五味子多糖對人結腸癌SW480細胞增殖和凋亡的作用

1.廣東醫學院 腫瘤研究所 廣東 東莞 523808;

2.吉林市中心醫院 吉林 吉林 132001

五味子多糖對人結腸癌SW480細胞增殖和凋亡的作用

姜恩平1王卓2

1.廣東醫學院 腫瘤研究所 廣東 東莞 523808;

2.吉林市中心醫院 吉林 吉林 132001

目的：探討五味子多糖(Schisandra polysaccharide，SCP)對人結腸癌SW480細胞的增殖和凋亡的影響及其機制。方法將人結腸癌SW480細胞分為對照組，SCP高劑量組、SCP中劑量組和SCP低劑量組，MTT法檢測腫瘤細胞增殖情況，流式細胞儀檢測凋亡，免疫組化法檢測凋亡蛋白表達。結果與對照組比較，SCP高、中、低劑量組均能不同程度抑制結腸癌SW480細胞的增殖，促進腫瘤細胞凋亡，使凋亡蛋白Bcl-2表達降低，Bax表達增加，具有劑量依賴關系。結論五味子多糖能夠抑制結腸癌SW480細胞的增殖同時促進細胞凋亡，這可能與其影響凋亡蛋白的表達相關。

五味子多糖；結腸癌；凋亡

結腸癌是臨床中常見的惡性腫瘤，近年來其發病率有上升的趨勢，治療主要依賴于手術結合放化療。但是對于晚期結腸癌，由于無法手術或是傳統的化療藥物的副作用及日益明顯的腫瘤細胞耐藥等問題，使其總有效率仍不盡人意。中藥治療結腸癌以其毒性低,有一定療效而日益引起人們的重視。五味子多糖(Schisandra polysaccharide，SCP)是傳統中藥五味子主要成分之一，具有抗衰老，增強免疫力，保肝等作用。近年研究表明，五味子多糖還具有一定的抗腫瘤作用[1-4]。本文旨在研究五味子多糖對結腸癌SW480細胞增殖和凋亡的影響并探討其機制。

1.資料與方法

1.1 實驗儀器

使用北京醫用離心機廠生產的低速離心機，其型號為LD4-2A型；型號為AvantiTM68 centrifuge，BECKMAN型的低溫高速離心機；GIS-2008天能凝膠成像分析儀，上海天能科技有限公司。

1.2 藥物和試劑

使用我院自制的五味子多糖(SCP)，通過苯酚-硫酸檢測法測定其純度為86.59%；Annexin V-FITC凋亡試劑盒購于碧云天生物試劑公司；免疫組化試劑盒購于南京建成生物有限公司； Bcl-2、Bax抗體購于武漢博士德生物公司。

1.3 實驗分組與給藥

結腸癌SW480細胞由中國科學院上海細胞生物學研究所提供。將SW480細胞分為對照組、SCP低劑量組(10mg/ml)、SCP中劑量組(20mg/ml)和SCP高劑量組(40mg/ml)等四組。將細胞接種于96孔板，每組細胞5副孔，置于CO2培養箱37℃環境中培養，接種24h后加入不同濃度的SCP后繼續培養24h，檢測各項指標。

1.4 統計學分析

2.結果

2.1 SCP對結腸癌SW480細胞增殖的影響

MTT結果顯示，與對照組增殖率100%比較，SCP高、中、低劑量組作用24h后腫瘤細胞增殖率分別43.5%、58.2%、71.3%(P<0.01，P<0.01，P<0.01，)，具有顯著的統計學差異意義，并具有一定的劑量依賴關系，表明SCP能抑制結腸癌SW480細胞增殖。

2.2 SCP對結腸癌SW480細胞凋亡的影響

流式細胞儀檢測腫瘤細胞凋亡，Annexin V-FITC和PI雙染法檢測結果顯示，與對照組的凋亡率3.9%比較，SCP高、中、低劑量的凋亡率分別為27.6%、21.9%和17.2%(P<0.01，P<0.01，P<0.01，)，具有顯著的統計學差異意義，并具有一定的劑量依賴關系，表明SCP能促進結腸癌細胞的凋亡，并具有一定的劑量依賴關系。

2.3 SCP對結腸癌SW480細胞凋亡蛋白表達的影響

免疫組化方法檢測腫瘤細胞凋亡蛋白的表達情況。顯微鏡下觀察，胞漿中有棕黃色顆粒者為陽性細胞。細胞陽性表達率=單位面積內陽性細胞數/細胞總數×100%。結果顯示，與對照組(31.4%和10.8%)比較，SCP高、中、低劑量組能不同程度的降低腫瘤細胞Bcl-2蛋白的表達(12.4%、17.6%、21.5%)，增加Bax蛋白的表達(32.0%、25.8%、19.1%)，并且具有一定的劑量依賴關系。

3.討論

細胞凋亡是細胞程序性死亡的一個重要表現，整個凋亡過程涉及多種凋亡因子的調控，包括了激活因子、凋亡促進基因和抑癌基因等。在凋亡過程中伴隨著細胞質和染色質濃縮、細胞核崩解、細胞膜皺縮，最后形成凋亡小體。近年來的研究發現，許多腫瘤不僅存在細胞增殖，同時也存在細胞凋亡受阻，二者的不平衡狀態是導致腫瘤惡性生長的基礎[5]。研究表明很多抗腫瘤藥如環磷酰胺、順鉑等都可以促進腫瘤細胞凋亡，因此有人認為其抗腫瘤作用機制主要是誘導細胞凋亡。研究發現，一些腫瘤細胞對化療藥物敏感性強于正常的細胞，所以在設計抗腫瘤藥物時可以考慮選擇能夠誘導腫瘤細胞凋亡的藥物。研究表明一些從中藥中提取的活性成分能有效抑制腫瘤細胞增殖，促進腫瘤細胞凋亡。SCP是從傳統中藥五味子提取得來的大分子化合物，具有一定的抗腫瘤作用。本研究結果顯示，不同劑量的SCP作用24小時后均能不同程度的抑制結腸癌SW480細胞的增殖，誘導腫瘤細胞的凋亡，同時能夠降低Bcl-2蛋白的表達，增加Bax蛋白的表達，具有一定的劑量依賴關系，表明SCP能夠抑制結腸癌細胞增殖，誘導腫瘤細胞凋亡與其影響凋亡相關蛋白的表達密切相關。

綜上所述，SCP具有一定的抗結腸癌的作用，本研究為SCP將來成為治療結腸癌的臨床藥物提供了研究基礎，其具體作用機制有待進一步研究。

[1]閆舒.五味子多糖的最新研究進展[J].江蘇大學學報(醫學版)，2009，19(04)：366-368.

[2]韓學忠.五味子多糖提取純化、分級及應用[J].中醫藥學報，2011，33(16)：235-236.

[3]黃玲.五味子多糖對S180荷瘤小鼠抑瘤作用的研究[J].福建中醫學院學報，2011，13(03)：224-226.

[4]王艷杰.五味子多糖對H22、S180柚荷瘤小鼠抑制作用的實驗研究[J].中醫藥信息，2010，24(15)：264-265.

[5]陳莎莎，曹菲，高峰，等.大鼠源性重組天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3基因構建及其對細胞的促凋亡效應[J].中華醫學雜志，2009，89(43)：3074-3078.

姜恩平(1975-)，女，吉林省吉林市人，副教授，博士，廣東醫學院腫瘤研究所，主要從事腫瘤藥理及心血管藥理研究。

廣東醫學院博士基金資助課題(B2012063)

R285

B

1009-6019(2014)12-0034-02