綠、紅、黃相間，嬌艷優(yōu)美，盛花期長達1個月，彩葉期長達2個月，是花帶、花境、花叢等園林景觀設(shè)計的優(yōu)良素材^[6]。

迎紅杜鵑在長江以北地區(qū)少有推廣^[7]，僅停留在少量野生苗被移植應(yīng)用的水平上，主要是因為常規(guī)繁殖方法下繁殖系數(shù)較低，而且其對生長環(huán)境要求苛刻，馴化栽培有一定難度^[8-11]。本研究探討了迎紅杜鵑快速繁殖技術(shù)，該技術(shù)在較短時間內(nèi)憑借少量母本材料獲得了較多無性系名貴苗木，以期為該樹種更好地服務(wù)于未來城鄉(xiāng)綠化建設(shè)提供支持。

1 材料與方法

1.1 材料

在五蓮山采集野生迎紅杜鵑嫩枝條。在連續(xù)晴天3 d以上、枝條無露水時進行取樣，取樣時間一般在09：00—10：00，剪取無病蟲害、生長健壯的枝梢。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體消毒滅菌 用流水沖洗、去除外植體表面附著物后，放入洗潔精稀釋液中逐個清洗并浸泡5 min，再置于流水中1 h以上，徹底洗去洗滌劑后轉(zhuǎn)入超凈工作臺內(nèi)，進行滅菌處理。對外植體先用0.25 g/L多菌靈浸泡，再用75%乙醇溶液浸泡，最后用0.1% HgCl2進行消毒。每種消毒劑的消毒時間設(shè)3個水平，采用L9（34）正交設(shè)計進行試驗（表1）。每個處理重復(fù)3次。統(tǒng)計外植體污染率、褐化率、成活率。

1.2.3 繼代培養(yǎng)基配方篩選 以改良Read培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，以ZT為影響因素，ZT設(shè)1、 2、3 mg/L等3個水平，每個組合30瓶，重復(fù)2次，統(tǒng)計增殖率。

1.2.4 生根培養(yǎng)方案 基本培養(yǎng)基選用Read和1/2 Read，蔗糖濃度分別為10、20、30 g/L。每個處理接種10株組培苗，3次重復(fù)，生長調(diào)節(jié)劑均為0.5 mg/L NAA，pH值5.5，40 d后調(diào)查其生根率。

1.2.5 馴化移栽 選取根系健壯且數(shù)量多的幼苗，將其培養(yǎng)瓶移出光照培養(yǎng)箱，放在18～25 ℃室溫下煉苗。煉苗結(jié)束后將幼苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，將其移栽到已滅菌并完全冷卻的基質(zhì)（沙、珍珠巖、營養(yǎng)土體積比為1 ∶1 ∶2）中。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒方法對殺菌效果的影響

由表3可以看出，不同消毒劑、消毒時間對迎紅杜鵑外植體的殺菌效果有顯著差異。從接種后的迎紅杜鵑組培苗情況來看，最好消毒方法為A8處理，即0.25 g/L多菌靈浸泡 45 min，75%乙醇溶液消毒30 s，0.1%HgCl2消毒6min。該消毒方式能夠保證迎紅杜鵑外植體褐化率最低，感染率最低，成活率最高。對西洋杜鵑組培苗的成活率進行極差分析，同樣可以得出最佳消毒方式是A8處理。

2.2 不同培養(yǎng)基配方對出芽誘導(dǎo)效果的影響

由表4可見，不同基本培養(yǎng)基和激素配比對莖段芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)影響（出芽率）差異顯著。極差分析和方差分析可知，各因素對出芽率影響效果的大小依次為：培養(yǎng)基類型>ZT濃度>NAA濃度。3種基本培養(yǎng)基對出芽率的影響差異顯著，使用Read基本培養(yǎng)基的出芽率最高（B6處理）；ZT濃度在高水平時對迎紅杜鵑出芽有促進作用；NAA濃度為0.1 mg/L時誘導(dǎo)出芽效果最佳。

3 結(jié)論

野生迎紅杜鵑外植體表面攜帶各種污染微生物，消毒較困難，僅靠提高消毒劑濃度和消毒時間，雖然在一定條件下能將細菌、真菌等污染微生物全部殺死，但同時會將植物外植體細胞殺死或損壞大部分外植體從而引起褐變，最終會導(dǎo)致外植體死亡。消毒時間過短又無法完全清除外植體上的真菌、細菌等。因此，如何在外植體污染率、成活率、褐變率間找到動態(tài)平衡點，選擇合適的消毒劑種類、濃度和消毒時間是關(guān)鍵。多菌靈是一種廣譜、低毒、內(nèi)吸性殺菌劑，雖然不能防止細菌污染，但對多種霉菌生長有強烈抑制作用，具有較好的防霉效果，它和HgCl2、乙醇溶液聯(lián)合組成的復(fù)合消毒劑的效果明顯好于單一使用某種消毒劑。本研究表明，先用0.25 g/L多菌靈浸泡45 min，然后用75%乙醇溶液消毒30 s，最后用0.1% HgCl2消毒6 min，是最好的迎紅杜鵑外植體消毒方式，該方式能保證較高的外植體成活率以及較低的褐化率、污染率。

迎紅杜鵑的最佳啟動培養(yǎng)基是Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。迎紅杜鵑是一種對培養(yǎng)基滲透壓反應(yīng)敏感的植物，鹽分濃度低及NH+4/NO-3高的基本培養(yǎng)基對迎紅杜鵑的培養(yǎng)效果較好，如本研究使用的1/4 MS、Read、WPM。Read培養(yǎng)基減少了NH4NO3、KNO3用量，加入（NH4）2SO4使 NH+4 ∶NO-3為1 ∶1，同時去除碘化鉀（KI），將培養(yǎng)基pH值降至5，更適于耐寒落葉杜鵑的培養(yǎng)^[12]。高濃度的ZT能夠很好地刺激杜鵑組培苗誘導(dǎo)出芽，增殖系數(shù)高；但其濃度過高時，培養(yǎng)的試管苗細弱，容易形成玻璃苗。

為了獲得大量組培苗，須要對芽誘導(dǎo)培養(yǎng)后獲得的芽體進行增殖培養(yǎng)。使用較高濃度的細胞分裂素和一定濃度的生長素能有效提高芽體的增殖速率，并獲得較高品質(zhì)的新芽，但此過程中必須控制好二者間的濃度關(guān)系。細胞分裂素濃度過高將會降低芽體質(zhì)量，從而抑制芽體的增殖效果。適合迎紅杜鵑增殖的培養(yǎng)基配方為Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。

要較低的培養(yǎng)基濃度和蔗糖濃度；也可采用組培苗瓶外微條扦插生根的方法，不僅能夠迅速擴大繁殖系數(shù)，而且能省去生根培養(yǎng)時間，提高商品化生產(chǎn)效率。

參考文獻：

[1]王守中. 杜鵑[M]. 上海：上海科技出版社，1989.

[2]劉茂成. 杜鵑的原種、園藝品種及科學(xué)施肥法[J]. 花卉，1998（3）：4.

[3]余樹勛. 杜鵑花[M]. 北京：金盾出版社，1992：66-67.

[4]徐 娟，田艷麗，趙麗波，等. 興安杜鵑、迎紅杜鵑播種繁殖技術(shù)的研究[J]. 國土與自然資源研究，2009（3）：87-88.

[5]郁書君. 華北鄉(xiāng)土杜鵑——迎紅杜鵑[J]. 中國花卉盆景，1992（7）：6.

[6]柏廣新，崔萬成，王永明. 中國長白山野生花卉[M]. 北京：中國林業(yè)出版社，2003：112-115.

[7]陳有民，王玉華，俞 玖，等. 迎紅杜鵑引種北京平原的研究[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報，1992，14（4）：111-118.

[8]朱春艷，李志炎，鮑淳松，等. 云錦杜鵑組培快繁技術(shù)研究[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報，2006，22（5）：335-337.

[9]郁永英，張志軍，劉桂英. 野生興安杜鵑和迎紅杜鵑的園林應(yīng)用[J]. 國土與自然資源學(xué)報，2009（3）：178-179.

[10]張曉雅，孫紅梅，田穎輝. 杜鵑組織培養(yǎng)技術(shù)研究進展[J]. 北方園藝，2006（4）：76-77.

[11]張艷紅. 我國杜鵑花的繁育研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（23）：7170-7171，7209.

[12]Economous A S，Read P E，Spanoudaki M J. Azalea regeneration from callus culture[J]. Acta Hortieuhurae，1988，226（1）：209-216.

迎紅杜鵑的最佳啟動培養(yǎng)基是Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。迎紅杜鵑是一種對培養(yǎng)基滲透壓反應(yīng)敏感的植物，鹽分濃度低及NH+4/NO-3高的基本培養(yǎng)基對迎紅杜鵑的培養(yǎng)效果較好，如本研究使用的1/4 MS、Read、WPM。Read培養(yǎng)基減少了NH4NO3、KNO3用量，加入（NH4）2SO4使 NH+4 ∶NO-3為1 ∶1，同時去除碘化鉀（KI），將培養(yǎng)基pH值降至5，更適于耐寒落葉杜鵑的培養(yǎng)^[12]。高濃度的ZT能夠很好地刺激杜鵑組培苗誘導(dǎo)出芽，增殖系數(shù)高；但其濃度過高時，培養(yǎng)的試管苗細弱，容易形成玻璃苗。

為了獲得大量組培苗，須要對芽誘導(dǎo)培養(yǎng)后獲得的芽體進行增殖培養(yǎng)。使用較高濃度的細胞分裂素和一定濃度的生長素能有效提高芽體的增殖速率，并獲得較高品質(zhì)的新芽，但此過程中必須控制好二者間的濃度關(guān)系。細胞分裂素濃度過高將會降低芽體質(zhì)量，從而抑制芽體的增殖效果。適合迎紅杜鵑增殖的培養(yǎng)基配方為Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。

要較低的培養(yǎng)基濃度和蔗糖濃度；也可采用組培苗瓶外微條扦插生根的方法，不僅能夠迅速擴大繁殖系數(shù)，而且能省去生根培養(yǎng)時間，提高商品化生產(chǎn)效率。

參考文獻：

[1]王守中. 杜鵑[M]. 上海：上海科技出版社，1989.

[2]劉茂成. 杜鵑的原種、園藝品種及科學(xué)施肥法[J]. 花卉，1998（3）：4.

[3]余樹勛. 杜鵑花[M]. 北京：金盾出版社，1992：66-67.

[4]徐 娟，田艷麗，趙麗波，等. 興安杜鵑、迎紅杜鵑播種繁殖技術(shù)的研究[J]. 國土與自然資源研究，2009（3）：87-88.

[5]郁書君. 華北鄉(xiāng)土杜鵑——迎紅杜鵑[J]. 中國花卉盆景，1992（7）：6.

[6]柏廣新，崔萬成，王永明. 中國長白山野生花卉[M]. 北京：中國林業(yè)出版社，2003：112-115.

[7]陳有民，王玉華，俞 玖，等. 迎紅杜鵑引種北京平原的研究[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報，1992，14（4）：111-118.

[8]朱春艷，李志炎，鮑淳松，等. 云錦杜鵑組培快繁技術(shù)研究[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報，2006，22（5）：335-337.

[9]郁永英，張志軍，劉桂英. 野生興安杜鵑和迎紅杜鵑的園林應(yīng)用[J]. 國土與自然資源學(xué)報，2009（3）：178-179.

[10]張曉雅，孫紅梅，田穎輝. 杜鵑組織培養(yǎng)技術(shù)研究進展[J]. 北方園藝，2006（4）：76-77.

[11]張艷紅. 我國杜鵑花的繁育研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（23）：7170-7171，7209.

[12]Economous A S，Read P E，Spanoudaki M J. Azalea regeneration from callus culture[J]. Acta Hortieuhurae，1988，226（1）：209-216.

迎紅杜鵑的最佳啟動培養(yǎng)基是Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。迎紅杜鵑是一種對培養(yǎng)基滲透壓反應(yīng)敏感的植物，鹽分濃度低及NH+4/NO-3高的基本培養(yǎng)基對迎紅杜鵑的培養(yǎng)效果較好，如本研究使用的1/4 MS、Read、WPM。Read培養(yǎng)基減少了NH4NO3、KNO3用量，加入（NH4）2SO4使 NH+4 ∶NO-3為1 ∶1，同時去除碘化鉀（KI），將培養(yǎng)基pH值降至5，更適于耐寒落葉杜鵑的培養(yǎng)^[12]。高濃度的ZT能夠很好地刺激杜鵑組培苗誘導(dǎo)出芽，增殖系數(shù)高；但其濃度過高時，培養(yǎng)的試管苗細弱，容易形成玻璃苗。

為了獲得大量組培苗，須要對芽誘導(dǎo)培養(yǎng)后獲得的芽體進行增殖培養(yǎng)。使用較高濃度的細胞分裂素和一定濃度的生長素能有效提高芽體的增殖速率，并獲得較高品質(zhì)的新芽，但此過程中必須控制好二者間的濃度關(guān)系。細胞分裂素濃度過高將會降低芽體質(zhì)量，從而抑制芽體的增殖效果。適合迎紅杜鵑增殖的培養(yǎng)基配方為Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。

要較低的培養(yǎng)基濃度和蔗糖濃度；也可采用組培苗瓶外微條扦插生根的方法，不僅能夠迅速擴大繁殖系數(shù)，而且能省去生根培養(yǎng)時間，提高商品化生產(chǎn)效率。

參考文獻：

[1]王守中. 杜鵑[M]. 上海：上海科技出版社，1989.

[2]劉茂成. 杜鵑的原種、園藝品種及科學(xué)施肥法[J]. 花卉，1998（3）：4.

[3]余樹勛. 杜鵑花[M]. 北京：金盾出版社，1992：66-67.

[4]徐 娟，田艷麗，趙麗波，等. 興安杜鵑、迎紅杜鵑播種繁殖技術(shù)的研究[J]. 國土與自然資源研究，2009（3）：87-88.

[5]郁書君. 華北鄉(xiāng)土杜鵑——迎紅杜鵑[J]. 中國花卉盆景，1992（7）：6.

[6]柏廣新，崔萬成，王永明. 中國長白山野生花卉[M]. 北京：中國林業(yè)出版社，2003：112-115.

[7]陳有民，王玉華，俞 玖，等. 迎紅杜鵑引種北京平原的研究[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報，1992，14（4）：111-118.

[8]朱春艷，李志炎，鮑淳松，等. 云錦杜鵑組培快繁技術(shù)研究[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報，2006，22（5）：335-337.

[9]郁永英，張志軍，劉桂英. 野生興安杜鵑和迎紅杜鵑的園林應(yīng)用[J]. 國土與自然資源學(xué)報，2009（3）：178-179.

[10]張曉雅，孫紅梅，田穎輝. 杜鵑組織培養(yǎng)技術(shù)研究進展[J]. 北方園藝，2006（4）：76-77.

[11]張艷紅. 我國杜鵑花的繁育研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（23）：7170-7171，7209.

[12]Economous A S，Read P E，Spanoudaki M J. Azalea regeneration from callus culture[J]. Acta Hortieuhurae，1988，226（1）：209-216.