烏司他丁對急性重癥胰腺炎大鼠血清TNF-α及IL-1β水平的影響

山西太原西山煤電集團(tuán)職工總醫(yī)院 普外科 山西 太原 030053

烏司他丁對急性重癥胰腺炎大鼠血清TNF-α及IL-1β水平的影響

張葉鋒

山西太原西山煤電集團(tuán)職工總醫(yī)院 普外科 山西 太原 030053

目的：探討烏司他丁對重癥胰腺炎大鼠TNF-α和IL-1β水平的影響。方法胰膽管逆行注射牛磺膽酸鈉制作大鼠SAP模型, wistar大鼠60分為3組， 烏司他丁治療組，重癥胰腺炎(SAP)組，對照(NC)組，每組20只。術(shù)后6h對各組大鼠行血清淀粉酶、TNF-α及IL-1β的檢測，并取各組大鼠胰腺組織標(biāo)本行病理學(xué)觀察。結(jié)果烏司他丁治療組血清淀粉酶、TNF-α及IL-1β較SAP組明顯降低，胰腺組織壞死程度減輕(P<0.05)。結(jié)論烏司他丁可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子水平，改善胰腺組織微循環(huán)，減輕全身炎癥反應(yīng)，對SAP有治療作用。

；烏司他丁；胰腺炎；細(xì)胞因子

急性重癥胰腺炎(SAP)是一種起病急、進(jìn)展快、并發(fā)癥多的急腹癥。其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，但目前隨著研究的不斷深入，細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)在SAP致病中的作用越來越受到人們的關(guān)注。烏司他丁是屬蛋白酶抑制劑，具有抑制胰蛋白酶等各種胰酶活性的作用，減輕炎癥反應(yīng)。在急性重癥胰腺炎時，可以抑制胰腺的分泌，減少胰液的對腹腔臟器的炎癥，改善全身微循環(huán)障礙，從而達(dá)到對急性胰腺炎的治療作用。本實驗主要探討烏司他丁在SAP時對細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用。

1.材料與方法

1.1 實驗動物及分組：雄性wistar大鼠90只，體重約200g左右。隨機(jī)分為3組，每組30只。SAP組為A組，對照組(NC)為B組，烏司他丁組為C組。

1.2 主要試劑及儀器：5%牛磺膽酸鈉，TNF-α和IL-1β試劑盒。烏司他丁(10萬單位)

1.3 實驗方法及過程：大鼠術(shù)前12h禁食，自由飲水。A組：1%戊巴比妥鈉(30mg/kg)進(jìn)行麻醉，消毒上腹部，正中切口入腹，然后微量輸液泵胰膽管逆行以0.1cm/min速度恒速泵入5%牛磺膽酸鈉(0.1ml/kg)造模，注射完畢指壓穿刺點，查無滲漏，縫合腹壁，關(guān)腹前腹腔注射0.5ml生理鹽水。B組：僅做剖腹術(shù)，輕輕翻動胰腺組織。C組：造模后，烏司他丁5萬單位皮下注射。

1.4 術(shù)后處理及觀察指標(biāo)：造模6h后各大鼠麻醉后剖腹，腹主動脈取血,迅速離心(2000r/min,4min),取上清液于-20℃冰箱內(nèi)冷凍，放免法測TNF-α及IL-1β和血清淀粉酶，術(shù)后12 h處同時取全部胰腺組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，行HE染色，光鏡下觀察各組胰腺組織的病理變化，以Kusske等[1]方法將其分級評分，由病理科醫(yī)師專人完成。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計軟件處理，多組間比較采用方差分析、q檢驗,P﹤0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果：見表1。

表1 各組大鼠血清淀粉酶、TNF-α及IL-1β的含量和病理學(xué)評分

血清淀粉酶、胰腺組織病理評分是反映胰腺組織損傷程度較客觀的指標(biāo),表1顯示：SAP 組各項指標(biāo)明顯高于對照組。烏司他丁組各項指標(biāo)較低低,但高于對照組(P<0.05)，且TNF-α，IL-1β的數(shù)值較SAP 組偏低，但明顯高于對照組(P<0.05)。

3.討論

SAP發(fā)病機(jī)制目前主要有胰腺微循環(huán)障礙，白細(xì)胞依賴性全身炎癥反應(yīng)和胰蛋白酶的激活。但近年來，炎癥介質(zhì)學(xué)說的提出，使SAP的發(fā)展機(jī)制從微觀上有了進(jìn)一步的了解，在臨床治療方面有著新的指導(dǎo)意義。在急性重癥胰腺炎時，體內(nèi)各種細(xì)胞因子啟動，促使全身炎癥反應(yīng)的發(fā)生，加快急性胰腺炎的病情發(fā)展。主要細(xì)胞因子有IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β等。

急性胰腺炎(AP)為胰腺自身消化性疾病，少部分輕癥急性胰腺炎發(fā)展為SAP，其最終結(jié)果是胰腺局部滲出和全身炎癥發(fā)應(yīng)的發(fā)生，這可能與炎癥介質(zhì)過度釋放有關(guān)[2]。AP時胰腺腺泡細(xì)胞的損傷，引發(fā)活性胰酶的釋放和單核巨噬細(xì)胞的激活，導(dǎo)致循環(huán)內(nèi)單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞(PMN) 游出、激活，而PMN又刺激破壞性炎癥介質(zhì)的釋放，同時各種炎癥介質(zhì)被吸收入血，損傷腹腔臟器組織結(jié)構(gòu)的變化，引起各個臟器功能的不全，從而導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)(S IRS) ，甚至發(fā)生多器官功能障礙( MODS) 。

TNF-α又稱惡質(zhì)素, 主要由活化的單核- 巨噬細(xì)胞產(chǎn)生, 其通過膜結(jié)合受體作用，在天然免疫和特異性免疫之間起橋梁作用, 但又是特異性免疫和炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)。在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能和代謝方面有重要作用。SAP與TNF-α水平的關(guān)系業(yè)已證實, TNF-α是SAP最早升高的炎癥介質(zhì)，SAP發(fā)病期間, TNF-α可以刺激IL-6、IL-8大量釋放外,還能刺激幾乎所有嚴(yán)重敗血癥中有害物質(zhì)的產(chǎn)生。 TNF-α的大量的釋放是導(dǎo)致SAP的發(fā)生重要因素之一，可以引發(fā)細(xì)胞因子的瀑布效應(yīng)，其對細(xì)胞表面粘附分子有上調(diào)作用，并調(diào)節(jié)細(xì)胞的趨化功能及其相互作用，從而使毛細(xì)血管通透性增加,血漿外滲，引起各個臟器不同程度的缺血。TNF-α是表現(xiàn)最活躍的細(xì)胞因子,其過度的釋放對機(jī)體具有嚴(yán)重的毒性作用，從而誘發(fā)胰腺腺泡細(xì)胞的凋亡，加重胰腺組織的壞死。本實驗結(jié)果也進(jìn)一步證明 , 在SAP時,與胰腺組織的壞死程度有正相關(guān)作用，TNF-α含量變化又與血清淀粉每的活性變化呈平行趨勢 。

IL-1β也是最早釋放的炎性介質(zhì)之一，具有強烈的生物學(xué)活性。主要由胰腺內(nèi)浸潤的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生, 直接可以誘導(dǎo)TNF-α及的分泌, 并和TNF-α相互作用，具有協(xié)同作用，在全身炎癥反應(yīng)過程中，并能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的表達(dá)，加快白細(xì)胞在病變胰腺組織的聚集,加快胰腺腺泡細(xì)胞凋亡, 促進(jìn)內(nèi)毒素產(chǎn)生及腸道細(xì)菌移位。在實驗中觀察到IL-1β隨胰腺組織的病變程度的減輕，檢測到的數(shù)值明顯下降，并有統(tǒng)計學(xué)意義，說明IL-1β在SAP時，與急性胰腺炎的進(jìn)展有一定的正相關(guān)性，烏司他丁對SAP時，IL-1β的釋放有抑制作用。

在SAP 時，TNF -α，IL -1β等細(xì)胞因子的大量釋放，誘發(fā)急性期反應(yīng)，催化和放大炎性反應(yīng)，造成腹腔臟器組織細(xì)胞的損傷。本實驗示：SAP組TNF -α，IL-1β指標(biāo)明顯高于對照組，與Norman等[3]的研究結(jié)果符合。而烏司他丁組TNF -α，IL-1β水平較SAP組明顯降低，說明烏司他丁在抑制胰蛋白酶等各種胰酶活性的作用，減輕炎癥反應(yīng)的同時可以調(diào)節(jié)TNF -α，IL -1β的水平。但烏司他丁調(diào)節(jié)細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β)的具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1]Kusske AM, Rongione AJ, Ashley SW, et al.Interleukin210 p revents death in lethal necrotizing pancretitis in mice [ J ].Surgery,1996, 120 (2) : 284-288

[2]孫大裕，金忱，鐘良，等.大鼠急性胰腺炎時血液流變學(xué)和血流動力學(xué)改變的意義[J] 中華消化雜志，2004,22：667-670.

[3]Wilson PG，manji M，Neoptolemos JP.Acute pancreatitis as amodel of sepsis [J].Amntimicrob Chemother，2012，41(Suppla)：51-63

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1009-6019(2014)12-0024-01