乳腺癌組織中PTEN、AKT表達及與其臨床病理及預后的相關性

郭紹文 劉 坤 胡俊艷 林 昀

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，臨床上主張采用以手術治療為主、術后化療為輔的綜合治療，且疾病的控制與復發及生存期得到有效改善，但早期診斷仍是提高患者無瘤生存率及生活質量的關鍵[1]。研究已證實，參與信號傳導系統的蛋白多數屬于癌基因或抑癌基因的產物，而乳腺癌組織的PTEN-PI3K/AKT通路存在異常活化[2]，其中第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源基因(PTEN)是迄今發現唯一1種具有磷酸酶活性抑癌基因，蛋白激酶(AKT)則是1種原癌基因，兩者的異常表達與腫瘤的發生密切相關[3-4]。本實驗采用免疫組化法檢測乳腺癌組織及正常組織中PTEN、AKT蛋白的表達，旨在分析其與乳腺癌臨床病理及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月-2011年9月在我院手術治療的84例乳腺癌患者，臨床病理資料完整，均為女性；年齡41～76歲，平均(54.7±7.3)歲。按美國癌癥聯合委員會(AJCC)分期標準：Ⅰ期27例，Ⅱ期26例，Ⅲ期24例，Ⅳ期7例；病理類型：浸潤性導管癌38例，導管內癌25例，浸潤小葉癌12例，黏液腺癌9例；腫瘤直徑<3 cm 49例，≥3 cm 35例；淋巴結轉移32例，無淋巴結轉移52例。另取我院同期收治的30例乳腺腺瘤患者的乳腺組織作為正常對照組，年齡40～78歲，平均(51.2±4.3)歲。

1.2 試劑與方法

采用免疫組織化學三步法，組織標本采用10%甲醛固定，石蠟包埋，制作成厚度為4 μm的組織切片，常規脫蠟、水化、0.01枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)抗原熱修復。PTEN抗體以1∶100稀釋，AKT抗體以1∶75稀釋。兩種抗體均采用試劑盒已知陽性組織作為陽性對照，以PBS代替一抗體作為陰性對照。至少有2名富有經驗的病理醫師獨立觀察切片。

兔抗人PTEN免疫組化多克隆抗體、鼠抗人AKT免疫組化單克隆抗體、S-P免疫組化試劑盒均購自美國Santa Cruz生物技術公司。

1.3 判斷標準

PTEN蛋白表達于細胞質和細胞膜，AKT蛋白表達于胞核。隨機選擇10個高倍鏡視野(×400)計數1 000個乳腺癌細胞，采用徐良中[5]的計分方法，即無著色為0分，著色弱為1分，著色適中為2分，著色深為3分；著色陽性細胞數百分比≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，≥51%為3分，上述兩項積分乘積≥3分為陽性，否則為陰性。

1.4 統計學方法

應用SPSS 17.0軟件進行統計分析。計數資料比較采用χ2檢驗，采用Pearson相關進行相關性分析，P<0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌組織及乳腺腺瘤組織中PTEN、AKT蛋白表達水平比較

乳腺癌組織中PTEN、AKT蛋白陽性表達率分別為41.7%和66.7%，乳腺腺瘤組織中分別為73.3%和20.0%，兩組比較差異均有統計學意義(χ2=17.32，19.41，P<0.05)，見表1。

表1 乳腺癌組織與乳腺腺瘤組織中PTEN、AKT蛋白表達水平比較/例

2.2 乳腺癌組織中PTEN、AKT表達及與其臨床病理參數的關系

PTEN陽性表達與乳腺癌腫瘤TNM臨床分期及淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)，而與患者年齡、腫瘤直徑、病理類型無關(P>0.05)。AKT陽性表達與乳腺癌TNM臨床分期、腫瘤直徑及淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)，而與患者年齡、腫瘤病理類型無關(P>0.05)，見表2。

2.3 乳腺癌組織中PTEN與AKT蛋白表達的相關性分析

經Pearson相關性分析顯示，乳腺癌組織中PTEN與AKT蛋白表達呈線性負相關，相關系數γ=-0.752(P<0.05)。

2.4 PTEN和AKT蛋白表達與乳腺癌預后的關系

PTEN、AKT蛋白陽性表達與陰性表達患者術后1年生存率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；PTEN蛋白陽性表達患者術后2年生存率明顯高于陰性表達患者，而AKT蛋白陽性表達患者術后2年生存率明顯低于陰性表達患者，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

3 討論

近年來，研究認為乳腺癌是1種涉及多種基因的激活與抑癌基因的失活的基因疾病，且針對其病因及誘發因素等研究較多。基因的突變、缺失與信號蛋白的異常表達對乳腺癌的發生、發展、預后具有重要的作用。PI3K/AKT作為調節細胞增殖的重要細胞信號通路，可激活生存信號，保持細胞活性，從而有效控制正常血管生長與腫瘤血管形成[6]。在正常組織中，PTEN蛋白可抑制PI3K/AKT信號轉導通路的活性，而惡性腫瘤中PTEN 蛋白的表達水平下調或缺失，進而造成AKT磷酸化水平升高，促進腫瘤細胞增殖、粘附和轉移[7]。目前關于PTEN、AKT的表達與乳腺癌的相關性鮮有報道，且在乳腺癌中 PTEN與AKT的關系國內也尚未見報道。

表2 乳腺癌組織中PTEN、AKT表達與其臨床病理參數的關系/例

注：與Ⅰ、Ⅱ期比較，*為P<0.05；與有淋巴結轉移比較，*為P<0.05；與腫瘤直徑<3 cm比較，*為P<0.05。

表3 PTEN與AKT蛋白表達與乳腺癌患者生存率的關系(例，%)

注：與陰性表達者比較，*為P<0.05。

本實驗采用免疫組化法對84例乳腺癌組織中PTEN、AKT蛋白的表達研究發現，與乳腺腺瘤組織比較，乳腺癌組織中PTEN蛋白的陽性表達率顯著降低、AKT蛋白的表達率顯著升高(P<0.05)，推測PTEN、AKT參與了乳腺癌的發生、發展。有研究指出，PTEN蛋白表達降低并非完全由于PTEN基因突變或缺失所致，啟動子甲基化等基因外機制也可使PTEN表達減少，而翻譯后的異常調控也會出現PTEN蛋白降解[8]。本研究中，乳腺癌組織中PTEN陽性率隨乳腺癌腫瘤TNM臨床分期增高、淋巴結轉移而降低；AKT陽性率隨乳腺癌TNM臨床分期增高、腫瘤直徑增加、淋巴結轉移而增高(P<0.05)，進一步分析發現，PTEN、AKT在乳腺癌組織之間均呈明顯負相關(γ=-0.752，P<0.05)，再次驗證了乳腺癌患者PTEN、AKT協同介導PI3K/AKT途徑通路異常致使乳腺癌形成的可能性，并促進了其浸潤、淋巴結轉移[9-10]。Capodanno等[11]研究發現，PTEN陽性表達率為27.3%，且與乳腺癌臨床TNM分期、組織學分級及淋巴結轉移均有顯著相關性，同時多因素分析也顯示，PTEN低表達與乳腺癌患者的不良預后有關。

通過對乳腺癌患者的隨訪發現，術后2年，PTEN蛋白陽性表達患者的生存率(77.1%)，明顯高于陰性表達患者61.2%，而AKT蛋白陽性表達患者的生存率85.7%，則明顯低于陰性表達患者64.3%(P<0.05)，表明兩者異常表達與乳腺癌癌的侵襲轉移及預后有關。有學者[12]對神經膠質瘤的研究也得出相似的結果，高表達AKT蛋白的膠質瘤患者5年生存率明顯降低，AKT蛋白是膠質瘤獨立的預后因子。

綜上所述，PI3K/AKT信號途徑可能參與了乳腺癌的發生與惡性進展，PTEN的表達缺失導致AKT的過度表達，PTEN、AKT蛋白表達的檢測可能有助于預測乳腺癌的預后；同時，以PTEN/I3K/AKT信號通路為靶點的分子靶向有望為乳腺癌治療提供新的思路。

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