IL-18基因105A/C多態性與胃癌的相關性

李愛連 胡志芳 牛春燕 高保華 吳方雄 史宏恩

(西安醫學院病原生物與免疫學教研室,陜西 西安 710021)

胃癌是很多國家的第一大癌，給相應國家和地區的人民造成了沉重的醫療負擔和嚴重的社會問題〔1，2〕。目前已有研究表明營養缺乏、幽門螺桿菌(HP)感染以及高風險遺傳因素都與胃癌的發生有著密切的關系〔2〕。炎癥反應已被證明在胃癌的發生，尤其是癌前病變過程中起重要作用，白細胞介素(IL)-18是一種重要的炎癥相關的細胞因子，屬IL-1家族。IL-18的主要功能是協同誘導輔助T淋巴細胞(Th1)產生大量其他的細胞因子，刺激T細胞增殖，促進炎癥反應〔3〕。目前已有研究〔4～7〕表明IL-18與1型糖尿病、類風濕、關節炎、慢性乙型肝炎、多發性硬化癥、哮喘、過敏性鼻炎、系統性紅斑狼瘡等多種疾病相關。雖有報道〔8,9〕提示IL-18在胃癌組織中有異常表達的現象，然而卻沒有研究IL-18與胃癌風險的關聯。本研究旨在通過基因分型的方式，探討陜西省西安市人群中IL-18基因105位點多態性與胃癌易感性的相關性，為胃癌遺傳學高危人群的區分提供新的證據。

1 資料與方法

1.1病例資料 選取我院胃癌患者204例，全部病例均按國際疾病分類第10版(ICD10)的標準診斷，經病理學確診為胃癌，即為病例組；其中男117例,女87例；年齡35～96歲，平均(57.3±21.4)歲。另取本地區2012年底胃癌早期篩檢中的同年齡段未患胃癌的正常中老年人群100例為對照組，其中男59例，女41例；年齡36～89歲，平均(56.8±19.5)歲。病例組中含有彌散型胃癌108例、腸型胃癌72例和其他類型胃癌24例，分別占病例胃癌總數的52.9%，35.3%與11.8%。 兩組人群年齡、性別構成上沒有顯著差異(P>0.05)，見表1。

1.2實驗方法

1.2.1基因組DNA的提取 采集靜脈血3 ml，加入EDTA鈉鹽抗凝；采用改良碘化鈉法〔10〕提取白細胞基因組DNA，現提現用，其余-80℃保存備用。

1.2.2引物設計 參照陳水連等〔4〕的方法，上游引物序列為：5′-TGTTTATTGTAGAAAACCTGGA-3′；下游引物序列為：5′-CCTCTACAGTCAGAATCAGT-3′，引物均由北京金維智生物制品責任公司合成。

1.2.3PCR反應 PCR反應體系為20 μl，其中模板DNA 1 μl，兩種引物濃度均為1 pmol，使用2×Master Mix 10 μl(北京天根生物技術有限責任公司)，dd H2O補齊至20 μl。PCR反應條件為：94℃ 2 min預變性； 三步法94℃ 50 s，58℃ 50 s，72℃ 50 s，擴增25個循環； 最后延伸72℃ 5 min。電泳后分析PCR條帶。

1.2.4RFLP分型 將PCR產物用TaqI限制性內切酶進行酶切，置于65℃中水浴過夜，次日使用3%的瓊脂糖凝膠進行電泳，通過凝膠成像系統判斷結果，基因型AA的樣本中僅有148 bp一條條帶，基因型AC的樣本則有148、123、25 bp三條條帶，基因型CC的樣本則有123、25 bp兩條條帶。

1.3統計學方法 應用SPSS12.0軟件；IL-18三種基因型的頻率采用基因直接計數法進行計算，各基因型多態性分布、組間基因型及等位基因頻率的比較采用χ2檢驗，并以比值比(OR值)及其95%可信區間(CI)表示相對風險度。

表1 病例組與對照組的一般人口學特征(n)

2 結 果

2.1IL-18基因105位點多態性頻率及遺傳平衡檢驗 病例組IL-18基因105位點(rs549908)的各基因型頻率分別為：AA型62.5%，AC型26.9%，CC型10.6%， A/C等位基因的頻率分別為75.9%和24.1%。對照組IL-18基因105位點(rs549908)的各基因型頻率分別為：AA型87.0%，AC型11.0%，CC型2.0%， A/C等位基因的頻率分別為92.5%和7.5%，符合 Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.912，P=0.340)。

2.2IL-18基因105位點多態性與胃癌風險的關系 胃癌病例組CC基因型比率及C等位基因頻率均顯著高于對照組，由此可知攜帶有至少一個C等位基因的基因型個體患胃癌風險為基因型為AA者的2.562倍(95%CI：1.476～4.448，χ2=10.862，P=0.001)。見表2。

表2 病例組與對照組IL-18基因型頻率分布(n)

3 討 論

近年來，隨著胃癌發病機制的揭示和公共衛生狀況的總體改善，全球范圍內胃癌的發病率和死亡率正在不斷下降，其中對胃癌高危人群的識別及早期干預起到了至關重要的作用〔11〕。炎癥相關基因的單核苷酸基因多態性(SNP)是目前識別胃癌高危人群的研究熱點，已有廣泛的研究表明腫瘤壞死因子(TNF)-α、IL-1b、轉化生長因子(TGF)-β、IL-10等多種細胞因子的特定SNP與胃癌風險相關〔12〕。

IL-18基因也是一種重要的炎癥相關細胞因子，人類的IL-18基因位于11號染色體的長臂上(11q22.2～q22.3),由6個外顯子和5個內含子組成，而105位點(rs549908)則處于其啟動子區，有研究〔6〕表明105位點SNP能夠通過影響IL-18基因的轉錄和表達而影響IL-18在血清與組織中的量，也有研究〔8,9〕指出IL-18在胃癌組織中異常表達，由于IL-18主要作用是刺激T細胞免疫作用和其他細胞因子的分泌，其表達紊亂極有可能誘發持續炎癥反應，從而最終影響胃癌的發病風險〔8〕。

本研究顯示攜帶C等位基因的人群患胃癌風險顯著高于基因型為AA的人群，通過對該SNP的基因分型以及聯合其他SNP位點的連鎖不平衡分析及haplotype分型，可以為識別部分遺傳上對胃癌具有易感性的高危人群及早干預，為胃癌的防治提供一定的理論依據。

本研究首次報道了IL-18基因105位點SNP(rs549908)與胃癌風險的關聯，然而依然具有一定的局限性。所有樣本均為漢族人群，無法體現其他人種中IL-18基因105位點SNP與胃癌的關聯；而且研究局限在單個基因位點(IL-18基因105位點)上，并沒有從基因多態性、環境因素和蛋白水平綜合進行研究，也沒有從基因-表型、基因-環境、基因-基因的角度揭示IL-18基因105位點SNP在胃癌中的作用。

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