加味皮康顆粒中橙皮苷的含量測(cè)定

武警部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 102613

加味皮康顆粒中橙皮苷的含量測(cè)定

于玲王曉飛葛海生

武警部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 102613

目的建立以高效液相色譜法測(cè)定加味皮康顆粒中橙皮苷含量的方法。方法色譜柱：SHISEIDO C18 (4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶13∶75)，柱溫：35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm，流量：1.0ml/min。結(jié)果橙皮苷進(jìn)樣量在0.06336～2.5344μg/ml范圍內(nèi)線性良好(r=0.9998)，平均回收率為98.83%，RSD為1.34%(n=6)。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確、可用于加味皮康顆粒的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；加味皮康顆粒；橙皮苷；含量測(cè)定

加味皮康顆粒是由牡丹皮、陳皮等多味中草藥組成[1]，臨床用于玫瑰糠疹、濕疹的治療，為更好的控制藥品質(zhì)量，確保用藥安全，本文采用高效液相色譜(HPLC)測(cè)定制劑中橙皮苷的含量，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可用于本品的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU LC-2010HTC高效液相色譜儀(二極管陣列紫外檢測(cè)器)。

1.2 試藥 橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：110721-201115，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；加味皮康顆粒(批號(hào)：20130701、20130702、20130703、20130704，武警醫(yī)院自制)；乙腈、甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]色譜柱：SHISEIDO C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶13∶75)；柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm；流量：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10μl。理論塔板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算不低于7000，分離度符合規(guī)定。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品(含量為96.3%)約7.92mg，置于50ml量瓶中，加甲醇適量溶解后，稀釋至刻度，搖勻制得貯備液。精密吸取貯備液2ml置5ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液(約每1ml含橙皮苷60μg)。

2.2.2 供試品溶液 取本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理20min使溶散，加熱回流45min，放冷，再稱定重量，加80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按處方中各藥味的比例和制法項(xiàng)下規(guī)定配制缺陳皮的陰性樣品，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法對(duì)樣品進(jìn)行制備，作為陰性樣品溶液。

2.3 方法專屬性試驗(yàn) 精密吸取橙皮苷陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μl，分別注入色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄圖譜，結(jié)果陰性對(duì)照溶液在與橙皮苷對(duì)照品相同保留時(shí)間色譜峰處未顯色譜峰，因此無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取橙皮苷對(duì)照品溶液(濃度為：61.02μg/ml)各1、5、10、15、20、25、30、35、40μl注入色譜儀中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定橙皮苷峰面積(A)，作為縱坐標(biāo)，同時(shí)以橙皮苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y=11400+1725506X，r=0.9998，橙皮苷進(jìn)樣量在0.06336～2.5344μg/ml范圍呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取“2.4”中同一橙皮苷對(duì)照品溶液(濃度為61.02μg/ml)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μl，記錄橙皮苷峰面積，依法進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果芍藥苷的峰面積RSD為0.12%(n=6)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將“2.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液于室溫放置，分別在0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣10μl，經(jīng)計(jì)算得橙皮苷峰面積RSD為0.80%(n=7)，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品0.5g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行制備6份。依法測(cè)定，結(jié)果橙皮苷含量的RSD=0.69%(n=6)，表明本法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知橙皮苷含量的供試品(批號(hào)：20130704，含量為5.1425 mg/g)6份，每份約0.5g，精密稱定，分別置于錐形瓶中，精密加入橙皮苷對(duì)照品溶液(濃度為2.6913mg/ml)各1ml，再精密加入80%甲醇50ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品，分別吸取供試品溶液10μl，注入HPLC儀，依法測(cè)定橙皮苷含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.9 樣品的測(cè)定 取本品3批，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，進(jìn)樣10依法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算橙皮苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

3.1 在試驗(yàn)中，取同一批號(hào)的供試品，采用甲醇、80%甲醇、乙醇分別考察了超聲處理15min的考察方法，結(jié)果表明，以80%甲醇為溶劑，超聲處理15min，再加熱回流40min，方法簡(jiǎn)便，提取充分，方法最佳。

3.2 試驗(yàn)中，比較了參考文獻(xiàn)1、2所述的流動(dòng)相、柱溫，以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)，柱溫：35℃，制劑中橙皮苷能與其他組分的色譜峰很好分離，理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算不低于7000，且方法簡(jiǎn)便、實(shí)用，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為加味皮康顆粒的質(zhì)量控制方法。

[1]于玲，王曉飛，葛海生．加味皮康顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2013，22(23)：14-16．

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：441，475．

DeterminationoftheContentofHesperidininJiaweipikangGranulesbyHPLC

YU Ling,WANG Xiao-fei,GE Hai-sheng

Institute for Drug Control of the Chinese People′s Armed Police Forces , Beijing 102613,China

ObjectiveTo establish a HPLC method for determination of the content of Hesperidin in Jiawei pikang Granules.MethodThe separation column, SHISEIDO C18 column;dmobile phase,methanol-water- 0.1% Solution of phosphoric acid(12∶13∶75); column temperature was 35℃;detection wavelength was at 284nm; flow rate was 1.0ml/min.ResultThe calibration curve of Hesperidin had a good linear relationship in the range of 0.06336μg～2.5344μg (r=0.9998) , the average recovery was 98.83%, The RSD is 1.34%(n=6).ConclusionThe method is simple, accurate. It can be used for quality control of Jiawei pikang Granules.

HPLC；Jiawei pikang Granules；Hesperidin；Content Determination

于玲，副主任藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)。E-mail：yuling.y@163.com

R284.1

A

1007-8517(2014)19-0013-02

2014.08.15)