益丹護腎湯對慢性腎炎模型大鼠的藥效學研究

1.吉林醫(yī)藥學院，吉林 吉林 132013；2.吉林市吉化集團公司總醫(yī)院二院，吉林 吉林 132021

益丹護腎湯對慢性腎炎模型大鼠的藥效學研究

劉承1李春華2雷鈞濤1陳偉偉1張筱雨1端夢瑩1周露露1禹珊珊1荊敏琪1蔣金杉1

1.吉林醫(yī)藥學院，吉林 吉林 132013；2.吉林市吉化集團公司總醫(yī)院二院，吉林 吉林 132021

研究益丹護腎湯對慢性腎炎模型大鼠的治療效果。方法：給Wistar大鼠腹腔注射同種大鼠腎皮質(zhì)和弗氏完全佐劑液，復制大鼠主動型Heymann腎炎模型，并分為Heymann腎炎模型組、地塞米松組、益丹護腎湯高、中、低劑量組和空白對照組共6組。分別在給藥處理后5d、10d、15d、20d定量測定其24h尿蛋白、尿素氮、肌酐、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等。結(jié)果：益丹護腎湯組能降低尿蛋白、肌酐、尿素氮和MDA含量，與模型對照組比較，差異具統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論：益丹護腎湯對慢性腎炎大鼠有治療作用。

益丹護腎湯；Heymann腎炎；藥效學

慢性腎炎又叫慢性腎小球腎炎，是免疫介導的常見疾病。該病多起病緩慢，臨床表現(xiàn)多樣，蛋白尿、血尿、高血壓、水腫為其基本特征，病情容易反復發(fā)作，可有不同程度的腎功能減退，病情遷延、反復，漸進性發(fā)展為慢性腎衰竭[1]。益丹護腎湯以六味地黃丸為主，輔以紅花、紫草、益母草活血化瘀,當歸補血活血,半邊蓮、玉米須利尿消腫，共奏活血化淤、利尿消腫、補中益腎之效。

本研究采用主動型Heymann腎炎大鼠模型觀察益丹護腎湯對慢性腎炎的治療效果，為該藥進一步的研究提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 Wistar大鼠，雌雄各半，體重240g左右，尿蛋白測試2次均為陰性,購自吉林醫(yī)藥學院實驗動物中心。

1.1.2 藥品與試劑 益丹護腎湯(自制)，臨用以蒸餾水配成所需劑量；醋酸地塞米松片,批號：120619,由浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)；Freund’s完全佐劑，批號：CSA9007-81-2，購于美國西格瑪公司；肌酐試劑盒，批號：20120605、尿素氮試劑盒，批號：20120617、MDA試劑盒，批號：20120623、SOD試劑盒，批號：20120613，均由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.1.3 實驗儀器 玻璃勻漿器；722型可見分光光度計，上海悅豐儀器儀表有限公司產(chǎn)品；Leica病理切片機及數(shù)據(jù)成像系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 Wistar大鼠腎炎模型復制[2，3]取Wistar大鼠60只，按體重隨機分為6組：Wistar腎炎模型組(簡稱模型組)，益丹護腎湯高、中、低劑量組(簡稱高、中、低劑量組)，地塞米松組(簡稱地米組)和空白對照組(簡稱對照組)。每組10只，雌雄各半。另取同種大鼠，雌雄兼有，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，打開腹腔，結(jié)扎主動脈，自結(jié)扎處插入針頭，剪斷肺靜脈，經(jīng)插管用生理鹽水反復沖洗，使腎臟成灰白色，摘下腎臟，取10 g腎皮質(zhì)研磨成勻漿，加弗氏完全佐劑20 ml，緩緩加入生理鹽水40 ml置乳缽研勻，使乳化均勻。除空白對照組外，每只大鼠均腹腔注射上述腎皮質(zhì)加弗氏完全佐劑乳化劑，每次2 ml/只，每周注射1次，歷時6 w。第6 w注射結(jié)束開始給藥。

1.2.2 給藥方案 益丹護腎湯高、中、低劑量組分別給予生藥27、13.5、6.8 g·kg-1，地米組5.5 mg·kg-1(臨用以蒸餾水配成溶液)，給藥容積為10ml·kg-1，1 d灌胃1次，對照組及模型組給予同體積蒸餾水，連續(xù)給藥20 d。

1.2.3 觀察指標 分別在給藥處理后5 d、10 d、15 d、20 d定量測定24 h尿蛋白含量一次；實驗結(jié)束后處死動物，取血、肝臟，測定尿肌酐、血清尿素氮、肝組織SOD、血清MDA。

2 結(jié)果

2.1 對Heymann腎炎大鼠24 h尿蛋白的影響 實驗結(jié)果表明，與對照組比較，給藥后10 d、15 d、20 d，模型組尿蛋白含量均顯著性升高，差異具統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明造模成功；與模型組比較，給藥后20 d,益丹護腎湯中劑量組尿蛋白含量明顯減少，差異具統(tǒng)計學意義(P<0.05)，高劑量及低劑量組尿蛋白含量有減少趨勢，但與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 益丹護腎湯對Heymann腎炎大鼠24 h尿蛋白含量的影響

注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，ΔP<0.05

2.2 對Heymann腎炎大鼠生化指標的影響 實驗結(jié)果表明，與對照組比較，模型組尿肌酐、血清尿素氮、血清MDA均明顯升高，差異具統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明造模成功。與模型組比較，益丹護腎湯高劑量能明顯降低血清中MDA的含量，中劑量組可顯著降低尿肌酐、血清尿素氮、血清MDA的含量，低劑量組可明顯降低血清尿素氮、血清MDA的含量，差異具統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與對照組比較，各組SOD均升高，與文獻報道不符，可能是由于機體的應激反應所致。結(jié)果見表2。

3 討論

Heymann腎炎的發(fā)病機制和病理類型與人類膜性腎病十分相似，作為研究人類膜性腎病的動物模型已達四十余年。Heymann 腎炎的發(fā)病機制比較復雜，但已經(jīng)證明，Heymann 腎炎通過體液免疫和細胞免疫，由細胞因子、補體活化、MAC、膜攻擊復合物形成，使氧化還原酶復合物以及其它炎性介質(zhì)合成增加，引發(fā)一系列炎癥反應，最終導致腎小球基底膜損傷[4、5]。

Heymann腎炎動物模型分為主動型Heymann腎炎和被動型Heymann腎炎兩種。本研究采用主動型Heymann腎炎模型，觀察益丹護腎湯不同劑量對模型動物的影響。所采用24h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平是反映腎小球濾過的常用指標[6]，同時對SOD、MDA的含量進行了考察[3]。結(jié)果顯示，益丹護腎湯可降低腎炎大鼠尿蛋白、肌酐和尿素氮含量，說明益丹護腎湯對Heymann腎炎有保護作用。在抗Heymann腎炎的機制探討中，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠尿蛋白量增加，并伴有組織MDA含量增多，說明Heymann腎炎大鼠尿蛋白形成可能與細胞氧化有關(guān)，益丹護腎湯能明顯降低MDA的含量，提示其具有明顯的抗氧化作用。同時，實驗發(fā)現(xiàn)，與空白對照組比較，各組的SOD含量均升高，與文獻報道不符，可能與機體的應激反應有關(guān)。

表2 各組大白鼠生化指標比較

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.

綜上所述，益丹護腎湯對Heymann腎炎模型有很好的治療作用，本研究的結(jié)果與治療情況基本相符，其治療Heymann腎炎的機制初步表明與降低MDA的含量有關(guān)，進一步的機制還有待深入研究。

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PharmacodynamicsStudyofYidanHushendecoctiononchronicglomerulonephritisinrats

LIU Cheng1,LI Chun-hua2,LEI Jun-tao1,CHEN Wei-wei1,ZHANG Xiao-yu1,DUAN Meng-yin1,ZHOU Lu-lu1,YU Shan-shan1,QIN Min-qi1,JIANG Jin-shan1

1.Jilin Medical College,Jilin Province,Jilin 132013,China;2.The second hospital of General Hospital of Jilin Chemical Group Company in Jilin, Jilin Province,Jilin 132021,China

Objective To study the effect of Yidan Hushen Decoction on chronic glomerulonephritis in the rats. Method Heymann nephritis model was induced by intraperitoneal injection of the same renal cortex and Freund's complete adjuvant in the rats. The rats were randomly divided into six groups: model group, Dexamethasone group, Yidan Hushen Decoction high dose group, middle dose group , low dose group and control group. Measuring 24 hour urine protein, usea nitrogen , creatinine, SOD MDA in 5d、10d、15d、20d after administration of treatment . Result Yidan Hushen Decoction group can reduce the content of urine protein,creatinine,usea nitrogen,and MDA(P<0.05). Conclusion Yidan Hushen Decoction has treatment effect on chronic glomerulonephritis.

Yidan Hushen decoction；heymann nephritis； pharmacodynamics

吉林醫(yī)藥學院大學生科研基金資助項目(201210)，吉林省教育廳“十二五”科學技術(shù)研究項目《托盤根治療糖尿病的藥效學研究》。

劉承(1990- )，男，本科。

雷鈞濤(1971- )，教授，碩士，主要從事中藥學、藥劑學研究;E-mail：leijuntao123@yahoo.com.cn

R285.6

A

1007-8517(2014)10-0007-02

2014.02.26)