HPLC法測(cè)定長(zhǎng)白山牛皮杜鵑中綠原酸的含量*

何曉燕，喬淑芬，苗婷婷

(通化師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，吉林 通化 134002)

牛皮杜鵑(RhododendronchrysanthumPall.)為杜鵑花科植物，又稱牛皮茶、高山茶等[1]．具有較高的觀賞價(jià)值，廣泛分布于長(zhǎng)白山海拔1300～2600m的高山上，對(duì)高海拔有較強(qiáng)的適應(yīng)性[2]．牛皮杜鵑主要含有黃酮類及單寧酸類化合物[3]，其中蘆丁具有抗炎、抗病毒、鎮(zhèn)痛、降低毛細(xì)血管通透性引起的出血癥等方面的作用．目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)牛皮杜娟的化學(xué)成分研究報(bào)道很少．本文擬通過(guò)對(duì)長(zhǎng)白山牛皮杜鵑進(jìn)行化學(xué)成分的提取，測(cè)定其所含綠原酸的含量[4-6]，以探尋一種簡(jiǎn)便、有效的HPLC測(cè)定方法，為今后進(jìn)一步研究開發(fā)牛皮杜鵑的應(yīng)用價(jià)值奠定基礎(chǔ)．

1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

牛皮杜鵑葉，采自于長(zhǎng)白山，經(jīng)通化師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院周繇教授鑒定．干燥粉碎，備用．

1.2 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫儀器有限公司)；FA1104電子分析天平；KQ-500型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)．綠原酸對(duì)照品購(gòu)自于中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)為110753-200413)，乙腈(色譜純)，磷酸(分析純)，娃哈哈純凈水，其它試劑均為分析純．

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸溶液(15:85)；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm；流速1.0ml·min-1；柱溫:25℃．

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對(duì)照品5.130mg，用甲醇溶解，制成濃度為0.513mg·ml-1的對(duì)照品溶液．

2.3 供試品溶液的制備

取牛皮杜鵑粉末1g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入50ml的70%乙醇，稱定質(zhì)量，超聲提取30min后取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，0.23μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，備用．

2.4 線性范圍考察

精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液1、5、10、15、20μl，依次進(jìn)樣，記錄峰面積．以進(jìn)樣量(μl)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程為Y=700.86X+25.711(r=0.9995)，結(jié)果表明綠原酸在0.513～10.26μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好．

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算得RSD值為1.06%，表明儀器精密度較好．

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批牛皮杜鵑粉末約1g，按2.3項(xiàng)方法制備供試品溶液6份，分別進(jìn)樣20μl，記錄峰面積．測(cè)得RSD值為1.32%，表明重現(xiàn)性較好．

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣20μl，記錄峰面積，測(cè)得RSD值為2.36%．表明在24h內(nèi)供試品的穩(wěn)定性較好．

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的牛皮杜鵑粉末約1g，共6份，于每份中加入綠原酸對(duì)照品溶液2ml，按2.3項(xiàng)方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣20μl，記錄峰面積．計(jì)算綠原酸平均回收率為98.9%，表明回收良好．結(jié)果見表1．

表1 綠原酸加樣回收試驗(yàn)(n=6)

2.9 樣品含量測(cè)定

精密吸取按2.3項(xiàng)方法制備的供試品溶液20μl，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得出綠原酸的含量為0.754mg·g-1．見圖1、圖2．

3 討論

綠原酸具有較強(qiáng)的生物活性，具有廣泛的抗菌作用，為臨床上祛風(fēng)除濕、強(qiáng)筋壯骨的物質(zhì)基礎(chǔ)．本文首次建立了長(zhǎng)白山牛皮杜鵑中綠原酸的HPLC含量測(cè)定方法，此法簡(jiǎn)便快捷、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好．此外，筆者也曾對(duì)長(zhǎng)白山牛皮杜鵑的不同溶劑提取物的抗炎鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行了系統(tǒng)研究，結(jié)果表明此方面的活性較強(qiáng)．因此綠原酸作為其活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制是完全必要，這也為今后進(jìn)一步系統(tǒng)研究牛皮杜鵑的化學(xué)成分奠定基礎(chǔ)．

圖1 綠原酸對(duì)照品的HPLC

圖2 牛皮杜鵑供試品的HPLC