槲白合劑對(duì)小鼠白色念珠菌陰道炎的療效及體外殺菌效果

姜妍　金玲　王妍　韓淑英

摘 要：目的 觀察槲白合劑體內(nèi)對(duì)小鼠念珠菌性陰道炎的療效及體外殺菌效果。方法 體外測(cè)定槲白合劑對(duì)白色念珠菌的最小殺菌濃度（MBC）；體內(nèi)觀察小鼠陰道分泌物念珠菌轉(zhuǎn)陰率、陰道灌洗液載菌量。結(jié)果 槲白合劑對(duì)白色念珠菌的MBC為1.30 mg/ml，槲白合劑與氟康唑效價(jià)比MBC為1∶1；槲白合劑及氟康唑可使白色念珠菌轉(zhuǎn)陰率增加及載菌量減少，具有劑量依賴性，其高劑量與氟康唑相近。結(jié)論 槲白合劑對(duì)小鼠白色念珠菌性陰道炎有較好的療效，體外具有明顯的殺菌作用。

關(guān)鍵詞：槲白合劑 白色念珠菌 陰道炎

中圖分類號(hào)：R285.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2014）08（a）-0201-01

1 材料

雌性SPF級(jí)昆明小鼠（北京華阜康生物科技股份有限公司）；槲皮素、白藜蘆醇單體粉末（98%，Sigma公司）；唐山市開灤醫(yī)院檢驗(yàn)科提供白色念珠菌臨床新分離菌株。

2 方法

2.1 體外MBC測(cè)定

每一藥液挑選10支無菌試管，采用二倍連續(xù)稀釋法，不加菌作陰性對(duì)照，第10管只加菌液。各管取10ul接種到沙堡氏瓊脂上，48 h。無菌生長(zhǎng)，且含藥濃度最低的管，即為MBC。

2.2 分組與給藥

（1）正常對(duì)照組；白色念珠菌性陰道炎小鼠隨機(jī)分5組；（2）模型對(duì)照組；（3）氟康唑治療組，（4）～（6）為槲白合劑低、中、高（L-槲白合劑、M-槲白合劑、H-槲白合劑）劑量組，分別按0.1 ml/10 g經(jīng)陰道灌注給藥，給藥量依次為40、80、160 mg/kg；n=12，各組均給藥7 d，1/日。

2.3 體內(nèi)陰道灌洗液檢測(cè)

各組小鼠均于給藥第0、5、8 d用100 ul PBS灌洗陰道5～6次，取10 μl，鏡檢，未檢出芽生孢子及菌絲者標(biāo)為“-”陰性，轉(zhuǎn)陰小鼠數(shù)/該組小鼠總數(shù)為轉(zhuǎn)陰率；取200倍比稀釋灌洗液20μl分別接種于2沙堡氏培養(yǎng)基上，37 ℃，48 h，計(jì)菌落數(shù)，求出同一標(biāo)本平均菌落數(shù)X，計(jì)算菌落形成單位（CFU） CFU/ml標(biāo)本=X×1/0.020×稀釋度×1/標(biāo)本體積[1]。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS16.0軟件，計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用c2檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 體外抗白色念珠菌的MBC

槲白合劑MBC為1.30 mg/ml；氟康唑MBC為1.31 mg/ml，槲白合劑與氟康唑的效價(jià)比為1∶1。

3.2 體內(nèi)結(jié)果

3.2.1 各組白色念珠菌轉(zhuǎn)陰數(shù)及轉(zhuǎn)陰率

給藥后第5、8天，槲白合劑隨著劑量的增加，真菌孢子轉(zhuǎn)陰數(shù)及轉(zhuǎn)陰率也增加，其中高劑量組與氟康唑組相近。（表1）

3.2.2 各組白色念珠菌載菌量（CFU）

用藥5和8 d后，各給藥組CFU值有不同程度的降低，以氟康唑組降低最明顯，治療8 d后效果更好；槲白合劑各劑量組均能降低陰道灌洗液菌落計(jì)數(shù)均值，隨著槲白合劑劑量的增高，陰道灌洗液菌落計(jì)數(shù)逐漸下降，且高劑量組作用更顯著（P<0.01）。（表2）

4 討論

白念珠菌是人類常見的真菌病原體之一。由于臨床上抗真菌藥物的大量使用，使真菌產(chǎn)生耐藥性的情況日益嚴(yán)重，因此亟需研發(fā)高效低毒的抗真菌藥物。我國(guó)醫(yī)藥學(xué)研究者開始關(guān)注中藥的抗真菌作用，并取得可喜成果[2]。本研究槲皮素與白藜蘆醇均為黃酮類成分，具有抗細(xì)菌、抗病毒、抗氧化等多種藥理作用。但有關(guān)槲皮素與白藜蘆醇聯(lián)合應(yīng)用抗真菌作用未見報(bào)道。

本研究體外抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果：槲白合劑對(duì)白色念珠菌的MBC是1.30 mg/ml，槲白合劑與對(duì)照藥氟康唑的效價(jià)比MBC是1∶1，表明槲白合劑有較強(qiáng)的殺滅真菌作用，與氟康唑相近；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)通過對(duì)小鼠陰道沖洗液念珠菌鏡檢轉(zhuǎn)陰率和載菌量等綜合指標(biāo)，分析了槲白合劑對(duì)小鼠白色念珠菌陰道炎的治療作用。結(jié)果表明，與模型組和給藥前比較，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，癥狀逐漸好轉(zhuǎn)，念珠菌轉(zhuǎn)陰率增高，載菌量下降，有明顯的量效關(guān)系，高劑量與氟康唑似。

參考文獻(xiàn)

[1] [Fidel Jr，Paul L，Cutright J，Steele C.Effects of Reproductive Hormones on Experimental Vaginal Candidiasis[J].Infect Immun，2000，68（2）：651-657.

[2] 萬江帆，唐春萍，沈志濱，等.中藥單體聯(lián)用抗真菌藥物抗耐藥白色念珠菌的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2014，19（1）：35-37.