金福菇液體培養條件的優化

劉敏，白志芳，李媛，郭苗，王謙

（河北大學生物技術研究中心，河北保定 071002）

金福菇（TricholomalobayenseHeim），又名洛巴伊口蘑、大白口蘑、巨大口蘑［1］等，日本稱白色松茸，屬擔子菌亞門，層菌綱，傘菌目，口蘑科（白蘑科），口蘑屬（白蘑屬）［2］，是熱帶地區的大型真菌.金福菇是近年來新開發的一種珍稀食藥用真菌，其營養價值和藥用價值已經逐漸被人們所認識，是一種深受消費者喜愛的高品質食用菌.

隨著人民生活水平的不斷提高，人們對食用菌的信任度和需求量有了很大幅度的提高.但是，傳統制種、栽培方式已經遠遠不能滿足食用菌產業不斷發展的要求，大規模的工廠化生產，已成為不可抵擋的發展趨勢.液體培養技術具有不可比擬的優勢，是食用菌產業化發展的必然趨勢.食用菌液體培養技術是現代生物工程技術之一，具有菌絲體生長速度快、液體菌種的菌齡一致、接種方便、無季節性、適宜工廠化生產等優勢，潛力巨大，前景廣闊［3－4］.

食用菌液體培養方面的研究很多，但關于金福菇液體培養方面的報道還很少，在食用菌的液體培養過程中，營養物質的選擇固然重要，但是培養條件對于菌絲體的產量、質量等影響也較大，是食用菌液體培養過程中的重要內容.本文旨在找到金福菇液體培養時較為適宜的培養條件.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

金福菇菌種由河北大學食藥用真菌研究所提供.

1.1.2 培養基

斜面培養基：馬鈴薯150g，葡萄糖15g，玉米粉25g，麩皮10g，酵母膏10g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g，維生素B10.01g，赤霉素1.0mg，水1 000mL，pH自然.

一級液體搖瓶培養基：馬鈴薯200g，麩皮30g，葡萄糖20g，酵母膏3g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g，維生素B10.01g，水1 000mL，pH自然，用于培養一級液體菌種.

二級液體搖瓶培養基：馬鈴薯20g，葡萄糖30g，麩皮25g，酵母膏3g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g，水1 000mL，pH自然.

1.2 方法

1.2.1 一級液體菌種的制備方法

無菌操作取5塊大小約為0.5cm×0.5cm活化后的金福菇菌種塊，接種于裝有100mL一級搖瓶培養基的250mL三角瓶中，放置于25℃培養箱中，靜置培養24h，然后置于恒溫搖床中，25℃，150r／min恒溫振蕩培養，制得金福菇一級液體菌種，然后以10%的接種量接入二級搖瓶培養基中。

1.2.2 適宜pH的選擇實驗

用1mol／L的氫氧化鈉溶液和1mol／L的鹽酸溶液調整二級液體培養基的起始pH值，使培養基的pH值分別處于4.0，5.0，6.0，7.0，8.0.接種后，25℃，150r／min振蕩培養7d，直接測定菌絲體鮮質量.菌絲體鮮質量的測定采用本研究所以往的方法進行［5］，比干質量測定更實用、更快速.

1.2.3 培養溫度的選擇實驗

接種后，分別在24，26，28，30，32℃的條件下150r／min進行振蕩培養7d.培養結束后測定菌絲體鮮質量.

1.2.4 適宜搖床轉速的選擇實驗

接種后，在1.2.2中所選出的溫度下振蕩培養7d，搖床轉速分別為140，160，180，200，220r／min.培養結束后測定菌絲體鮮質量.

1.2.5 適宜裝液量的選擇實驗

分別在250mL三角瓶中裝入50，75，100，125，150mL的二級液體培養基，接種后，在1.2.3中選出的溫度及1.2.4中選出的搖床轉速的條件下振蕩培養7d，培養結束后，測定菌絲體鮮質量.

2 結果與分析

2.1 適宜pH值的選擇

隨著液體培養基pH值的變化，金福菇菌絲體鮮質量的變化情況如圖1.

由表1、圖1可以看出，當液體培養基的pH值為6.0時，培養結束后菌絲體鮮質量最大，為21.093 8g，與pH為7.0不存在顯著性差異，與其他pH存在顯著性差異，所以，pH 6.0～7.0是金福菇液體培養較為適宜的pH值.

表1 不同pH對金福菇菌絲體鮮質量影響的多重比較Tab.1 Multiple comparison of different pH on the mycelial fresh weight of Tricholoma lobayense Heim

2.2 適宜溫度的選擇

當液體培養的溫度不同時，金福菇菌絲體鮮質量的變化情況如圖2.

圖1 起始pH值對金福菇液體菌絲培養的影響Fig.1 Effect of initiation pH on liquid culture of Tricholoma lobayense Heim

圖2 溫度對金福菇液體菌絲培養的影響Fig.2 Effect of temperature on liquid culture of Tricholoma lobayense Heim

由表2、圖2可以看出，當液體培養的溫度為30℃時，培養結束后菌絲體鮮質量最大，為23.741 3g.與溫度為32℃時不存在顯著性差異，與其他溫度條件存在顯著性差異，所以，30～32℃是金福菇液體培養較為適宜的溫度.

表2 不同溫度對金福菇液體菌絲體鮮質量影響的多重比較Tab.2 Multiple comparison of different temperature on the mycelial fresh weight of Tricholoma lobayense Heim

2.3 適宜轉速的選擇

當液體培養的搖床轉速不同時，金福菇菌絲體鮮質量的變化情況如圖3.

由表3、圖3可以看出，當液體培養的轉速為160r／min時，培養結束后菌絲體鮮質量最大，為22.997 3g，與180r／min時不存在顯著性差異，與其他轉速存在顯著性差異，所以，160～180r／min是金福菇液體培養較為適宜的搖床轉速.

表3 不同搖床轉速對金福菇液體菌絲體鮮質量影響的多重比較Tab.3 Multiple comparison of different rotate speed on the mycelial fresh weight of Tricholoma lobayense Heim

2.4 適宜裝液量的選擇

當液體培養基的裝液量不同時，金福菇菌絲體鮮質量的變化情況如圖4.

圖3 搖床轉速對金福菇液體菌絲培養的影響Fig.3 Effect of rotate speed on liquid culture of Tricholoma lobayense Heim

圖4 裝液量對金福菇液體菌絲培養的影響Fig.4 Effect of medium volume on liquid culture of Tricholoma lobayense Heim

由表4、圖4可以看出，當250mL的三角瓶中裝液量為100mL時，培養結束后菌絲體鮮質量最大，為20.957 3g，并且與其他裝液量存在顯著性差異，所以，250mL的三角瓶中裝液量100mL為金福菇液體培養較適宜的裝液量.

表4 不同裝液量對金福菇液體菌絲體鮮質量影響的多重比較Tab.4 Multiple comparison of different medium volume on the mycelial fresh weight of Tricholoma lobayense Heim

3 討論

本實驗從pH值、培養溫度、搖床轉速以及裝液量4個方面對金福菇的液體培養條件進行了研究.結果表明，金福菇液體培養適宜的條件為pH值6.0～7.0、培養溫度30～32℃、搖床轉速160～180r／min以及250mL三角瓶裝液量100mL.

［1] 應建浙，卯曉嵐，馬啟明.中國藥用真菌圖鑒［M］.北京：科學出版社，1987：371.YING Jianzhe，MAO Xiaolan，MA Qiming.An illustrated handbook of medicinal fungi［M］.Beijing：Science Press，1987：371.

［2] 傅俊生，蔡衍山，柯麗娜，等.金福菇的交配型研究［J］.食用菌學報，2007，14（3）：10－12.FU Junsheng，CAI Yanshan，KE Lina，et al.Mating system ofTricholomagiganteum［J］.Acta Edulis Fungi，2007，14（3）：10－12.

［3] 王謙，賈震.食藥用菌的藥理作用研究進展［J］.醫學研究與教育，2010，27（5）：67－70.WANG Qian，JIA Zhen.Research prowess on pharmacological actions of edible and medicinal fungi［J］.Medical Research and Education，2010，27（5）：67－70.

［4] 王謙，劉敏，張亞從.大球蓋菇原生質體制備及紫外誘變［J］.河北大學學報：自然科學版，2011，31（4）：413－417.WANG Qian，LIU Min，ZHANG Yacong.Protoplast preparation and ultraviolet radiation investigatio ofStrophariarugosoannulata［J］.Journal of Hebei University：Natural Science Edition，2011，31（4）：413－417.

［5] 王謙，閆蕾蕾，王永利，等.金頂側耳的深層液體培養及相關檢測［J］.菌物系統，2002，21（1）：103－106.WANG Qian，YAN Leilei，WANG Yongli，et al.Submerged culture and related nutrient solution determination ofPleurotuscitrinopileatus［J］.Mycosystema，2002，21（1）：103－106.