苦荊茶多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響

王炫+雷桂蘭+吳中華+項(xiàng)俊+雷國(guó)濤

摘要：采用小鼠碳粒廓清試驗(yàn)和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)研究苦荊茶多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響。將試驗(yàn)小鼠分為3組，即空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（鹽酸左旋咪唑按22.5 mg/kg體重給藥）和苦荊茶多糖給藥組（苦荊茶多糖按4 g/kg體重給藥），給藥方式為灌胃給藥。7 d后，測(cè)定小鼠脾臟指數(shù)、碳粒廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能。結(jié)果表明，苦荊茶多糖給藥組和左旋咪唑給藥組小鼠的碳粒廓清指數(shù)、脾臟指數(shù)和吞噬指數(shù)均顯著（P<0.01或P<0.05）高于空白對(duì)照組，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組。說(shuō)明苦荊茶多糖具有增強(qiáng)小鼠機(jī)體免疫力的作用。

關(guān)鍵詞：苦荊茶多糖；碳粒廓清指數(shù)；脾臟指數(shù)；吞噬指數(shù)；腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能；小鼠

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）17-4123-03

Effects of Polysaccharide from Kujingcha on Immune Function of Mice

WANG Xuan1， LEI Gui-Lan1， WU Zhong-Hua1， XIANG Jun1， LEI Guo-tao2

（1. Hubei Key Laboratory of Economic Forest Germplsam Improvement and Resources Comprehensive Utilization/College of Life Scieces， Huanggang Normal University， Huanggang 438000， Hubei， China； 2.Kujingcha Farm of Baiyang Mountain Villa in Huilong Town， Tuanfeng County， Tuanfeng 438800， Hubei， China）

Abstract： Using carbon granules clearance test in mice and chicken RBC phagocytosis test of macrophage cell in abdominal， the effects of polysaccharide from Kujingcha on the immune functions of mice were studied. The mice were divided into 3 groups including blank control group， levamisole group， Kujingcha polysaccharide group and administrated normal saline， levamisole and Kujingcha polysaccharide with 0.6 mL， 22.5 mg per kg weight and 4 g per kg weight， respectively. After 7 days， the spleen index， carbon clearance rate， phagocytic index and monocytes-macrophages function were calculated. The results showed that the spleen index， carbon clearance rate， phagocytic index and in levamisole group and Kujingcha polysaccharide group were significantly or extreme significantly higher than that the in control group（P<0.01 or P<0.05）. The monocytes-macrophages function in Kujingcha polysaccharide group were significantly higher than that in control group（P<0.05）. It is indicated that Kujingcha polysaccharides could enhance the immune functions of mice.

Key words： Kujingcha polysaccharide； carbon clearance rate； spleen index； phagocytic index； monocytes-macrophages function； mice

苦荊茶屬冬青科植物，分布于大別山區(qū)。目前種植的苦荊茶樹種是于1967年由李樹文先生扦插育苗培育而成，因味極苦，茶樹葉緣生刺而得名[1]，又稱為黃岡苦丁茶。苦荊茶富含有人體需要的多種營(yíng)養(yǎng)成分和礦物質(zhì)元素，其中包括硒和鍺兩種抗癌微量元素；茶葉還含有豐富的多酚類物質(zhì)、皂甙、生物堿和多糖等藥用有機(jī)化合物，具有清熱解毒、降壓和降血脂等功效[2]。

植物多糖是一種廣泛存在于植物中的天然大分子物質(zhì)，由于其獨(dú)特的功能，近來(lái)被廣泛應(yīng)用于臨床來(lái)提高機(jī)體的免疫能力，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化作用，以調(diào)節(jié)生理功能。多糖類化合物作為免疫調(diào)節(jié)劑能激活淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞；還能激活補(bǔ)體，促進(jìn)細(xì)胞因子生成等多途徑對(duì)免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。本試驗(yàn)以苦荊茶粗多糖為材料，初步探討了苦荊茶多糖對(duì)小白鼠單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬功能的影響，旨在為苦荊茶的合理開發(fā)和利用提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

供試苦荊茶：試驗(yàn)用苦荊茶綠茶購(gòu)于湖北省團(tuán)風(fēng)縣回龍山鎮(zhèn)白羊山莊苦荊茶場(chǎng)。

主要試劑：95%乙醇、碳酸鈉均為AR試劑，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；瑞氏染液（生化試劑），上海研生生化試劑有限公司；鹽酸左旋咪唑片，山東仁和堂藥業(yè)有限公司（批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H37020819）。

主要儀器：RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），LD4-2A型離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠），SP-723PC型可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）。

試驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，體重18～25 g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。雞血紅細(xì)胞，由購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)家雞屠宰獲得。

1.2 方法

1.2.1 苦荊茶粗多糖的制備 將苦荊茶綠茶用粉粹機(jī)粉粹成粉末狀，然后用85%的乙醇浸提3次；取沉淀殘?jiān)看渭?倍的蒸餾水文火煎煮，煎煮3次，過(guò)濾去殘?jiān)瑸V液用30%的乙醇沉淀蛋白質(zhì)和淀粉類物質(zhì)，再次過(guò)濾收集上清液；將上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至浸膏狀，收集浸膏，即苦荊茶多糖和糖甙類物質(zhì)粗品。測(cè)定浸膏含水量，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 小鼠碳粒廓清試驗(yàn) 苦荊茶對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響采用小鼠碳粒廓清法[3，4]。將體重約18～25 g小鼠隨機(jī)分為3組，每組8只，雌雄各半。設(shè)立正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（鹽酸左旋咪唑按22.5 mg/kg體重給藥）、苦荊茶多糖給藥組（苦荊茶多糖按4 g/kg體重給藥）。灌胃給藥，每天1次，空白對(duì)照組小鼠按0.6 mL/只給予生理鹽水，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后稱鼠體重；末次給藥2 h后，每鼠尾靜脈注射8倍稀釋的印度墨汁0.1 mL/10 g體重；分別于第1分鐘和第3分鐘用毛細(xì)采血管在小鼠眼眶后靜脈叢取血20 μL溶于盛有2 mL 0.2%碳酸鈉溶液的試管內(nèi)。以0.2%碳酸鈉溶液作空白對(duì)照，于600 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A）。最后將小鼠頸椎脫臼處死，分別稱取肝、脾質(zhì)量，并計(jì)算脾臟指數(shù)、碳粒廓清指數(shù)（k）和吞噬指數(shù)（α）。

脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量（mg）/體重（g）

k=（logAl-logA2）/（t2-t1）

α=k1/3×體重/（肝重+脾重）

式中，t1、t2分別為注射印度墨汁后兩次采血時(shí)間，A1、A2分別為注射印度墨汁后第1分鐘和第3分鐘采血樣品經(jīng)處理后的吸光度。

1.2.3 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn) 雞血紅細(xì)胞制備：雞頸部靜脈采血，置于錐形瓶中，加入相當(dāng)于1/5血液量的5%檸檬酸鈉溶液搖勻，4 ℃貯存。臨用時(shí)用生理鹽水配成5%濃度。

苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響試驗(yàn)[5]：將體重約18～25 g小鼠隨機(jī)分為3組，即正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（鹽酸左旋咪唑按22.5 mg/kg體重給藥）、苦荊茶多糖給藥組（苦荊茶多糖按4 g/kg體重給藥）。每組8只，雌雄各半。灌胃給藥，每天1次，空白對(duì)照組小鼠按0.6 mL/只給予生理鹽水，連續(xù)給藥7 d。于第七天早上每鼠均腹腔注射5%雞紅細(xì)胞生理鹽水溶液0.5 mL，2 h后灌胃給藥，給藥2 h后，頸椎脫臼處死小鼠。腹腔注入生理鹽水2 mL，輕揉小鼠腹部，剖腹，吸出腹腔洗液1 mL，分滴于2片載玻片上，放濕盒內(nèi)，移至37 ℃溫箱孵育30 min，漂洗，晾干，以甲醛固定，瑞氏染色，油鏡下觀察100個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)算其吞噬率。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，組間多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)給藥前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦荊茶多糖對(duì)小鼠碳粒廓清能力的影響

采用小鼠碳粒廓清試驗(yàn)，檢測(cè)了苦荊茶多糖對(duì)小鼠單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果見表1。由表1可知，陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組小鼠對(duì)碳粒的廓清指數(shù)及脾臟指數(shù)均極顯著（P<0.01）高于空白對(duì)照組；單核巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)方面，陽(yáng)性藥物對(duì)照組極顯著（P<0.01）高于空白對(duì)照組，苦荊茶多糖給藥組顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組，而陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組之間無(wú)顯著性差異。說(shuō)明苦荊茶多糖能明顯增強(qiáng)小鼠的碳粒廓清能力。

2.2 苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

采用小鼠腹腔注射雞血紅細(xì)胞方法，檢測(cè)了苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果見表2。由表2可知，陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組；而陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組之間無(wú)顯著性差異。說(shuō)明苦荊茶多糖能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

3 小結(jié)與討論

多糖由單糖聚合而成，是聚合度超過(guò)10的極性大分子。由于多糖組分中單糖的種類繁多，連接形式千差萬(wàn)別，由此決定了多糖生物學(xué)活性的多樣性[6-8]，某些中藥多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)相似，但生物學(xué)活性差異很大，主要原因在于它們的二級(jí)結(jié)構(gòu)或三級(jí)結(jié)構(gòu)不同。高等動(dòng)物細(xì)胞表面分布有許多糖脂和糖蛋白，其多參與細(xì)胞識(shí)別和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)環(huán)節(jié)，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)生理生化活動(dòng)，多糖對(duì)哺乳動(dòng)物的免疫細(xì)胞功能有調(diào)節(jié)作用可能與細(xì)胞表面識(shí)別分子的化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)有關(guān)。

哺乳動(dòng)物的非特異性免疫系統(tǒng)中最重要的吞噬功能細(xì)胞是單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞，它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)既起著吞噬細(xì)菌、衰老細(xì)胞、病變細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞作用，還呈遞抗原、分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。本試驗(yàn)將提取的苦荊茶粗多糖以灌胃方式飼喂小鼠，然后檢測(cè)了小鼠對(duì)碳粒的廓清能力和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞血紅細(xì)胞的能力。結(jié)果表明，苦荊茶多糖給藥組小鼠的碳粒廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著（P<0.01或P<0.05）高于空白對(duì)照組，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞比率也顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組。表明苦荊茶多糖可提高小鼠的碳粒廓清能力，增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能，小鼠脾臟重量增加，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力增強(qiáng)。表明苦荊茶多糖能提高小鼠的非特異性免疫功能，長(zhǎng)期飲用苦荊茶可以提高人體的免疫機(jī)能，起到抗衰老的作用。

參考文獻(xiàn)：

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主要試劑：95%乙醇、碳酸鈉均為AR試劑，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；瑞氏染液（生化試劑），上海研生生化試劑有限公司；鹽酸左旋咪唑片，山東仁和堂藥業(yè)有限公司（批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H37020819）。

主要儀器：RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），LD4-2A型離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠），SP-723PC型可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）。

試驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，體重18～25 g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。雞血紅細(xì)胞，由購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)家雞屠宰獲得。

1.2 方法

1.2.1 苦荊茶粗多糖的制備 將苦荊茶綠茶用粉粹機(jī)粉粹成粉末狀，然后用85%的乙醇浸提3次；取沉淀殘?jiān)看渭?倍的蒸餾水文火煎煮，煎煮3次，過(guò)濾去殘?jiān)瑸V液用30%的乙醇沉淀蛋白質(zhì)和淀粉類物質(zhì)，再次過(guò)濾收集上清液；將上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至浸膏狀，收集浸膏，即苦荊茶多糖和糖甙類物質(zhì)粗品。測(cè)定浸膏含水量，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 小鼠碳粒廓清試驗(yàn) 苦荊茶對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響采用小鼠碳粒廓清法[3，4]。將體重約18～25 g小鼠隨機(jī)分為3組，每組8只，雌雄各半。設(shè)立正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（鹽酸左旋咪唑按22.5 mg/kg體重給藥）、苦荊茶多糖給藥組（苦荊茶多糖按4 g/kg體重給藥）。灌胃給藥，每天1次，空白對(duì)照組小鼠按0.6 mL/只給予生理鹽水，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后稱鼠體重；末次給藥2 h后，每鼠尾靜脈注射8倍稀釋的印度墨汁0.1 mL/10 g體重；分別于第1分鐘和第3分鐘用毛細(xì)采血管在小鼠眼眶后靜脈叢取血20 μL溶于盛有2 mL 0.2%碳酸鈉溶液的試管內(nèi)。以0.2%碳酸鈉溶液作空白對(duì)照，于600 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A）。最后將小鼠頸椎脫臼處死，分別稱取肝、脾質(zhì)量，并計(jì)算脾臟指數(shù)、碳粒廓清指數(shù)（k）和吞噬指數(shù)（α）。

脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量（mg）/體重（g）

k=（logAl-logA2）/（t2-t1）

α=k1/3×體重/（肝重+脾重）

式中，t1、t2分別為注射印度墨汁后兩次采血時(shí)間，A1、A2分別為注射印度墨汁后第1分鐘和第3分鐘采血樣品經(jīng)處理后的吸光度。

1.2.3 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn) 雞血紅細(xì)胞制備：雞頸部靜脈采血，置于錐形瓶中，加入相當(dāng)于1/5血液量的5%檸檬酸鈉溶液搖勻，4 ℃貯存。臨用時(shí)用生理鹽水配成5%濃度。

苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響試驗(yàn)[5]：將體重約18～25 g小鼠隨機(jī)分為3組，即正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（鹽酸左旋咪唑按22.5 mg/kg體重給藥）、苦荊茶多糖給藥組（苦荊茶多糖按4 g/kg體重給藥）。每組8只，雌雄各半。灌胃給藥，每天1次，空白對(duì)照組小鼠按0.6 mL/只給予生理鹽水，連續(xù)給藥7 d。于第七天早上每鼠均腹腔注射5%雞紅細(xì)胞生理鹽水溶液0.5 mL，2 h后灌胃給藥，給藥2 h后，頸椎脫臼處死小鼠。腹腔注入生理鹽水2 mL，輕揉小鼠腹部，剖腹，吸出腹腔洗液1 mL，分滴于2片載玻片上，放濕盒內(nèi)，移至37 ℃溫箱孵育30 min，漂洗，晾干，以甲醛固定，瑞氏染色，油鏡下觀察100個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)算其吞噬率。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，組間多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)給藥前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦荊茶多糖對(duì)小鼠碳粒廓清能力的影響

采用小鼠碳粒廓清試驗(yàn)，檢測(cè)了苦荊茶多糖對(duì)小鼠單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果見表1。由表1可知，陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組小鼠對(duì)碳粒的廓清指數(shù)及脾臟指數(shù)均極顯著（P<0.01）高于空白對(duì)照組；單核巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)方面，陽(yáng)性藥物對(duì)照組極顯著（P<0.01）高于空白對(duì)照組，苦荊茶多糖給藥組顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組，而陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組之間無(wú)顯著性差異。說(shuō)明苦荊茶多糖能明顯增強(qiáng)小鼠的碳粒廓清能力。

2.2 苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

采用小鼠腹腔注射雞血紅細(xì)胞方法，檢測(cè)了苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果見表2。由表2可知，陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組；而陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組之間無(wú)顯著性差異。說(shuō)明苦荊茶多糖能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

3 小結(jié)與討論

多糖由單糖聚合而成，是聚合度超過(guò)10的極性大分子。由于多糖組分中單糖的種類繁多，連接形式千差萬(wàn)別，由此決定了多糖生物學(xué)活性的多樣性[6-8]，某些中藥多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)相似，但生物學(xué)活性差異很大，主要原因在于它們的二級(jí)結(jié)構(gòu)或三級(jí)結(jié)構(gòu)不同。高等動(dòng)物細(xì)胞表面分布有許多糖脂和糖蛋白，其多參與細(xì)胞識(shí)別和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)環(huán)節(jié)，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)生理生化活動(dòng)，多糖對(duì)哺乳動(dòng)物的免疫細(xì)胞功能有調(diào)節(jié)作用可能與細(xì)胞表面識(shí)別分子的化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)有關(guān)。

哺乳動(dòng)物的非特異性免疫系統(tǒng)中最重要的吞噬功能細(xì)胞是單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞，它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)既起著吞噬細(xì)菌、衰老細(xì)胞、病變細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞作用，還呈遞抗原、分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。本試驗(yàn)將提取的苦荊茶粗多糖以灌胃方式飼喂小鼠，然后檢測(cè)了小鼠對(duì)碳粒的廓清能力和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞血紅細(xì)胞的能力。結(jié)果表明，苦荊茶多糖給藥組小鼠的碳粒廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著（P<0.01或P<0.05）高于空白對(duì)照組，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞比率也顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組。表明苦荊茶多糖可提高小鼠的碳粒廓清能力，增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能，小鼠脾臟重量增加，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力增強(qiáng)。表明苦荊茶多糖能提高小鼠的非特異性免疫功能，長(zhǎng)期飲用苦荊茶可以提高人體的免疫機(jī)能，起到抗衰老的作用。

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主要試劑：95%乙醇、碳酸鈉均為AR試劑，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；瑞氏染液（生化試劑），上海研生生化試劑有限公司；鹽酸左旋咪唑片，山東仁和堂藥業(yè)有限公司（批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H37020819）。

主要儀器：RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），LD4-2A型離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠），SP-723PC型可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）。

試驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，體重18～25 g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。雞血紅細(xì)胞，由購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)家雞屠宰獲得。

1.2 方法

1.2.1 苦荊茶粗多糖的制備 將苦荊茶綠茶用粉粹機(jī)粉粹成粉末狀，然后用85%的乙醇浸提3次；取沉淀殘?jiān)看渭?倍的蒸餾水文火煎煮，煎煮3次，過(guò)濾去殘?jiān)瑸V液用30%的乙醇沉淀蛋白質(zhì)和淀粉類物質(zhì)，再次過(guò)濾收集上清液；將上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至浸膏狀，收集浸膏，即苦荊茶多糖和糖甙類物質(zhì)粗品。測(cè)定浸膏含水量，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 小鼠碳粒廓清試驗(yàn) 苦荊茶對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響采用小鼠碳粒廓清法[3，4]。將體重約18～25 g小鼠隨機(jī)分為3組，每組8只，雌雄各半。設(shè)立正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（鹽酸左旋咪唑按22.5 mg/kg體重給藥）、苦荊茶多糖給藥組（苦荊茶多糖按4 g/kg體重給藥）。灌胃給藥，每天1次，空白對(duì)照組小鼠按0.6 mL/只給予生理鹽水，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后稱鼠體重；末次給藥2 h后，每鼠尾靜脈注射8倍稀釋的印度墨汁0.1 mL/10 g體重；分別于第1分鐘和第3分鐘用毛細(xì)采血管在小鼠眼眶后靜脈叢取血20 μL溶于盛有2 mL 0.2%碳酸鈉溶液的試管內(nèi)。以0.2%碳酸鈉溶液作空白對(duì)照，于600 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A）。最后將小鼠頸椎脫臼處死，分別稱取肝、脾質(zhì)量，并計(jì)算脾臟指數(shù)、碳粒廓清指數(shù)（k）和吞噬指數(shù)（α）。

脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量（mg）/體重（g）

k=（logAl-logA2）/（t2-t1）

α=k1/3×體重/（肝重+脾重）

式中，t1、t2分別為注射印度墨汁后兩次采血時(shí)間，A1、A2分別為注射印度墨汁后第1分鐘和第3分鐘采血樣品經(jīng)處理后的吸光度。

1.2.3 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn) 雞血紅細(xì)胞制備：雞頸部靜脈采血，置于錐形瓶中，加入相當(dāng)于1/5血液量的5%檸檬酸鈉溶液搖勻，4 ℃貯存。臨用時(shí)用生理鹽水配成5%濃度。

苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響試驗(yàn)[5]：將體重約18～25 g小鼠隨機(jī)分為3組，即正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（鹽酸左旋咪唑按22.5 mg/kg體重給藥）、苦荊茶多糖給藥組（苦荊茶多糖按4 g/kg體重給藥）。每組8只，雌雄各半。灌胃給藥，每天1次，空白對(duì)照組小鼠按0.6 mL/只給予生理鹽水，連續(xù)給藥7 d。于第七天早上每鼠均腹腔注射5%雞紅細(xì)胞生理鹽水溶液0.5 mL，2 h后灌胃給藥，給藥2 h后，頸椎脫臼處死小鼠。腹腔注入生理鹽水2 mL，輕揉小鼠腹部，剖腹，吸出腹腔洗液1 mL，分滴于2片載玻片上，放濕盒內(nèi)，移至37 ℃溫箱孵育30 min，漂洗，晾干，以甲醛固定，瑞氏染色，油鏡下觀察100個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)算其吞噬率。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，組間多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)給藥前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦荊茶多糖對(duì)小鼠碳粒廓清能力的影響

采用小鼠碳粒廓清試驗(yàn)，檢測(cè)了苦荊茶多糖對(duì)小鼠單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果見表1。由表1可知，陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組小鼠對(duì)碳粒的廓清指數(shù)及脾臟指數(shù)均極顯著（P<0.01）高于空白對(duì)照組；單核巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)方面，陽(yáng)性藥物對(duì)照組極顯著（P<0.01）高于空白對(duì)照組，苦荊茶多糖給藥組顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組，而陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組之間無(wú)顯著性差異。說(shuō)明苦荊茶多糖能明顯增強(qiáng)小鼠的碳粒廓清能力。

2.2 苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

采用小鼠腹腔注射雞血紅細(xì)胞方法，檢測(cè)了苦荊茶多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果見表2。由表2可知，陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組；而陽(yáng)性藥物對(duì)照組和苦荊茶多糖給藥組之間無(wú)顯著性差異。說(shuō)明苦荊茶多糖能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

3 小結(jié)與討論

多糖由單糖聚合而成，是聚合度超過(guò)10的極性大分子。由于多糖組分中單糖的種類繁多，連接形式千差萬(wàn)別，由此決定了多糖生物學(xué)活性的多樣性[6-8]，某些中藥多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)相似，但生物學(xué)活性差異很大，主要原因在于它們的二級(jí)結(jié)構(gòu)或三級(jí)結(jié)構(gòu)不同。高等動(dòng)物細(xì)胞表面分布有許多糖脂和糖蛋白，其多參與細(xì)胞識(shí)別和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)環(huán)節(jié)，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)生理生化活動(dòng)，多糖對(duì)哺乳動(dòng)物的免疫細(xì)胞功能有調(diào)節(jié)作用可能與細(xì)胞表面識(shí)別分子的化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)有關(guān)。

哺乳動(dòng)物的非特異性免疫系統(tǒng)中最重要的吞噬功能細(xì)胞是單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞，它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)既起著吞噬細(xì)菌、衰老細(xì)胞、病變細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞作用，還呈遞抗原、分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。本試驗(yàn)將提取的苦荊茶粗多糖以灌胃方式飼喂小鼠，然后檢測(cè)了小鼠對(duì)碳粒的廓清能力和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞血紅細(xì)胞的能力。結(jié)果表明，苦荊茶多糖給藥組小鼠的碳粒廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著（P<0.01或P<0.05）高于空白對(duì)照組，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞比率也顯著（P<0.05）高于空白對(duì)照組。表明苦荊茶多糖可提高小鼠的碳粒廓清能力，增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能，小鼠脾臟重量增加，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力增強(qiáng)。表明苦荊茶多糖能提高小鼠的非特異性免疫功能，長(zhǎng)期飲用苦荊茶可以提高人體的免疫機(jī)能，起到抗衰老的作用。

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