Neuritin在胃癌中的表達水平及意義＊

李維嘉，鐘 晨，王錦國，牛少雄，牛建華△，李永康，黃 瑾

（石河子大學醫學院：1.第一附屬醫院普外三科；2.生物化學與分子生物學教研室，新疆石河子832000）

Neuritin是以色列科學家Nedivi等［1］在1993年通過構建谷氨酸類似物海人藻酸（kainic acid，KA）激活型大鼠海馬齒狀回cDNA文庫得到的一個基因。之前的研究表明，Neuritin在神經突起的生長和成熟中起著重要作用［2－4］。但近年來有研究表明，Neuritin的作用不僅局限于神經系統，在神經系統以外的某些腫瘤組織中存在高表達，且在一定程度上參與了腫瘤的發生、發展［5－11］。然而，胃癌作為消化系統常見的惡性腫瘤，目前國內外尚未見Neuritin在胃癌中表達的研究。本研究旨在通過檢測Neuritin在胃癌組織中的表達水平，以探討其與胃癌發生、發展的相關性。

1 材料與方法

1.1 材料 本實驗所采用的標本為58例胃癌患者手術存檔蠟塊（胃癌組織及同一患者的癌旁正常組織），均來自2010～2013年石河子大學醫學院第一附屬醫院病理科，均經本院病理科行病理診斷證實。所有患者均經術后組織病理學確診為胃癌，有明確的手術時間，術前均未接受化療和放療，其中男40例（68.97%），女18例（31.03%）；標本患者年齡35～80歲，平均60歲；隆起型胃癌4例（6.70%），潰瘍型胃癌45例（77.59%），浸潤型胃癌9例（15.52%）。Neuritin抗體購于Sigma公司（PRS4101），第二抗體購于中杉金橋公司（PV－6001）。

1.2 方法 免疫組織化學染色，每張切片的厚度為4μm。采用Envision兩步法：切片脫蠟至水，微波加熱（95℃、15min）以修復抗原，H2O2孵育10min以減少背景染色；4℃一抗孵育過夜（1∶200稀釋）；PBS振洗3次，每次5min；滴加第二抗體，37℃孵育30min；PBS振洗3次，每次5min。DAB顯色后進行蘇木素核復染、脫水、透明、封片、干燥。每次實驗均以PBS代替第一抗體作為陰性對照。結果判斷采用AB值法。A：按切片中細胞顯色有無及深淺評分，0分：無著色；1分：淺黃色；2分：棕／深黃色；3分：棕褐色。B：按切片中顯色細胞比例評分，1分：顯色細胞占切片中細胞總數的10%以下；2分：大于等于10%至小于50%的細胞顯色；3分：大于等于50%至小于75%以上細胞顯色；4分：75%以上細胞顯色。每例樣本積分＝A×B，按積分高低劃分：小于等于4分：陰性；5～8分：陽性；9～12分：強陽性。

1.3 統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件對所得數據進行分析處理，百分率比較用χ2檢驗。檢驗水準α＝0.05。

2 結 果

2.1 胃癌石蠟組織免疫組織化學染色結果 Neuritin表達的陽性部位位于胞漿和胞核，胞漿著色明顯，著色為棕黃色或棕褐黃色；胞核著色較弱，著色為淡黃色或棕黃色。58例胃癌組織中有2例表達為陰性，8例表達為陽性，48例表達為強陽性（圖1、2），陽性率為96.55%，強陽性率為82.76%；58例癌旁正常組織中有3例表達為陰性，46例表達為陽性（圖3、4），9例表達為強陽性，陽性率為94.83%，強陽性率為15.52%。圖5為陰性對照。Neuritin在兩組間表達的陽性率比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表1，但Neuritin在兩組間表達的強陽性率比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

圖1 胃癌組織中Neuritin蛋白陽性表達（×200）

圖2 胃癌組織中Neuritin蛋白強陽性表達（×200）

圖3 癌旁正常組織中Neuritin蛋白陽性表達（×200）

2.2 胃癌中Neuritin的表達與臨床病理參數的關系 Neuritin高表達與患者的性別、年齡、腫瘤的TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移、分化程度、病理學類型及有無遠處轉移均無相關性（均P＞0.05），見表3。

圖4 癌旁正常組織中Neuritin蛋白強陽性表達（×200）

圖5 陰性對照（×200）

表1 Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中表達水平比較［n（%）］

表2 Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中表達的強陽性情況［n（%）］

表3 Neuritin的表達水平與胃癌臨床病理參數的關系

續表3 Neuritin的表達水平與胃癌臨床病理參數的關系

3 討 論

Neuritin是神經營養因子家族中的一種小分子物質，之前Neuritin的研究一直集中在神經系統，近年來的研究顯示在神經系統外的其他組織也有 Neuritin的表達［5－11］。黃瑾等［7］發現Neuritin在人臍靜脈內皮細胞、肝細胞等正常人體細胞中存在有表達。Kojima等［5］發現Neuritin在心、肺、卵巢也有一定的表達。Raggo等［12］將轉染了Neuritin的3T3細胞注射到裸鼠體內，發現相應部位可出現腫瘤。巴鵬飛等［9］發現Neuritin在肺癌組織中存在高表達，可能參與了肺癌的發生、發展。曹健等［13］發現Neuritin在乳腺癌組織中存在高表達，且與乳腺癌的淋巴結轉移、TNM分期相關。黃瑾等［7］發現Neuritin在膀胱癌細胞及膽管內皮癌細胞等細胞株中無表達。而胃癌作為消化系統常見的惡性腫瘤，目前國內外尚未見Neuritin在胃癌中表達的研究。

本研究發現，Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中均有表達，顯微鏡下大部分胃癌癌旁正常組織切片中Neuritin著色為棕黃色，著色細胞比例大于50%，表明胃癌癌旁正常組織存在Neuritin表達；顯微鏡下大部分胃癌組織切片中Neuritin著色為棕褐色，著色細胞比例大于75%，統計學分析表明胃癌組織中Neuritin的表達程度明顯高于癌旁正常組織組中Neuritin的表達程度（P＜0.05），表明Neuritin在胃癌組織中存在高表達。鐘晨［14］研究表明，Neuritin的高表達能夠部分抑制Notch信號途徑配體JAG1蛋白的內吞，進而抑制Notch信號途徑的激活。還有學者發現Notch1信號通路的激活可以抑制胃癌細胞的增殖［15］。所以，Neuritin的高表達或許在一定程度上通過影響Notch信號途徑的激活促進了胃癌細胞的增殖，進而影響了胃癌的發生、發展。但Neuritin在胃癌組織中的高表達是否能夠通過影響Notch1通路從而影響胃癌的發生、發展，這還有待于進一步研究。本研究表明Neuritin的表達與胃癌患者的年齡、腫瘤的分化程度及病理學類型無相關性，這與曹健等［13］在乳腺癌中的研究結果相似。但是，曹健等［13］發現Neuritin的表達與乳腺癌的淋巴結轉移、TNM分期相關，而本研究發現Neuritin的表達與胃癌的淋巴結轉移、TNM分期等沒有相關性，這或許是因為本實驗樣本量有限，有待于擴大樣本量進一步研究。

綜上所述，Neuritin在胃癌組織與癌旁正常組織中的表達水平存在差異，胃癌組織中Neuritin存在高表達，并且Neuritin有可能成為胃癌預防和治療的一個新靶點。

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