Hsa-miR-9在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平及意義

胡 亮 韓建波 龍啟強(qiáng) 張郁豐 陶志堅 易永祥

(東南大學(xué)附屬第二醫(yī)院腫瘤外科，江蘇 南京 210003)

內(nèi)源性非編碼小RNAs又稱微小〔RNA(miRNA)〕〔1〕不編碼蛋白質(zhì)，但可以通過降解或抑制靶mRNAs的翻譯來調(diào)節(jié)蛋白編碼基因的表達(dá)〔2〕,在調(diào)節(jié)生物體的生長發(fā)育、細(xì)胞分化和凋亡及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用，能在轉(zhuǎn)錄后或者翻譯水平影響基因的表達(dá)，成為近年研究的熱點(diǎn)。與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞中miRNA存在異常表達(dá)，包括異常上調(diào)或異常下調(diào)。多個研究發(fā)現(xiàn)，Hsa-miR-9在神經(jīng)腫瘤、乳腺癌、宮頸癌、食管癌、淋巴瘤的腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用〔3～8〕。由于miRNA具有組織特異性，不同細(xì)胞來源的腫瘤應(yīng)該會有不同的miRNA上調(diào)或下調(diào)〔9〕。本研究擬觀察Hsa-miR-9在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)水平，以及與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1病例標(biāo)本 結(jié)直腸癌組織標(biāo)本來自2004年1月至2007年6月初次就診且未同時合并其他腫瘤的結(jié)直腸癌手術(shù)患者，共66例。男44例，女22例；平均58.34歲；均為腺癌；高分化癌5例，中分化癌35例，低分化癌26例；病理pTNM(UICC2003分期標(biāo)準(zhǔn))分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期31例，Ⅲ期21例，Ⅳ期8例。手術(shù)前均未接受放化療。

1.2qRT-PCR檢測Hsa-miR-9在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平 按照固定組織RNA提取試劑盒使用說明書從組織中提取總RNA，紫外分光光度計測定RNA提取液的A260吸光度值，計算濃度后-20℃保存?zhèn)溆谩０凑漳孓D(zhuǎn)錄試劑盒使用說明書將所得總RNA逆轉(zhuǎn)錄為總cDNA，-20℃保存?zhèn)溆谩０凑誵RT-PCR試劑盒使用說明書，用qRT-PCR檢測結(jié)直腸癌標(biāo)本miR-9的表達(dá)水平。內(nèi)參選用U6、實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。用引物設(shè)計軟件Primer5.0設(shè)計qRT-PCR引物：Hsa-miR-9qRT-PCR引物：正向5′-ACACTCCAGCTGGGTCTTTGGTTATCTAGCT-3′，反向5′-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTCATACAG-3′；U6-snRNAqRT-PCR引物：正向5′-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3′，反向5′-GGAACGCTTCACGAATTTG-3′。PCR反應(yīng)條件：95℃ 5 min，95℃ 10 s，62℃ 45 s，共40個循環(huán)。

1.3統(tǒng)計分析 采用SPSS13.0軟件行t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

結(jié)直腸癌組織Hsa-miR-9表達(dá)水平的高低與年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位、大體形態(tài)無顯著相關(guān)性(均P>0.05)，而與腫瘤分化程度、腫瘤浸潤程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。見表1。

表1 結(jié)直腸癌組織中Hsa-miR-9表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

人miR-9有23個核苷酸，有3種類型：miR-9-1、miR-9-2和miR-9-3，分別定位于1q22、5q14.3、15q26.1，在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。只有成熟的miRNA-9才能發(fā)揮作用，與其他蛋白質(zhì)組成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)，該復(fù)合體與靶mRNA結(jié)合，從而引起靶mRNA的降解或翻譯抑制〔10,11〕。當(dāng)miRNA與靶基因結(jié)合位點(diǎn)完全互補(bǔ)配對時引起mRNA降解，不完全互補(bǔ)配對則導(dǎo)致翻譯抑制〔12～14〕。在人和動物體內(nèi)，大部分miRNA與靶mRNA間的堿基配對為不完全互補(bǔ)配對，因而主要造成mRNA翻譯的抑制，而不是mRNA的降解〔15〕。在腫瘤組織中染色體常發(fā)生缺失、增加或重排現(xiàn)象，而miRNA位于染色體的脆性位點(diǎn)，因此異常表達(dá)的miRNA可能在腫瘤形成中扮演重要角色，可能是控制細(xì)胞增殖和調(diào)亡的抑癌基因或致癌基因〔16,17〕。miRNA表達(dá)的改變可以導(dǎo)致遺傳信息表達(dá)的改變從而導(dǎo)致相應(yīng)的病理生理狀態(tài)，而處于一定病理生理狀態(tài)的組織常伴有特定的miRNA表達(dá)〔18〕。miR-9在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。對腫瘤miRNA表達(dá)研究可有助于多種癌癥的分型和預(yù)后判斷〔19〕。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Hsa-miR-9表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的臨床病理特征以及臨床分期之間有相關(guān)性，隨著結(jié)直腸癌的病情進(jìn)展而表達(dá)水平增高。當(dāng)腫瘤浸潤程度增加，分化程度惡化，出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時患者癌組織中Hsa-miR-9的表達(dá)水平明顯升高。提示miRNA與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究證實(shí)了Hsa-miR-9在結(jié)直腸癌進(jìn)展不同臨床階段患者中存在顯著差異，結(jié)直腸癌患者癌組織中Hsa-miR-9表達(dá)水平高低可能成為一個評價疾病進(jìn)展及不良預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。

4 參考文獻(xiàn)

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