血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子121-DFF40融合蛋白體內(nèi)的抗腫瘤活性

張 晶 賴 飛 黃連江 梁小亮 孫紅琰

(廈門市第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 廈門 361021)

靶向藥物治療腫瘤是在傳統(tǒng)的細(xì)胞毒藥物基礎(chǔ)上的一次革命。因?yàn)榘邢蛩幬锏脑O(shè)計(jì)理念是干擾腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中的異常信號(hào)通道，所以比以往傳統(tǒng)的細(xì)胞毒藥物有著更強(qiáng)的針對(duì)性、更高的效率和更小的不良反應(yīng)〔1〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)121可以靶向的作用于腫瘤新生血管，利用DFF40的DNA裂解作用，達(dá)到使腫瘤部位新生血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用。本文利用前期原核表達(dá)、純化制備的有活性VEGF121-DFF40融合蛋白，對(duì)建立的肝癌荷瘤裸鼠模型進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤活性研究，從而初步驗(yàn)證其作為肝癌生物治療藥物的可行性。

1 材料與方法

1.1試劑 VEGF121-DFF40融合蛋白為前期實(shí)驗(yàn)制備，PBS為實(shí)驗(yàn)室自配。

1.2細(xì)胞株與動(dòng)物 肝癌細(xì)胞取自武警總醫(yī)院；Balb/c裸鼠購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 取5周齡Balb/c裸鼠，體重為18～20 g，雌性，利用水動(dòng)力轉(zhuǎn)染法尾部注射HepG2細(xì)胞，其中細(xì)胞濃度調(diào)整為1×107/L，5 d后，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各6只，分別皮內(nèi)注射PBS 0.1 ml及融合蛋白 0.1 ml，每天1次。分別記錄各組小鼠的初次時(shí)間、半數(shù)死亡時(shí)間，40 d后處死小鼠，剝?nèi)×鰤K，測(cè)量直徑，計(jì)算成瘤率、40 d存活率，并對(duì)腫瘤組織進(jìn)行病理學(xué)分析。

2 結(jié) 果

2.1各組小鼠的生存期 對(duì)照組裸鼠初次死亡時(shí)間為(21±1) d，半數(shù)死亡時(shí)間為(30±2) d，平均存活時(shí)間為(29.66±4.46) d；實(shí)驗(yàn)組裸鼠初次死亡時(shí)間為(28±2) d，半數(shù)死亡時(shí)間為(40±1) d，平均存活天數(shù)(36.66±5.32) d，兩組小鼠的生存時(shí)間差異顯著(P<0.05)。

2.2不同時(shí)間腫瘤生長(zhǎng)情況 對(duì)照組在給藥第18、22、26及30天時(shí)，腫瘤直徑與實(shí)驗(yàn)組差異顯著(P<0.05)。見表1。

表1 各組腫瘤直徑大小

2.3各組小鼠成瘤率及40 d存活率 對(duì)照組小鼠共有6只成瘤，成瘤率為100%，其40 d存活率為0，實(shí)驗(yàn)組小鼠共有3只成瘤，成瘤率為50%，40 d存活率為50%；實(shí)驗(yàn)組裸鼠成瘤率下降，存活率升高(P<0.05)。

2.4腫瘤組織的病理變化 見圖1。光鏡下組織學(xué)觀察可見(HE染色)，對(duì)照組腫瘤組織內(nèi)壞死區(qū)明顯小于實(shí)驗(yàn)組。

圖1 各組裸鼠腫瘤組織病理學(xué)觀察(HE，×20)

3 討 論

VEGF是體內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的特異性血管通透性因子和有絲分裂原，它能促進(jìn)腫瘤的新生血管形成，為腫瘤細(xì)胞提供足夠的營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移〔2〕。所以，VEGF及其受體已成為近年抗腫瘤血管形成最具潛力的靶點(diǎn)之一〔3〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步證明了VEGF-DFF40融合蛋白對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用，但有關(guān)VEGF-DFF40重組融合蛋白抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)與凋亡的具體作用機(jī)制，及其體內(nèi)最低有效劑量和半衰期等問題，還有待進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

1Juffermans LJ，Kamp O，Dijkmans PA，etal.Low intensity ultrasound exposed micro-bubble sprovoke local hyperpolarization of the cell membrane via activation of BK(Ca)channels〔J〕.Ultrasound Med Biol，2008；3(3):502-8.

2Kiselyov A，Balakin KV，Tkachenko SE.VEGF/VEGFR signal-ling as a target for inhibiting angiogenesis〔J〕.Expert Opin Investig Drugs，2007；16(1):83-107.

3Gomika U，Caroline R，Rolf A，etal.A peptide antagonist of VEGF receptor 2 recognizes a'hotspot'in the extracellular do main distinct from the hormone-binding site〔J〕.Bioorg Med Chem Lett，2008；16(12):6338-43.