不同產地黑老虎根薄層色譜研究

黃小春 蔣掬月

1.廣西方略集團龍州制藥有限公司，廣西 崇左 532400;2.廣西方略藥業集團有限公司，廣西 南寧 530221

黑老虎根系木蘭科植物厚葉五味子Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith的干燥根，別名冷飯團、緋紅南五味子、過山龍藤等，主要分布于廣西、廣東、云南、貴州等地[1]。根據文獻[2，3]，黑老虎根的主要有效成分為聯苯環辛二烯類木脂素，其中有許多成分也為五味子屬植物的共有成分，如五味子素類，戈米辛類等。其性味苦、溫，功能行氣活血、消脹止痛、祛風活絡，民間常用于治療慢性胃炎、急性胃腸炎、風濕痹痛、跌打損傷和骨折等。黑老虎根質量標準收載于《中國藥典》77年版一部，項下僅有化學顯色鑒別，專屬性不強，為了更好的控制藥材質量，本文采用薄層色譜法對不同產地的黑老虎根藥材進行定性鑒別研究，為提高藥材質量標準提供依據。

1 材料及方法

1.1 實驗材料 黑老虎根，來源于廣西龍州、廣東清遠、云南文山和貴州都勻，購自玉林鑫康藥材有限公司，經廣西中醫學院藥用植物教研室劉壽養副教授鑒定均為木蘭科植物厚葉五味子 Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith的干燥根;黑老虎根對照藥材，批號:121438-200401，購自中國藥品生物制品檢定所;硅膠H，薄層層析用，青海海洋化工廠;實驗所用試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的制備 取廣西龍州的黑老虎根藥材粉末2g，加95﹪乙醇25ml，加熱回流30min，濾過，將濾過液均分為二份:①一份濃縮至2ml，備用;②另一份將濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，備用。將這兩種方法處理得到的提取液經薄層色譜展開，結果:方法①溶出的物質較多，拖尾，分離效果差。方法②樣品醇提液經三氯甲烷處理后得到了精制，斑點清晰，雜質干擾少，無明顯拖尾，因此選擇方法②。

1.2.2 對照藥材溶液的制備 取黑老虎根對照藥材2g，加95﹪乙醇25ml，加熱回流30min，濾過，濾液按“1.2.1供試品溶液的制備”項下的方法②，同法制成對照藥材溶液。

1.2.3 展開劑的選擇 參考文獻[4]關于五味子的鑒別方法，主要試驗了①甲苯–乙酸乙酯 (9∶1)，展開后，分離出的斑點不夠圓整，比移值太小，沒有得到很好分離;②甲苯–乙酸乙酯 (6∶4)，主斑點間沒有分開，且主斑點下方有拖尾;③甲苯–乙酸乙酯 (7∶3)，展開后，分離出的斑點較圓整，且主斑點的上、下方未見明顯拖尾，比移值適中，因此選擇此組展開系統。

1.2.4 顯色劑的選擇 曾噴以10﹪磷鉬酸乙醇溶液，加熱顯色，因其底色過重，不好觀察，改用碘蒸氣顯色，顯清晰棕黃色斑點。

1.2.5 點樣量的選擇 對點樣量2、4、6、8μl進行考察，隨著點樣量依次增大，展開顯色后的斑點顏色逐漸加深，但點樣量增至8μl時，分離度有所下降，拖尾現象逐漸顯現;采用2μl點樣量時，展開顯色后的斑點顏色淺，不易觀察;采用4、6μl點樣量，展開顯色后，斑點清晰，分離效果好，綜合考慮，確定點樣量為4～6μl。

1.2.6 樣品的檢查 分別取四個產地的藥材粉末，按上述方法制成供試品溶液，以黑老虎根對照藥材制成對照藥材溶液，按上述篩選出的薄層色譜條件進行檢查，觀察其薄層色譜圖。

2 結果

2.1 四個產地黑老虎根薄層色譜圖譜顯示，各供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖1。

2.2 綜合上述實驗結果，擬定本品的薄層鑒別方法為:取黑老虎根藥材粉末2g，加95﹪乙醇25ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液，另取黑老虎根對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法 (中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述兩種溶液各4～6μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以甲苯–乙酸乙酯 (7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點。

3 討論

3.1 當環境濕度小于75﹪時，斑點間界限模糊，分離不好，而濕度大于75%時，各斑點有較好的分離度，展出的斑點清晰、圓整，因此，在進行該項檢查時，要求控制相對濕度大于75%。

3.2 因為所用黑老虎根藥材來自不同產地，其供試液主要成分含量肯定有所差異，在實驗過程中，發現廣西龍州藥材的得膏率較廣東、云南和貴州三地的高，故將點樣量的范圍定在4～6μl之間，此時在薄層板上可獲得滿意的層析結果。

[1]江蘇新醫學院 .中藥大辭典 [M].上海:上海人民出版社，1977:1151.

[2]艾菁，李于善.冷飯團化學成分及其活性研究進展[J].化學與生物工程，2005，(2):7–9.

[3]陳業高，李國寶，張燕.云南產五味子科藥用植物化學成分研究進展[J].云南化工，2003，30(3):53-57.

[4]呂武清，龍新華.中成藥的藥材薄層色譜鑒別[M].北京:人民衛生出版社，1996:124-125.