丹東野生香百合的組織培養(yǎng)和快繁技術(shù)研究

陳景紅

(遼寧省森林經(jīng)營研究所，遼寧丹東118002)

丹東野生香百合(Liliumbrownii)為百合科百合屬植物,花美芳香,深受當(dāng)?shù)鼐用竦南矏?。開花初期為黃色,逐漸轉(zhuǎn)白,露地栽培花被脊部呈紫色,遮光則無，自交可結(jié)實,抗寒性強,引種到沈陽仍能正常露地越冬[1]。丹東野生香百合是百合育種的優(yōu)良親本，因其香味濃郁逐漸引起百合育種科研人員的重視。由于長期依靠無性繁殖，病毒積累侵染嚴重，為保留和挽救這個野生品種，為百合的育種提供優(yōu)良種質(zhì)資源，我們特對丹東野生香百合進行了組培快繁技術(shù)研究。

1 材料與方法

1.1 試驗時間、地點

研究試驗于2010年5月在遼寧省森林經(jīng)營研究所組培中心實驗室進行。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體處理。除去百合種球的外部殘損鱗片，先用清水沖洗30 min，在無菌條件下剝除內(nèi)鱗片，再用70%的酒精浸泡30 s， 0.1%升汞水浸泡10 min，并不間斷搖晃瓶子，以確保外植體得到全面徹底的消毒，然后用無菌水沖洗5遍，快速接種到已打開瓶口的培養(yǎng)基中。

1.2.2 培養(yǎng)基制作。以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6%的瓊脂粉，30g/L的蔗糖，pH值5.6～5.8，光照2000～3000 lx，光照時間14h/d。在不同的繁殖階段分別添加不同含量的6-芐氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)，吲哚丁酸(IBA)通過2個月的觀察和統(tǒng)計，篩選最優(yōu)的培養(yǎng)基配方。

表1 培養(yǎng)基配方 mg·L-1

2 結(jié)果與分析

2.1 莖尖誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基的篩選

在光照強度、溫度、濕度等環(huán)境條件相同時，丹東香百合在添加6-BA 1.0mg/L和NAA 0.4mg/L的MS培養(yǎng)基的出苗率最高(如表2)，整個鱗片內(nèi)側(cè)均可誘導(dǎo)出小鱗莖，數(shù)量多(15～20)形成叢生小鱗莖。

表2 外植體在不同培養(yǎng)基的誘導(dǎo)分化及生長情況

2.2 繼代增殖最佳培養(yǎng)基的篩選

將形成叢生小鱗莖的鱗片切成0.5cm×0.5cm左右小塊，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，觀察小鱗莖的生長情況。不同培養(yǎng)基配方對該種百合的繼代增殖有顯著影響，在相同的培養(yǎng)環(huán)境下MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)分化鱗莖多，繁殖系數(shù)一般為5～7倍。

2.3 壯苗培養(yǎng)基的篩選

生根之前有些鱗莖太小，長勢弱，就需要壯苗培養(yǎng)1～2周期，可以轉(zhuǎn)入C8培養(yǎng)基MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L中培養(yǎng)，一個周期大約20～30天，使其長高到2cm左右, 再進行生根。

2.4 最佳生根培養(yǎng)基的篩選

選擇鱗莖比較健壯的超過2cm高的小苗轉(zhuǎn)入不同的生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，其余小苗繼續(xù)進行增殖和壯苗培養(yǎng)，生根表現(xiàn)見表3。從表3中可以看出， 1/2MS+IBA 0.5mg/L的培養(yǎng)基可促進根的分化，生根所需天數(shù)最少，根的條數(shù)最多，并且根系生長情況最好，所以D11號培養(yǎng)基為最適生根培養(yǎng)基。

表3 試管苗在不同培養(yǎng)基生根情況

2.5 生根苗煉苗移栽

把香百合組培瓶苗均勻擺放到日光溫室內(nèi)的地面上，利用遮陽網(wǎng)控制光照強度。按照循序漸進原則逐漸增加自然光照。清早、傍晚和陰雨天光線較弱的時機進行全光照。中午或光照過強的時候，結(jié)合放風(fēng)、噴水來控制溫室內(nèi)溫度。

閉瓶煉苗3～4天后，打開瓶蓋，在瓶口覆上一層紗布，4～5天后取出小苗，洗凈苗根部的瓊脂，用百菌清500～800倍液浸泡30min左右，然后栽入0.1%高錳酸鉀消毒過的苗床上。用不同基質(zhì)進行移栽試驗，結(jié)果表明：以園田土為基質(zhì)，基質(zhì)容易積水、板結(jié)、透氣不好，30天時成活率最低；以稻殼與園田土等量混合，疏松透氣，但與根系密實性差，成活率不高：以純沙為基質(zhì)，通氣性、排水性良好，根系生長快，30天時成活率高，達到95%以上。但由于其保水保肥性較差，干濕變化快，隨時間延長，苗生長較慢，在60天后成活率有所降低。但只要在移栽20天后定期噴施葉面肥，成活后及時移栽，以保證營養(yǎng)供應(yīng)，河沙是一個合適的移栽基質(zhì)。

3 結(jié)論

丹東野生香百合可以采用組織培養(yǎng)法進行快速繁殖，誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.4 mg/L為佳，誘導(dǎo)培養(yǎng)20～30d，形成叢生小鱗莖；繼代培養(yǎng)基以MS+BA 1.0mg/L +NAA 0.1 mg/L為好，繁殖系數(shù)5倍以上；壯苗培養(yǎng)以MS+BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L 為好；生根培養(yǎng)以1/2MS+IBA 0.5 mg/L最好，9天可見根尖長出，生根率達90%以上且每株可達5～8條根；移栽基質(zhì)以純沙為最好，成活率達95%以上，并且成本最低，資源豐富。

[1]李雨,羅鳳霞,沈向群.丹東野百合花粉萌發(fā)率和貯藏條件關(guān)系的研究[J].遼寧林業(yè)科技,2007(6):36-37,44.

[2]鐘海豐,黃宇翔,鄧朝生.東方百合快繁培養(yǎng)基優(yōu)化與脫毒技術(shù)研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2009,25(17):168-173.

[3]廖富榮,林石明,吳媛,等.侵染百合的病毒種類及其檢疫重要性[J].植物檢疫,2011(1):70-73.

[4]趙慶芳.東方百合組織培養(yǎng)和快速繁殖的研究[J].西北師范大學(xué)學(xué)報，2003(1):66-70.

[5]方華舟.百合組織培養(yǎng)及快繁技術(shù)的研究與探討[J].貴州林業(yè)科技,2006(4).