p27和cyclin D1在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及其與淋巴結轉移的關系

鄧敏 趙茜 馬建中

(上海市第二人民醫院病理科，上海 200011)

近年來，我國甲狀腺癌的發病率呈逐漸上升趨勢。甲狀腺癌中最主要的類型是甲狀腺乳頭狀癌。淋巴結轉移是甲狀腺乳頭狀癌復發的重要因素并與患者預后相關。本研究檢測了細胞周期調控因子p27、細胞周期蛋白D1(cyclin D1)在甲狀腺乳頭狀癌中的表達并分析了它們與乳頭狀癌淋巴結轉移的關系，旨在了解它們在甲狀腺乳頭狀癌發生發展中的作用，為甲狀腺乳頭狀癌的診斷和預后判斷提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2000—2013年手術切除的甲狀腺良性病變60例(其中男性10例，女性50例；年齡20～72歲；包括結節性甲狀腺腫30例，甲狀腺腺瘤30例)和甲狀腺乳頭狀癌92例(其中男性13例，女性79例；年齡23～75歲；有淋巴結轉移者42例，無淋巴結轉移者50例)。診斷均按照2004年世界衛生組織內分泌腫瘤分類標準。

1.2 方法 免疫組織化學試劑、p27抗體、cyclin D1抗體購于上海長島生物技術公司，二氨基聯苯胺(3,3′-diaminobenzidine，DAB)顯色劑購于基因科技(上海)有限公司。采用免疫組織化學EnVision兩步法檢測組織中P27和cyclin D2的表達，DAB顯色，蘇木精復染。用已知陽性切片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液(phosphate-buffered saline，PBS)代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判斷 p27、cyclin D1以核著色為陽性，采用半定量法對細胞核著色強度和陽性細胞率進行評分。細胞核著色強度評分：無著色0分；淡黃色1分；棕黃色2分；棕褐色3分。計數400個細胞，按陽性細胞所占比例評分，<5%為0分；5%～25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；>75%為4分。2項評分相加：<2分為陰性(-)；2～3分為弱陽性(+)；4～5分為中度陽性(++)；6～7分為強陽性(+++)。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件進行統計學分析，計數資料組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

在60例甲狀腺良性病變中，p27陽性表達者55例，多為中到強陽性，陽性表達率為91.7%；在92例甲狀腺乳頭狀癌中，p27陽性表達者57例，陽性表達率為62.0%；p27在甲狀腺乳頭狀癌和良性病變中的表達差異有統計學意義(P<0.01)。在50例無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中，p27陽性表達者38例，陽性表達率為76.0%；在42例有淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中，p27陽性表達者19例，陽性表達率為45.2%；p27在有淋巴結轉移和無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中的表達差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

在60例甲狀腺良性病變中，cyclin D1陽性表達者17例，以弱陽性為主，陽性表達率為28.3%；在92例甲狀腺乳頭狀癌中，cyclin D1陽性表達者58例，多為中到強陽性，陽性表達率為63.0%；cyclin D1在甲狀腺乳頭狀癌和良性病變中的表達差異有統計學意義(P<0.01)。在50例無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中，cyclin D1陽性表達者25例，陽性表達率為50.0%；在42例有淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中，cyclin D1陽性表達者33例，陽性表達率為78.6%；cyclin D1在有淋巴結轉移和無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中的表達差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。有淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中p27和cyclin D1的表達呈負相關(r=-0.46，P<0.01)。

表1 p27、cyclin D1在甲狀腺病變中的表達情況 (n)

3 討 論

現代醫學認為，腫瘤是一種細胞周期性疾病，細胞周期調節失控使細胞無限制增殖，導致腫瘤的發生。細胞周期有G1/S和G2/M兩個關鍵限制點，主要由細胞周期蛋白(cyclins)、細胞周期蛋白依賴性激酶(CDKs)、細胞周期蛋白依賴性激酶抑制物(CDKIs)進行調控。cyclin D1是細胞周期的正調控因子，其通過使Rb蛋白磷酸化，促使細胞由G1期進入S期，引起細胞增殖。p27是細胞周期的負調控因子，可抑制cyclin D1-CDK激酶活性，阻止細胞由G1期進入S期，從而抑制細胞的增殖。

cyclin D1基因是1991年Motokura等[1]在甲狀旁腺腺瘤的研究中發現的，該基因定位于11q13，全長120 kb，有5個外顯子，4個內含子，編碼含295個氨基酸殘基的蛋白質。研究[2]表明，cyclin D1過表達可縮短細胞周期的G1期，促進細胞進入S期，導致細胞過度增殖而發生腫瘤。cyclin D1在許多惡性腫瘤中均異常高表達。Yu等[3]研究發現，乳腺癌、非小細胞肺癌等腫瘤中cyclin D1的過表達與腫瘤的淋巴結轉移有關。Khoo等[4]發現，有淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中cyclin D1的陽性表達率明顯高于對照組。在本研究中，cyclin D1在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性表達率明顯高于甲狀腺良性病變，而且有淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中cyclin D1陽性表達率高于無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌，差異均有統計學意義。上述結果說明，cyclin D1與甲狀腺乳頭狀癌的發生有關，而且與腫瘤的淋巴結轉移和預后有關。

p27基因是在1994年由Polyak等[5]發現，該基因定位于12p13；其編碼的蛋白質含有198個氨基酸殘基，分子量為27 kD，屬于Cip/Kip蛋白家族成員，又稱為激酶抑制蛋白1，是CDKIs家族的成員。p27是一種抑癌基因，可抑制CDKs復合物的活性，阻斷Rb磷酸化，阻止細胞通過G1/S期轉換，抑制細胞分裂增殖，促進細胞凋亡。P27蛋白水平的降低可導致細胞持續增殖，促進腫瘤的發生。p27還具有增強細胞間黏附的功能，p27的減少與E-cadherin的下調引起的細胞間接觸抑制有關[6]。研究[7]表明，在許多腫瘤中都有p27低表達。本研究顯示，p27在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性表達率低于良性病變，有淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中p27陽性表達率低于無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌；差異均有統計學意義；這提示p27水平的下降可能促進了甲狀腺乳頭狀癌的發生、發展，p27可作為甲狀腺癌診斷和預后的參考指標。這與Ito等[8]的研究一致，該研究發現p27的低表達與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移和遠處轉移有關，認為p27是判斷甲狀腺乳頭狀癌惡性程度及預后的重要指標。

Khoo等[4]對125例甲狀腺乳頭狀癌的研究發現，p27低表達和cyclin D1高表達對甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移有很好的預測價值。本研究也顯示，p27低表達和cyclin D1高表達與淋巴結轉移顯著相關；p27和cyclin D1在有淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌中的表達呈負相關。然而，p27和cyclin D1在甲狀腺乳頭狀癌的發生發展中的作用機制尚不清楚，有待進一步研究。

[1]Motokura T,Bloom T,Kim HG,et al.A novel cyclin encoded by a bell-linked candidate oncogene[J].Nature,1991,350(6318):512-515.

[2]Fu M,Wang C,Li Z,et al.Minireview:cyclin D1: normal and abnormal functions[J].Endocrinology,2004,145(12):5439-5447.

[3]Yu Z,Weinberger PM,Haffty BG,et al.Cyclin d1 is a valuable prognostic marker in oropharyngeal squamous cell carcinoma[J].Clin Cancer Res,2005,11(3):1160-1166.

[4]Khoo ML,Beasley NJ,Ezzat S,et al.Overexpression of cyclin D1 and under expression of p27 predict lymph node metastases in papillary thyroid carcinoma[J].J Clin Endocrinol Metab,2002,87(4):1814-1818.

[5]Polyak K,Kato JY,Solomon MJ,et al.p27Kip1,a cyclin-Cdk inhibitor,links transforming growth factor-beta and contact inhibition to cell cycle arrest[J].Genes Dev,1994,8(1):9-22.

[6]Motti ML,Califano D,Baldassarre G,et al.Reduced E-cadherin expression contributes to the loss of p27kip1-mediated mechanism of contact inhibition in thyroid anaplastic carcinomas[J].Carcinogenesis,2005,26(6):1021-1034.

[7]Yang W,Shen J,Wu M,et al.Repression of transcription of the p27(Kip1) cyclin -dependent kinase inhibitor gene by c-Myc[J].Oncogene,2001,20(14):1688-1702.

[8]Ito Y,Uruno T,Takamura Y,et al.Papillary microcarcinomas of the thyroid with preoperatively detectable lymph node metastasis show significantly higher aggressive characteristics on immunohistochemical examination[J].Oncology,2005,68(2-3):87-96.