氣相色譜法測定動物油脂中反式脂肪酸

黃向榮 緒紅霞 陳秀華 王冬究 計文芳

氣相色譜法測定動物油脂中反式脂肪酸

黃向榮 緒紅霞 陳秀華 王冬究 計文芳

反式脂肪酸；動物油脂；氣相色譜

反式脂肪酸是一類不飽和脂肪酸, 許多研究表明, 反式脂肪酸對機體的生物學作用主要表現在對機體多不飽和脂肪酸代謝的干擾, 對血脂和脂蛋白的影響及對胎兒生長發育的抑制作用［1］。目前, 關于有關脂肪酸分析的報道較多, 而對動物油脂中反式脂肪酸的報道卻較少。本文用毛細管氣相色譜法測定動物油脂中的反式脂肪酸, 獲得較滿意的結果, 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 儀器 Agilent 6890型氣相色譜儀；7683自動進樣器；HP Chemstation 化學工作站(美國安捷倫公司)；HWS26型電熱水浴鍋：上海一恒科技有限公司。

1. 2 試劑和樣品 37種脂肪酸甲酯混合標準品、三氟化硼-甲醇, 均為Sigma公司產品；正己烷；甲醇、氫氧化鈉、無水硫酸鈉：均為分析純；樣品選用豬油、牛油、羊油、雞油、鴨油5種, 均保存于4℃冰箱待檢。

1. 3 色譜條件 色譜柱：SP-2560毛細管柱(100.0 mm×0.25 mm×0.20 μm);分流比25:1；柱溫：程序升溫：初始溫度140℃, 保持5 min,以3.00℃/min升至230℃, 保持10 min；進樣口溫度：250℃；檢測器:氫火焰離子化檢測器(FID)溫度為260℃；載氣：高純氮；柱流速：1.0 ml/min(恒流)；氫氣流速：40 ml/min;空氣流速400 ml/min;進樣量1.0 μl。

1. 4 樣品甲酯化［2］取熔融后的油脂樣品3~4滴于50 ml三角燒瓶中, 加5 ml 4 mol/L氫氧化鈉-甲醇溶液, 使之溶解。于80℃水浴加熱皂化回流30 min后加入12%~15%的三氟化硼-甲醇溶液2 ml, 再回流。冷卻至室溫后加入正己烷和少量飽和氯化鈉溶液并輕搖三角燒瓶數次, 靜置分層。取上清液GC測定。

2 結果

2. 1 色譜分析中色譜柱的選擇由于脂肪酸各個峰之間比較難分離, 較短的色譜柱達不到分離的目的。若要完全分離檢測順、反式脂肪酸, 應采用長色譜柱, 當然也不是越長越好, Sidisy等［3］證明當色譜柱柱長從100 m增加到150 m,順反式異構體的分離僅有細微的改變, 但分析時間卻大大延長。本實驗采用的100 m長色譜柱, 能完全分離檢測順、反式脂肪酸。分離譜圖見圖1。

2. 2 程序升溫對實驗結果的影響采用一級程序升溫, 由于十八碳三稀酸甲酯組分較多, 難以分離。考察不同初始溫度對樣品中反式脂肪酸分離度的影響, 最后確定最佳色譜程序為初始溫度140℃, 保持5 min,以3.00℃/min升至230℃, 保持10 min。在此色譜柱溫條件下, 37種脂肪酸甲酯混合標準品中所有順、反式脂肪酸都實現了基線分離且分形對稱。

2. 3 線性范圍及最低檢測限脂肪酸甲酯混合標準為代表,測定六種物質的線性范圍和檢測限, 在最佳色譜條件下, 進行氣相色譜分析, 以各組分濃度為橫坐標, 對應峰面積為縱坐標, 繪制標準曲線。在0.025~1.000 mg/ml的濃度范圍內各物質回歸方程的相關系數為0.994以上。以基線噪聲的3倍所對應的濃度為方法的檢測限, 檢測限3.89~7.85 μg/ml, 完全可以滿足檢測要求。

圖1 脂肪酸甲酯混合標準液氣相色譜圖

2. 4 方法的精密度和回收率取同一豬油樣品9份, 分別加入高、中、低3個水平的反式脂肪酸混合標準, 樣品甲酯化處理后進行測定, 每個水平重復測定3次, 檢測結果取平均值。計算結果見表1, 回收率為 86.0%~92.5%。RSD為3.52%~4.63%。

2. 5 樣品的測定本實驗對50份動物油脂樣品采用校正面積歸一法進行了定量檢測, 檢測中反式脂肪酸含量為5.15%~7.67%, 均未超過丹麥等國對反式脂肪酸的限制量。

表1 回收率試驗結果

3 討論

本文建立的動物油脂中反式脂肪酸測定的氣相色譜法,具有操作簡便, 準確, 各種脂肪酸分離好等優點, 為油脂中反式脂肪酸的研究提供了一種切實可行的分析方法。

［1］ 陳翠華.反式脂肪酸危害人體健康.中國油脂,1995,20(5):62.

［2］ Kramer JK, Blackadar CB, Zhou J, et al. Evaluation of two GC columns (60-m SUPELCOWAX 10 and 100-m CP sil 88) for analysis of milkfat with emphasis on CLA, 18:1, 18:2and18:3isomers,and short-and long-Chain FA. Lipids, 2002,37(8):823-835.

［3］ 美國要求標注反式脂肪酸含量.食品與發酵工業, 2004,30(1): 117.

201103 上海市閔行區疾病預防控制中心