KIF14過表達與肝細胞肝癌的發生密切相關

李曉娜，韓 雪，楊 濤 (.河北省體育科學研究所普通外科，河北 石家莊 050000；.河北省石家莊市第一醫院普通外科，河北 石家莊 0500)

·論著·

KIF14過表達與肝細胞肝癌的發生密切相關

李曉娜1，韓 雪1，楊 濤2
(1.河北省體育科學研究所普通外科，河北 石家莊 050000；2.河北省石家莊市第一醫院普通外科，河北 石家莊 050011)

目的探討KIF14表達與肝細胞肝癌發生的關系。方法應用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測50例肝細胞肝癌組織及50例正常肝組織中KIF14的表達。結果與正常肝組織相比，KIF14 mRNA在肝細胞肝癌組織中過表達(P<0.01)。肝細胞肝癌中KIF14 DNA拷貝數也明顯高于正常肝組織(P<0.01)。結論KIF14過表達在肝細胞肝癌的發生過程中發揮著重要作用，它也許可以作為肝癌的潛在治療靶點。

肝腫瘤；驅動蛋白；分子靶向治療

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.07.006

肝細胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是全世界最常見的內臟腫瘤之一[1]。HCC的治療包括傳統的手術治療、肝臟移植和分子靶向治療，但是由于HCC發病機制尚不明確，不能做到對HCC早期診斷、早期治療，從而不能有效地改善HCC患者的生存質量及生存率。人類驅動蛋白在人類腫瘤的發生過程中發揮著重要作用。深入研究驅動蛋白的具體作用機制和功能可能有利于腫瘤靶向治療的發展[2-3]。KIF14作為驅動蛋白家族成員[4]，在1q區域扮演著癌基因角色，這可能是KIF14導致了腫瘤發生中基因的不穩定[5-6]。同時KIF14在細胞周期中規律存在，與有絲分裂進程相關。本研究通過檢測50例HCC組織與50例正常肝組織中KIF14的表達，探討KIF14表達與HCC發生的關系。

1 資料與方法

1.1 實驗材料：實驗標本均來源于2010年10月—2011年12月我院50例手術患者HCC組織，均經術后病理證實，其中男性29例 ，女性21例 ，年齡41～63歲，平均(53.06±6.68)歲；50例正常肝組織取自肝血管瘤患者術后標本，其中男性23例 ，女性27例 ，年齡37～59歲，平均(50.00±6.70)歲。實驗標本獲得后保存于-80℃冰箱中。所有100例實驗標本獲取均通過我院倫理審查機構許可并書面征得所有患者同意。2組性別、年齡差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 組織RNA分離和實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-timequantitativepolymerasechainreaction，RT-qPCR)：根據說明書使用TRIZOL試劑提取總RNA。使用5μg總RNA和SuperScriptⅡ及寡dT執行逆轉錄。RT-qPCR分析使用FastSYBRGreenMasterMix系統。KIF14引物和GAPDH內參序列如下，KIF14,5′-TGGTGAAATGGCCTGTACAAGT-3′(forward),5′-GGCAACCAGTTAACCCTTTGAG-3′(reverse);GAPDH,5′-GAAATCCCATCACCATCTTC-CAGG-3′(forward),5′-GAGCCCCAGCCTTCTCCATG-3′(reverse)。PCR反應條件如下，95℃ 20s；95℃ 3min；60℃ 30s；使用ABI-7500(應用生物系統)共計40個循環。相對定量方法得到的CT值，通過三聯反應測定所有樣本的KIF14 和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)。取探測基因的可用三聯反應CT平均值，減去GAPDH的CT值，獲得ΔCT。KIF14的相對mRNA表達水平應用2-ΔCT方法計算。

1.3 實時熒光定量PCR評價拷貝數：按照制造商的說明，用QIAampDNA迷你工具包 (Qiagen)，從組織中提取DNA。使用TaqMan基因拷貝數檢測試劑盒的應用生物系統計算KIF14 拷貝數。使用一套ASXL2(應用生物系統)引物作為參考基因，如Reis-Filho等所述。在每個標本中獲得KIF14 到ASXL2的復制比例作為每個試樣的KIF14拷貝數。

2 結 果

HCC組織中KIF14mRNA和KIF14DNA拷貝數明顯高于正常肝臟組織，差異有統計學意義(P<0.01)，見表 1 。

GroupsKIF14mRNAKIF14DNANormallivertissues0．28±0．160．84±0．43HCCtissues1．81±0．994．77±2．58 t10．78810．625 P0．0000．000

3 討 論

驅動蛋白超家族成員，在人類多種腫瘤的發生過程中起著重要的作用。KIF14作為其重要成員，在人類腫瘤發生、發展過程中的作用越來越受到人們的重視。本研究結果顯示在HCC組織中KIF14 mRNA表達水平及KIF14 DNA拷貝數均顯著高于正常肝組織，這表明 KIF14有可能在人類肝細胞肝癌發生過程中扮演著重要角色。

KIF14是胞質分裂和染色體分離的必要條件，同時還具有在細胞分裂中期使染色體對齊的作用[7]，這些均說明KIF14在人類腫瘤發生的過程中具有不可忽視的作用。目前已有研究[6,8-9]發現，KIF14在卵巢癌、視網膜母細胞瘤、乳腺癌、腦膠質瘤等多種腫瘤中表達明顯增加，并且認為，KIF14在卵巢癌、肺癌、腦膠質瘤中是一個獨立的預后標志和潛在的治療靶點。本研究中KIF14在HCC中高表達，證明KIF14在HCC的發生發展過程中起重要作用。但是，KIF14在HCC發生過程中的具體作用機制是什么目前還不明確，需要進一步深入研究。

目前KIF14在人類腫瘤發生過程中的具體作用機制及其調控機制還不明確，但KIF14在多種人類腫瘤組織中異常高表達證明其在研究人類腫瘤發生機制中有著重要的意義。并且由于KIF14在HCC組織中特異性的高表達，有可能使其成為HCC早期診斷的生物學標志及新的治療靶點。

[1] 楊濤,孫軼飛,王立偉，等.KIF14過表達與肝細胞肝癌手術預后密切相關[J].河北醫科大學學報,2014,35(3):263-265.

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(本文編輯：許卓文)

KIF14EXPRESSIONCLOSELYRELATEDWITHHEPATOCELLULAR
CARCINOMATUMORIGENESIS

LIXiaona1,HANXue1,YANGTao2
(1.DepartmentofGeneralSurgery,theSportsScienceInstituteofHebeiProvince,Shijiazhuang050000,China;2.DepartmentofGeneralSurgery,theFirstHospitalofShijiazhuangCity,HebeiProvince,Shijiazhuang050011,China)

CT:ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweenKIF14expressionandhepatocellularcarcinoma(HCC).MethodsThisstudyexploredthecorrelationbetweenKIF14expressionandhepatocellularcarcinomabydeterminingKIF14expressioninHCCtissuesandnormallivertissues.Real-timequantitativepolymerasechainreactionwasappliedtotestKIF14in50casesofHCCtissuesand50casesofnormallivertissues.ResultsComparedwiththenormallivertissues,KIF14mRNAinHCCtissueswasoverexpressed(P<0.01).KIF14DNAcopiesinHCCtissueswerealsosignificantlyhigherthanthoseinnormallivertissues(P<0.01).ConclusionKIF14overexpressionisveryimportantinHCCtumorigenesisandmayserveasapotentialtherapeutictargetforHCC.

liverneoplasms;kinesin;molecuartargetedtherapy

2014-04-02；

2014-05-07

河北省科學技術研究與發展計劃項目(132777236)

李曉娜(1979-) 女，滿族，吉林吉林人，河北省體育科學研究所主治醫師，醫學碩士，從事普通外科疾病診治研究。

R735.7

A

1007-3205(2014)07-0761-02