氣相色譜法測定奧美拉唑中三乙胺殘留

姜小林 傅志慧 應志洪 吳寧蘋

（浙江省金華康恩貝生物制藥有限公司，浙江 金華 321016）

三乙胺（triethylamine）是一種毒性較大的有機溶劑。美國藥典和中國藥典并沒有將其列入毒性有機溶劑控制范圍，但歐洲藥品質量委員會（EDQM）特別規定了三乙胺的限度（質量分數0.32×10-3），要求生產企業在藥品質量中進行嚴格控制。奧美拉唑的生產工藝中使用三乙胺調整pH，因此三乙胺將列入有機殘留檢測。

目前國內外文獻中均沒有關于奧美拉唑及結構相似的其他藥物中三乙胺的檢測報道。常規的頂空進樣法可以快速地檢測三乙胺[1]。但硅鋼類金屬轉移管路對三乙胺有吸附作用，安捷倫等公司的絕大多數氣相色譜儀不適用于三乙胺的頂空方法檢測。因此應研究一種可靠適應的方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

Agilent 7890氣相色譜儀（FID檢測器）；三乙胺、正庚烷和甲苯，均為色譜純；氫氧化鈉為分析純；奧美拉唑原料由浙江金華某公司生產。

1.2 色譜條件及系統適用性實驗

色譜柱：Agilent HP-INNOWAX毛細管色譜柱（30 m×0.53 mm×φ1.0 μm，聚乙二醇 20000）；程序升溫（初始溫度為40℃，保持10 min，再以30℃/min的速率升至200℃，保持3 min）；載氣為氮氣 （恒流），體積流量4.0 mL/min；分流體積比20:1；進樣口溫度200℃，FID檢測器溫度250℃，進樣量1 μL。注入對照液，三乙胺峰與正庚烷峰之間的分離度不大于2.0，柱效不得低于5 000；拖尾因子不得大于1.5；重復進樣5次，相對標準偏差不大于5.0%。

1.3 測定方法

內標溶液的配制：精密移取正庚烷0.5 mL，用甲苯稀釋至100 mL；精密移取1.0 mL加甲苯稀釋至100 mL。

三乙胺標準貯備液的配制：精密稱取三乙胺對照品約0.1 g，用水稀釋至100 mL。精密量取1 mL該液，用水稀釋至10 mL。

對照溶液的配制：精密移取三乙胺標準貯備溶液1 mL，置10 mL具塞試管中，加入2 mL濃度0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液，加入2 mL內標溶液，振搖2 min后，取上清液。

樣品溶液的配制：精密稱取奧美拉唑約0.3 g置10 mL具塞試管中，加入2 mL濃度0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液超聲溶解，加入1 mL水，加入2 mL內標溶液，振搖2 min后，取上清液。

空白溶液：取1 mL水置10 mL具塞試管中，按對照溶液同法操作。

三乙胺測定：精密吸取按上述方法配制的對照溶液和樣品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按內標法計算奧美拉唑原料中的三乙胺含量。

2 結果與討論

2.1 系統適用性考察

取1.3節中配制的空白溶液和對照溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。

圖1 系統適用性色譜Fig 1 GC chromatograms for system suitability test

圖1結果表明，空白溶劑不干擾三乙胺的測定。三乙胺峰的理論板數為6179，拖尾因子為1.4，與正庚烷的分離度為5.34，符合系統適用性要求。

2.2 線性關系

分別移取三乙胺對照品適量，加水逐步稀釋成不同質量濃度的三乙胺標準液（4.8～143.6 μg/mL），移取1 mL上述各溶液，按1.3節中方法配制成不同含量的對照液。分取1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以質量濃度對三乙胺與正庚烷峰面積之比作線性回歸，得回歸方程為（R=0.998 9）：

A/mm2=[0.010 7ρ/(μg·mL-1)]-0.017 6。經實驗，三乙胺在質量濃度4.8～143.6 μg/mL內與峰面積比呈良好的線性關系。

2.3 精密度

精密稱取奧美拉唑原料6份，按1.3節中方法操作，以不同人員在不同時間用不同儀器分別測定，結果實驗者1測得奧美拉唑中三乙胺的質量分數為40×10-6（RSD為4.6%），實驗者2測得奧美拉唑中三乙胺質量分數為39×10-6（RSD為3.7%）。12份檢測結果的RSD為4.3%。

2.4 回收率

精密稱取9份奧美拉唑原料置10 mL具塞試管中，每份約 0.3 g（其中三乙胺為 12.0 μg），加入 2 mL濃度0.5 mol/L氫氧化鈉溶液超聲溶解。分別加入1 mL的50%、100%、150%三乙胺標準貯備液，按1.3節中樣品溶液配制。量取上述溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，根據色譜檢測結果計算三乙胺的回收量。結果見表1。

表1 回收率測定結果Tab 1 Recovery rate test results

由表1可知，平均回收率為99.5%、平均RSD為2.2%，表明該法有良好的回收率。

2.5 檢測限與定量限

精密稱取三乙胺對照品約0.1 g，加水逐步稀釋成2.1 μg.mL-1的溶液，按1.3節中對照溶液配制。取1 μL 注入氣相色譜儀，測得信噪比（S/N）為 3，對應的檢測限為 7×10-6。

精密稱取三乙胺對照品約0.1 g，加水逐步稀釋成6.3 μg/mL的溶液，按1.3節中對照溶液配制。取1 μL注入氣相色譜儀，測得信噪比（S/N）為 10，對應的定量限為 21×10-6。

2.6 討論

1)色譜柱的選擇。三乙胺極性較大，色譜峰容易拖尾，影響檢測結果的準確性。經安捷倫公司的HP-5、DB 624、HP-INNOWAX 等毛細管色譜柱實驗，三乙胺在HP-INNOWAX色譜柱中洗脫時間短，峰形尖銳，柱效和靈敏度比其他兩款色譜柱高，實際選擇HP-INNOWAX毛細管色譜柱，典型色譜圖見圖1(b)。

2)萃取劑的確定。奧美拉唑在稀氫氧化鈉溶液中易溶解，不溶于甲苯；三乙胺微溶于氫氧化鈉溶液，易溶于甲苯，因此選用甲苯作為三乙胺的萃取劑。

3)內標物的確定。三乙胺的沸點為89.5℃，選用極性相似、沸點較近的正己烷（沸點為68.7℃）和正庚烷（沸點為98.5℃）進行實驗。結果表明，在HPINNOWAX色譜柱中，三乙胺與正己烷峰不易分離，而與正庚烷能完全分離，分離度大于5，因此選擇正庚烷為內標物。

3 結論

本研究建立的內標法靈敏度高，避免了三乙胺在硅鋼類金屬頂空管路中的吸附問題，檢測結果更精密可靠，可用于奧美拉唑中三乙胺的殘留檢測。

[1]鄧菲，黨岳，高崢，等.兩性霉素B中三乙胺殘留溶劑測定方法驗證[J].河北化工，2009,32（10）:60.