著色性干皮病一家系的XP基因突變檢測

張正中 牟韻竹 楊浩 楊萍 劉一平 唐芹芹 劉林莉 陳星 眭維恥

【摘要】 目的檢測1個著色性干皮病家系的XPA和XPC基因突變。方法收集1個著色性干皮病家系的臨床資料，采集先證者及其家庭成員的外周血標本，提取外周血白細胞中的DNA，采用PCR反應擴增XPA和XPC所有外顯子編碼區(qū)及其側翼序列，通過對PCR反應產(chǎn)物直接測序進行序列分析。結果該著色性干皮病家系未發(fā)現(xiàn)XPA和XPC的致病性基因突變。結論盡管XPA和XPC是國內(nèi)比較常見的著色性干皮病亞型，但該家系可能屬于其他的亞型。

【關鍵詞】著色性干皮病；突變；XPA ；XPC

【Abstract】Objectives To identify pathogenic mutation of the XPA and XPC gene in one familial cases of xeroderma pigmentosum.

MethodsWe collected blood samples and clinical data from one familial cases of xeroderma pigmentosum. Genomic DNA was extracted from peripheral blood. All the coding exons and exon-intron flanking sequences of XPA and XPC gene were amplified by polymerase chain reaction and products were analyzed by direct sequencing.

ResultsNo XPA and XPC pathogenic mutation was found in this family with xeroderma pigmentosum.

ConclusionsAlthough XPA and XPC is a more common subtypes with xeroderma pigmentosum in the domestic, but this family may be other subtypes.

【key words 】 Xeroderma Pigmentosum / XPA / XPC / mutation

【中圖分類號】R722.12 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949(2014)07-0038-02

著色性干皮病（Xeroderma Pigmentosum，XP）是一種極其少見的常染色體隱性遺傳性損容性皮膚病，嚴重危害患者身心健康。1870年由匈牙利裔的皮膚病教授Kaposi首先描述，1882年命名［1］。其主要臨床特征為皮膚對日光、特別是紫外線高度敏感，皮膚干燥脫屑，雀斑樣色素沉著，皮膚易癌變。XP已發(fā)現(xiàn)7組互補型(XPA、XPB、XPC、XPD、XPE、XPF、XPG)和1種變異型(XPV），遺傳互補分析研究表明，XP互補組的分布有一定的地區(qū)性，日本人A組最多，歐美國家C組和D組分布較廣泛，中國人C組居多［2］。XP(A—G)和XPV基因已經(jīng)被全部定位克隆。本文對XP 1個家系進行XPA和XPC基因的突變檢測。

1、 材料與方法

1.1 臨床資料

收集來自四川的1個著色性干皮病家系的臨床資料。先證者呂小會，女，18歲。因暴光部位起色斑15年，顏面變形6年就診。患者出生時膚色無明顯異常，15年前（2、3歲時）患者暴光部位開始起點狀色斑，后皮疹緩慢逐年增多，變密集，為褐色或黑色斑點、斑片。病程日久，遮蓋部位亦出現(xiàn)類似色斑，皮疹小、色淡，日曬或勞累后病變加重。6年前患者顏面出現(xiàn)變形，面部中央出現(xiàn)色素減退、皮膚萎縮。雙眼視力下降，眼裂縮小。讀小學時成績中上，無明顯智力障礙，有月經(jīng)紊亂史。其父母有近親婚配史，系表兄妹結婚。其哥亦是2、3歲發(fā)病，患病過程與患者相似，但較重，且出現(xiàn)瘤樣損害，19歲因該病去世，死于皮膚鱗癌。其姐24歲，系當?shù)蒯t(yī)生，未見發(fā)病(圖1)。皮膚科情況：皮損分布于全身，以暴露部位為重。全身可見雀斑樣損害，以顏面、雙手足明顯，為密集褐色或黑色斑點、斑片，位于深褐色皮膚上。面部中央見色素減退斑片、皮膚萎縮。雙眼裂縮小，眼球粘連，肉芽增生，視力下降。口唇干燥，閉口不嚴（圖2）。全身皮膚干燥，未見瘤狀損害。病理活檢示角化過度，表皮細胞排列紊亂，棘細胞不規(guī)則增生，基底層色素不規(guī)則聚集（圖3）。

圖1 家系圖

圖2 臨床照片 圖3皮膚組織病理HE×100

1.2 標本采集

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意，患者及其家屬簽署知情同意書。抽取該著色性干皮病家系中先證者及其父母、姐姐的外周靜脈血各5mL于EDTA（乙二胺四乙酸）抗凝管中。血樣置于－18℃冰箱保存。

1.3DNA提取

采用鹽析法提取研究對象基因組DNA，并以100例無親屬關系正常人的基因組DNA作為對照，以排除可能存在的基因多態(tài)性。

1.4 引物設計

采用Primer 5.0引物設計軟件針對XPA和XPC所有外顯子設計引物，擴增序列包括整個外顯子及超出目標序列邊界（內(nèi)含子內(nèi)）50bp的序列。所有引物均由上海生工生物工程有限公司合成，引物采用PAGE膠純化后稀釋為20μmol/L備用。

1.5PCR擴增、產(chǎn)物純化

配制PCR反應體系，設定PCR反應條件，使用PCR反應擴增儀（加拿大BBI公司）進行PCR擴增，PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，采用Exon I和SAP 酶切純化，將純化產(chǎn)物進行測序PCR 反應，反應后再進行測序前純化。

1.6 直接測序

擴增產(chǎn)物純化后送至上海生工生物工程有限公司, 經(jīng)3730測序列分析儀(美國ABI公司)直接測序。測序結果采用Chromas2.0軟件對基因序列進行對比分析,確定有無突變位點。

2、 結果

該著色性干皮病家系未檢測出XPA和XPC的致病性基因突變。

3、 討論

著色性干皮病（xeroderma pigmentosum,XP；OMIM 278700)是一種罕見的常染色體隱性遺傳性皮膚病，嚴重影響美觀，危及生命。我國XP發(fā)病率約為1/25萬，患者雙親多有近親婚配史。臨床以易發(fā)生光損傷和日光誘發(fā)的皮膚癌為其特征，表現(xiàn)為皮膚干燥脫屑、雀斑樣損害、皮膚腫瘤。研究表明該病主要是由編碼參與DNA損傷修復系統(tǒng)中各個環(huán)節(jié)蛋白的基因發(fā)生突變,導致DNA損傷修復系統(tǒng)缺陷所致［3］。

XP已發(fā)現(xiàn)7個互補組（XPA-G）和1個變異型（XPV），我國C組多見，其次為A組。XP(A—G)和XPV致病基因已經(jīng)被全部定位克隆，XP(A—G)與核苷酸切除修復缺陷有關，XPV與跨損傷合成缺陷有關［3］。XP臨床分型存在困難，XP基因診斷是XP診斷及分型的金標準。北京大學第一醫(yī)院發(fā)現(xiàn)2個XPAC基因的無義突變［4,5］，并對其中1個XP家系成功實施產(chǎn)前診斷［6］。我們據(jù)先證者曝光部位雀斑樣色素斑點，其哥有類似病史，死于皮膚鱗癌，其父母有近親婚配史，系表兄妹結婚，確診1個四川XP家系。對該家系先證者進行XPA和XPC基因突變檢測，結果未發(fā)現(xiàn)致病性基因突變。分析認為盡管XPA和XPC是國內(nèi)比較常見的著色性干皮病亞型，但該家系可能屬于其他的亞型。

目前國際上對XP進行了一些基因治療方面的研究，如利用基因糾正過的患者角質(zhì)形成細胞體外構建表皮層并移植到病變區(qū)域，局部應用DNA修復酶或激活殘存DNA修復能力的藥物改善DNA修復能力［7］。產(chǎn)前診斷是目前防治著色性干皮病的最有效手段，采用新的基因產(chǎn)前診斷技術取代以往對胎兒創(chuàng)傷性的皮膚活檢，可以減少母體創(chuàng)傷和流產(chǎn)率，降低患者發(fā)生率，提高人口素質(zhì)。開展遺傳咨詢，禁止近親結婚［8］，早期進行基因診斷與產(chǎn)前診斷，正確指導婚育、生育，并行嚴格防護措施（遮光），可明顯改善預后，優(yōu)生優(yōu)育。

參考文獻

［1］ Thomas B Fifzpgtuick. Dermatology in general Medicine［M］. New York: Future Publishing Company, 1971:436.

［2］ 墻克信，章?lián)P培，韓振波等．中國人著色性干皮病遺傳互補組分析．中華醫(yī)學遺傳學雜志［J］，1999，16（5）:285-288.

［3］ 侯艷霞，張學軍，楊森．著色性干皮病發(fā)病機制的研究進展．國外醫(yī)學皮膚性病學分冊，2005，31（4）:241-243.

［4］ 楊勇，卜定方，汪科等.A型著色性干皮病中XPAC基因的無義突變.中華皮膚科雜志［J］，2003，36（4）：189-191.

［5］ 蔡東華，林志淼，張黎黎等.A型著色性干皮病1例XPAC基因的復合無義突變.中國皮膚性病學雜志［J］，2007，21(5): 260–262.

［6］ YANG Y, Ding B, Wang K et al．DNA-based prenatal diagnosis in a Chinese family with xeroderma pigmentosum group A. British Journal of Dermatology 2004; 150(6):1190-1193

［7］ 肖明，郭澍，金石峰．著色性干皮病臨床治療的研究進展．醫(yī)學綜述，2010，16（24）:3760-3762.

［8］ 肖生祥,楚雍烈,劉艷等.著色性干皮病39例臨床分析［J］.中國皮膚性病學雜志,2005, 19(10):607.