抗炎止血軟膏中沒食子酸含量的測定*

★ 陳浩 何小女 徐歡 張莉艷

(1.江西省中醫院 南昌330006；2.江西中醫藥大學 南昌330004)

肛腸疾病術后傷口疼痛、出血等并發癥是臨床上一大常見難題。筆者在《新疆中草藥單方驗方選編》基礎上研發出的復方止血消炎軟膏可用于保護術后肛腸患者創面及黏膜，減輕術后肛腸疾病疼痛及出血，減輕肛門墜脹及排便，作為肛腸外科手術后的局部用藥臨床效果良好。本文對處方中五倍子中的成分沒食子酸的含量進行了測定，為該藥的質量標準的制定提供了科學依據。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 電子天平BS 124S(北京賽多利斯儀器)，超聲波清洗器DL360B(上海之信儀器有限公司)，微型植物試樣粉碎機KN-500型(長沙康寧電子科技有限公司)，恒溫鼓風干燥箱DHG-9070A 型(海精宏實驗設備有限公司)。

1.2 試劑 對照品：沒食子酸(110831-201204中國藥品生物制品檢定所)，色譜甲醇：西隴化工股份有限公司(130106)，水為超純水，其余實驗所用化學試劑均為分析純試劑。

1.3 色譜條件 儀器：安捷倫1260，色譜柱：C-18安捷倫液相色譜柱4.6mm×150mm，流動相：甲醇∶ 0.1%磷酸(5∶95)，檢測波長：270nm，流速：1mL/分，柱溫：25℃。

2 含量的測定[1-5]

2.1 沒食子酸對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品17mg于100mL量瓶中，加適量50%甲醇使溶解定容至刻度，搖勻，超聲10分鐘，過微孔濾頭于小瓶，即得儲備液。

2.2 供試品溶液的制備 稱取抗炎止血軟膏10g于研缽中研勻，精密稱取0.4g于圓底燒瓶中，精密加入4mol/L鹽酸溶液50mL，稱定重量，水浴加熱3.5小時，放冷，補重，濾過。精密量取續濾液5mL，置50mL量瓶中，加50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10分鐘，過微孔濾頭，取續濾液，即得供試品溶液。精密吸取沒食子酸對照品適量，加50%的甲醇制成每1mL含102μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 線性關系的考察 精密取儲備液1、2、3、5、7mL，溶解于5個10mL量瓶中，取50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10分鐘，以儲備液及稀釋的5個濃度的沒食子酸溶液建立標準曲線，每次進樣量10μL，以對照品進樣量為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y繪制標準曲線，求得回歸方程：Y=197 35X-5.808 3r=0.999 1(n=6)。結果表明：沒食子酸在進樣量0.17-1.7μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好線性關系。

2.4 陰性干擾試驗 取陰性樣品適量，按2.2供試品方法制成陰性對照溶液。按照上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL注入色譜儀中，記錄色譜圖(見下圖1-3)。結果表明：在與沒食子酸對照品色譜相應的位置上無色譜峰出現，方中其他組分對測定結果無影響。

圖1 沒食子酸對照品

圖2 抗炎止血軟膏樣品

圖3 抗炎止血軟膏陰性樣品

2.5 精密度試驗 精密吸取2.2項的對照品溶液連續進樣6次，每次進樣10μL，測得精密度RSD% =1.87%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性考察 取同一批號樣品6份，按供試品溶液制備方法制備的樣品溶液，各進樣10μL記錄峰面積，結果RSD%為1.33%，說明本方法重復性良好。

2.7 穩定性實驗 精密吸取同一份供試品溶液10uL分別于0、1、3、5、7、10小時注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積積分值，結果其RSD為1.42%。實驗結果表明供試品溶液在10小時內測定穩定性良好。

2.8 回收率實驗 精密稱取已知含量的同批抗炎止血軟膏樣品各0.2g，分別在6份樣品中加入沒食子酸標準品14.96mg，按“供試品溶液的制備”法處理，按設定的方法測定，平均回收率為99.6%，RSD為1.66%，結果良好。

2.9 樣品測定 取本品3批樣品(20121115、20121219、20130103)，按2.2供試品方法制備溶液，按含量測定方法測定，用外標法計算供試品沒食子酸的含量，結果分別為71.85mg/g、71.68mg/g、71.10mg/g。

3 討論

取樣品在200-350 nm波長范圍內進行掃描，在270 nm處有最大吸收，故選擇270 nm為檢測波長。在供試品取樣中軟膏研細的均勻度決定著樣品含量測定的精確性，樣品在鹽酸水浴中提取性質穩定且高效液相測定中無陰性干擾。通過實驗研究，本文建立了抗炎止血軟膏中沒食子酸含量的HPLC測定法。該方法簡單并具有良好的準確性與重現性，有利于藥品質量控制的下一步完善。

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