食管鱗癌組織β-catenin表達與淋巴管生成的關系

李秀娟 李明霞 劉軍超 金春亭 范 婕 李玉珍

(河北北方學院病理教研室，河北 張家口 075000)

食管癌是死亡率較高的消化系統惡性腫瘤，淋巴道轉移是食管癌患者預后不良和死亡率較高的重要原因。研究表明腫瘤淋巴管生成對腫瘤的淋巴道轉移起至關重要的作用〔1～4〕，而且已有研究證實食管癌組織中存在著豐富的新生淋巴管〔5〕。β-catenin(β-連環蛋白)是Wnt信號通路的關鍵成員，它在腫瘤細胞質(核)的異位表達在腫瘤浸潤、轉移過程中發揮著重要作用，但其與淋巴管生成是否有關尚不清楚。Podoplanin即腎小球上皮細胞整合膜蛋白，是特異性淋巴管內皮標志物，鼠抗人D2-40單克隆抗體能夠識別淋巴管內皮上的Podoplanin。本實驗通過檢測β-catenin和Podoplanin在食管鱗癌組織的表達，分析β-catenin和Podoplanin與食管癌淋巴管生成和淋巴結轉移的關系，探討尋找新型靶向治療腫瘤的方法。

1 材料與方法

1.1標本來源 收集河北北方學院第一附屬醫院病理科2010年6月至2012年6月切除的食管癌存檔標本蠟塊68例。全部病例術前未經任何治療，經手術后病理切片證實均為食管鱗狀細胞癌。其中男45例，女23例，年齡37～82〔平均(60.25±7.32)〕歲，中位年齡56歲。高分化鱗癌11例，中分化鱗癌16例，低分化鱗癌41例；有淋巴結轉移43例，無淋巴結轉移25例；外膜浸潤39例，無外膜浸潤29例。并從中選取20例距腫瘤邊緣>5 cm的正常食管組織作為對照。

1.2試劑 鼠抗人β-catenin單克隆抗體、鼠抗人D2-40單克隆抗體，免疫組化試劑盒和DAB顯色系統均為福州邁新生物制品有限公司產品。

1.3方法 免疫組化SP二步法進行染色，石蠟包埋標本2 μm厚連續切片，常規脫蠟至水，經3%過氧化氫37℃ 5 min，β-catenin于檸檬酸緩沖液，Podoplanin于EDTA緩沖液加熱抗原修復15 min，滴加一抗，37℃60 min，清洗后滴加二抗，37℃30 min，DAB顯色，中性樹膠封片。染色過程嚴格按試劑盒規定程序進行。同時用PBS代替一抗作染色的陰性對照，已知β-catenin、Podoplanin染色陽性的胃癌組織片做二者的陽性對照。β-catenin以細胞膜、胞質、胞核出現棕黃色為陽性信號，陽性信號集中在細胞膜的細胞>50%為膜表達；陽性信號集中在細胞質的細胞>50%為漿表達；陽性信號集中在細胞核的細胞>0為核定位。Podoplanin表達于毛細淋巴管內皮細胞胞質，毛細淋巴管管壁較薄且不規則，單層內皮細胞核大且向腔內突出，腔內無紅細胞。Podoplanin表達陽性者淋巴管內皮細胞胞漿呈棕黃色，用淋巴管密度(LVD)表示。先在低倍(10×)視野下選取腫瘤或正常組織中淋巴管最豐富的區域，再在高倍(40×)視野下計數Podoplanin染色陽性的淋巴管數，每例讀數3個視野，并求其平均值作為LVD。

1.4統計學處理 應用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗和t檢驗。

2 結 果

2.1食管鱗癌及正常食管組織中β-catenin的表達 在20例正常食管組織中β-catenin均表達于細胞膜。食管鱗癌組織中β-catenin表達于胞質，并可見部分細胞中的核定位，細胞膜上的表達量相應減少，和正常食管組織的表達相比，癌組織中β-catenin出現了細胞質和細胞核的異位表達(56/68，82.4%)。

2.2食管鱗癌及正常食管組織中Podoplanin的表達 68例食管癌組織中LVD為(5.71±2.00)，20例正常食管組織的LVD為(4.30±1.32)，食管鱗癌組織中的LVD明顯高于正常組織(P=0.002，t=2.946)。

2.3食管鱗癌β-catenin的異位表達和LVD與臨床病理指標的關系 細胞質和細胞核β-catenin的異位表達在淋巴結轉移組(40/43，93.0%)明顯高于無淋巴結轉移組(16/25，64.0%)，差異有統計學意義(χ2=7.275，P=0.007)；在外膜浸潤組(36/39，92.3%)明顯高于無外膜浸潤組(20/29，69.0%)(χ2=6.236，P=0.013)，而與年齡、性別、分化程度無關。LVD在淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組分別為(6.74±1.75)和(3.93±0.83)，淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移組(t=7.521，P=0.001)，而與年齡、性別、分化程度及外膜浸潤無關。

2.4食管鱗癌β-catenin的異位表達與LVD的相關性 β-catenin異位表達的56例食管癌組織中LVD為(6.02±2.01)，β-catenin僅表達于細胞膜的12例食管癌組織中LVD為(4.25±1.19)，二者比較差異顯著(t=2.926，P=0.008)。

3 討 論

β-catenin是一種重要的細胞黏附分子和細胞骨架成分，其在維持正常上皮的極性和完整性中發揮重要作用。正常細胞中β-catenin主要表達于細胞膜，細胞質中少見表達。而在多種腫瘤組織中〔6～10〕，β-catenin出現了異位表達，即細胞質/細胞核的累積和細胞膜表達的減少。造成這種改變的原因主要是β-catenin基因突變，降解障礙，在細胞質內異常積聚后與Tcf-4(T細胞因子-4)結合，然后穿梭入細胞核內，激活下游靶基因，從而引起腫瘤細胞的增殖。新近研究發現β-catenin信號通路還可通過調控VEGF發揮對血管生成的作用〔11〕，但其與淋巴管生成的關系國內外罕見報道。

Podoplanin是一種新的淋巴管內皮標記物，主要表達于淋巴管內皮細胞，而不表達于血管內皮。用鼠抗人D2-40單克隆抗體特異性識別Podoplanin，對腫瘤組織中淋巴管計數即LVD，有利于研究腫瘤淋巴管生成的分子機制。腫瘤組織中Podoplanin高表達提示淋巴結轉移和預后不良〔12〕。

本研究證實了食管鱗癌組織中存在β-catenin蛋白的異位表達，β-catenin可能參與了食管癌的淋巴管生成，促進了食管癌的淋巴道轉移。這一結果為進一步解釋腫瘤淋巴管生成機制和尋找新型抗腫瘤淋巴管生成治療的方法提供了重要的理論依據。

4 參考文獻

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