肺炎克雷伯菌的耐藥性和防耐藥突變濃度的初步研究

寧夏吳忠市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 寧夏 吳忠 751100

肺炎克雷伯菌的耐藥性和防耐藥突變濃度的初步研究

王芳

寧夏吳忠市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 寧夏 吳忠 751100

目的：分析和探討臨床上分離出來的肺炎克雷伯菌對(duì)于臨床常用抗菌藥物的耐藥性，并對(duì)氟喹諾酮類藥物防耐藥突變濃度能力(MPC)進(jìn)行測(cè)定分析。方法對(duì)從臨床病人身上分離出的202株肺炎克雷伯菌進(jìn)行研究，應(yīng)用瓊脂稀釋法測(cè)定肺炎克雷伯菌的防耐藥突變濃度(MPC)，應(yīng)用微量稀釋法測(cè)定最低抑菌濃度(MIC)，應(yīng)用K-B法測(cè)定常用抗菌藥物的耐藥性。結(jié)果202株分離出的肺炎克雷伯菌，按照超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)分為陽性100株和陰性102株，對(duì)于臨床常用抗菌藥物的耐藥性，陽性組顯著高于陰性組(P<0.05)；ESBLs陽性以及ESBLs陰性的肺炎克雷伯菌其MPC、MIC以及和耐藥選擇指數(shù)(SI)測(cè)定結(jié)果各有特征。結(jié)論肺炎克雷伯菌陽性株對(duì)于目前臨床常用抗菌藥物的耐藥性較大，而且其防耐藥突變濃度也明顯高于陰性株，臨床上應(yīng)該加以關(guān)注。

肺炎克雷伯菌；耐藥性； 防耐藥突變濃度

肺炎克雷伯菌作為臨床上較為常見的條件致病菌，主要作用于人體呼吸道，常常引發(fā)呼吸道感染，如肺炎等。氟喹諾酮類藥物是目前臨床常用的治療肺炎克雷伯菌感染的藥物，但是由于其作用較廣，很多地方出現(xiàn)濫用情況，導(dǎo)致肺炎克雷伯菌的耐藥性逐年遞增。已經(jīng)引發(fā)了人們的廣泛關(guān)注。本次研究通過分析我院分離出來肺炎克雷伯菌對(duì)于臨床常用抗菌藥物的耐藥性，并對(duì)氟喹諾酮類藥物防耐藥突變濃度能力(MPC)進(jìn)行測(cè)定分析，為臨床合理使用氟喹諾酮類藥物提供相應(yīng)參考。

1.材料與方法

1.1 肺炎克雷伯菌菌株來源、實(shí)驗(yàn)試劑。

本次研究中共有肺炎克雷伯菌菌株202株，均來自2010年5月到2013年2月期間我院收治的臨床病人身上。本次研究中需用培養(yǎng)菌株的肉湯、瓊脂以及肉湯培養(yǎng)基均購自杭州天和微生物試劑有限公司，按照研究要求，分離出的202株菌株均在37℃的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待用。研究過程中所使用的抗菌藥物購自上海鈺森公司，包括阿米卡星、頭孢他啶、頭孢吡肟、左旋氧氟沙星、頭孢噻肟、頭孢西丁、慶大霉素、頭孢呋辛鈉、頭孢呋辛酯、頭孢唑啉等10種。左氧氟沙星購自廣東逸舒制藥有限公司，產(chǎn)品批號(hào)為國藥準(zhǔn)字H20059122；加替沙星購自修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，產(chǎn)品批號(hào)為國藥準(zhǔn)字H20060447。

1.2 方法

本次研究中檢測(cè)所用方法均參照衛(wèi)生部編制的第三版《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》以及2010年美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)[1]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.1 超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)測(cè)定。采用雙紙片協(xié)同法，具體測(cè)定方法和結(jié)果判定參照CLSI相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 體外藥敏試驗(yàn)(K-B)選用紙片擴(kuò)散法。具體方法為：將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測(cè)試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴(kuò)散，隨著擴(kuò)散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對(duì)數(shù)減少，從而在紙片的周圍形成濃度梯度。同時(shí)，紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的菌株不能生長，而抑菌范圍外的菌株則可以生長，從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈，抑菌圈的大小可以反映測(cè)試菌對(duì)藥物的敏感程度，并與該藥物對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)。本次研究中的質(zhì)控菌株為購自上海伊華生物科技有限公司的大腸埃希菌(ATCC25922)。

1.2.3 加替沙星以及左氧氟沙星最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定采用瓊脂對(duì)倍稀釋法。具體方法參照瓊脂稀釋法以及CLSI相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.4 防耐藥突變濃度(MPC)測(cè)定：首先將抗菌藥物按對(duì)倍法稀釋成不同的濃度，之后在直徑為90mm的平板上面均勻混合1：9的藥液和MH瓊脂培養(yǎng)基，配成梯度濃度的含藥平板，37℃孵育箱中過夜，之后挑取單個(gè)菌落接種于37℃的瓊脂培養(yǎng)基震蕩過夜，培養(yǎng)結(jié)束后離心，置于10倍MH培養(yǎng)肉湯中，37℃震蕩6h離心，將震蕩離心后的菌液調(diào)至1010CFU/ml備用。測(cè)定時(shí)，取出上述100ml菌液，均勻涂在制備好的梯度濃度的含藥平板上面，37℃孵育，在24h、48h以及72h時(shí)觀察，以不出現(xiàn)細(xì)菌生長的最低藥物濃度作為該藥物的防耐藥突變濃度。

2.結(jié)果

2.1 202株肺炎克雷伯菌10種抗菌藥物的耐藥率

表1 202株肺炎克雷伯菌10種抗菌藥物的耐藥率比較[例(%)]

2.2 MPC、MIC以及耐藥選擇指數(shù)(SI)測(cè)定結(jié)果。

氟喹諾酮類藥物(加替沙星和左氧氟沙星)防耐藥突變濃度能力(MPC)測(cè)定結(jié)果顯示，ESBLs陽性以及ESBLs陰性的肺炎克雷伯菌其MPC、MIC以及和耐藥選擇指數(shù)SI測(cè)定結(jié)果各有特征，其中ESBLs陽性的肺炎克雷伯菌對(duì)于加替沙星和左氧氟沙星的MPC呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)，而ESBLs陰性株的耐藥選擇指數(shù)(SI)更高。這一結(jié)果提示我們，肺炎克雷伯菌對(duì)于加替沙星和左氧氟沙星存在一定耐藥性，對(duì)于臨床用藥需加以關(guān)注。

3.討論

肺炎克雷伯菌作為臨床較為常見致病菌屬，其在正常人群的存在率達(dá)到5%，在住院患者中帶菌率則達(dá)到20%以上，其還是原發(fā)性肺炎的潛在危險(xiǎn)因素，可導(dǎo)致糖尿病、高血壓以及慢性阻塞性肺疾病患者并發(fā)肺部感染，嚴(yán)重威脅患者生命安全。對(duì)肺炎克雷伯菌耐藥性應(yīng)采取動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，并且及時(shí)向臨床反饋，促使臨床醫(yī)師做出相應(yīng)反饋，改變用藥習(xí)慣，靈活用藥就顯得極為重要。本次研究通過分析我院分離出來肺炎克雷伯菌對(duì)于臨床常用抗菌藥物的耐藥性，并對(duì)氟喹諾酮類藥物防耐藥突變濃度能力(MPC)進(jìn)行測(cè)定分析，結(jié)果顯示，202株分離出的肺炎克雷伯菌，按照超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)分為陽性100株和陰性102株，對(duì)于臨床常用抗菌藥物的耐藥性，陽性組顯著高于陰性組(P<0.05)；ESBLs陽性以及ESBLs陰性的肺炎克雷伯菌其MPC、MIC以及和耐藥選擇指數(shù)(SI)測(cè)定結(jié)果各有特征，其中ESBLs陽性的肺炎克雷伯菌對(duì)于加替沙星和左氧氟沙星的MPC呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)，與以往研究具有一致性[2]。這一結(jié)果提示我們，肺炎克雷伯菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥性以ESBLs陽性株較為嚴(yán)重，且其MPC也高于ESBLs陰性株，而ESBLs陰性株的耐藥選擇指數(shù)(SI)更高，臨床應(yīng)用應(yīng)加以一定關(guān)注。值得注意的是，本研究所用菌株相對(duì)較少，可在今后擴(kuò)大研究數(shù)量和研究種類，并將結(jié)果與臨床實(shí)際相結(jié)合，為臨床用藥提供更為精確、實(shí)際的建議和方法。

[1]孫杰,徐煒新,時(shí)建英,吉建,劉春紅,曹文俊.肺炎克雷伯菌的耐藥性和防耐藥突變濃度的初步研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,10:878-881.

[2]鄧曉慧,鄭風(fēng)勁,何文富,孫愛慧,劉小康.兩種氟喹諾酮類藥物對(duì)肺炎克雷伯菌防耐藥突變濃度及耐藥突變體耐藥性的研究[J].中國抗生素雜志,2008,06:384-388.

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1009-6019(2014)12-0046-02