歸膠顆粒毒理學安全性評價

★ 張小波 游劍 龔建平 曾燕斌

(1.江西美媛春藥業股份有限公司 永豐 331500;2.中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心 南昌 330006)

貧血是全球最為普遍的疾病。2008年世界衛生組織全球貧血數據庫公布的《1993年至2005年貧血患病率》顯示，全世界受貧血影響的人數達到16.2億，占世界人口的24.8%；貧血患病率在學齡前兒童最高(為47.4%)，成年男子的患病率最低(為12.7%)，成年女性中，孕婦患病率為41.8%，非孕婦為30.2%。而據2002年全國第四次營養調查，我國居民貧血患病率為20.1%，男性為15.8%，女性為23.3%。歸膠顆粒是針對貧血人群而組方的補血產品，配方主要由當歸、阿膠等組成。為了探討歸膠顆粒作為保健食品開發的可行性，筆者按照《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003年版)對其進行了毒理學安全性評價，作為該產品食用的安全性依據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 受試物 歸膠顆粒，自制，人體口服推薦劑量為200 mg/kg.bw。

1.1.2 動物 昆明種小鼠，由江西中醫學院實驗動物中心提供。許可證號：SCXK(贛)2005-0001。

1.1.3 試驗菌種 鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102標準菌株來源于湖南省疾病預防控制中心。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性毒性試驗 昆明種小鼠，雌、雄各10只，18-22 g。采用最大耐受量法，試驗前動物禁食16 小時。取受試物內容物(相對密度為1.0 g/mL)，按20.0 mL/kg﹒bw一次經口灌胃。灌胃后連續觀察7 天，記錄中毒表現及死亡情況。

1.2.2 鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗(Ames試驗) 采用鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株進行試驗。五個試驗劑量分別為5 000、1 000、200、40、8 μg/皿，同時設自發回變、溶劑對照(蒸餾水)和陽性突變劑對照。樣品配制時，取受試物1.25 g溶于25 mL蒸餾水中，取100 μL加入平皿即為最高受試物濃度(5 000 μg/皿)，其他濃度受試液用蒸餾水稀釋出。試驗采用多氯聯苯(PCB)誘導的大鼠肝微粒體酶(S-9)作為體外代謝活化系統。在頂層瓊脂中加入0.1 mL試驗菌株增菌液、0.1 mL受試液和0.5 mLS-9混合液(當需要代謝活化時)，混勻后倒入底層培養基平板上。37 ℃培養48 小時，計數每皿菌落數。

1.2.3 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗 昆明種小鼠，雌、雄各25只，25-30 g。按體重隨機分為5組，陰性對照組(蒸餾水)、歸膠顆粒10 000、5 000和2 500 mg/kg.bw組、陽性對照(環磷酰胺，40 mg/kg.bw)組，每組雌、雄各5只。稱取6.25 g、12.50 g、25.00 g受試物加蒸餾水至50 mL，另稱100 mg環磷酰胺加蒸餾水至50mL。灌胃體積按20 mL/kg.bw，采用30 小時2次灌胃法(間隔24小時)，第2次灌胃后6小時取胸片制片鏡檢。

1.2.4 小鼠精子畸形試驗 雄性昆明種小鼠25只，25-35 g。按體重隨機分成5組，陰性對照組(蒸餾水)、歸膠顆粒10 000、5 000和2 500 mg/kg.bw組、陽性對照(環磷酰胺，40 mg/kg.bw)組，每組5只。以20 mL/kg.bw灌胃，連續5 天，每天1次，于末次灌胃后第30 天取兩側副睪制片鏡檢。

1.2.5 統計學分析 畸形試驗和微核試驗采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 小鼠急性毒性試驗

以20.0 g/kg.bw劑量的歸膠顆粒灌胃兩種性別的小鼠未見明顯中毒癥狀，觀察期內動物各系統無異常發現，也無死亡。歸膠顆粒對雌、雄昆明種小鼠的急性經口毒性試驗最大耐受劑量(MTD)大于20.0 g/kg.bw(見表1)。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003年版)中的急性毒性分級標準，屬無毒級。

表1 歸膠顆粒對小鼠的急性經口毒性

2.2 Ames試驗

由表2、表3可見，在本試驗的各濃度下，無論是否加入S-9混合液，各皿回變菌落數均未超過自發回變菌落數的2倍，并且未見劑量-反應關系，而各陽性對照組均顯示強烈的誘變作用。根據Ames試驗結果判斷標準，本次試驗測試的歸膠顆粒無致突變作用。

表2 歸膠顆粒第1次Ames試驗結果±s)

表3 歸膠顆粒第2次Ames試驗結果±s)

2.3 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗

由表4可見，樣品各劑量組微核率與陰性對照組比較差異無顯著性(P>0.05)，而陽性對照組與陰性對照組比較差異有顯著性(P<0.01)。根據該試驗結果，本次試驗測試的歸膠顆粒在上述劑量下未見致突變作用。見表4。

表4 歸膠顆粒小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結果±s)

2.4 小鼠精子畸形試驗

由表5可見，樣品各劑量組小鼠精子畸形發生率未產生明顯改變，與陰性對照組比較差異無顯著性(P>0.05)，陽性對照組(環磷酰胺組)與陰性對照組比較差異有顯著性(P<0.01)。說明本次檢測的歸膠顆粒對小鼠精子無致突變作用。

表5 歸膠顆粒小鼠精子畸形試驗結果±s，n=5)

3 討論

當歸和阿膠均始載于《神農本草經》，是臨床常用的中藥材，具有較好的補血功效，其中阿膠是藥食兩用的物品，當歸也已入選我國衛生部2002年公布的“可用于保健食品的物品”名單?，F代研究表明，當歸的主要成分為精油(藁本內酯等)和水溶性成分(阿魏酸等)，此外還含有19種氨基酸、23種微量元素及多糖，其中當歸多糖可促進血紅蛋白和紅細胞的生成[1]。阿膠具有升高紅細胞和血紅蛋白的作用，可促進造血功能；能升高白細胞、血小板和升高血氧含量；有擴張微血管、擴大血容量、降低全血粘度和降低血管壁通透性的作用[2]。以當歸、阿膠等為主要原料，加工制成的歸膠顆粒，含有豐富的中藥補血活性成分，具有較高的應用價值。

本研究通過小鼠口服急性毒性試驗表明，歸膠顆粒最大耐受劑量(MTD)大于20 g/kg.bw，屬無毒級。三項遺傳毒性試驗(Ames試驗、小鼠骨髓微核試驗、小鼠精子畸形試驗)結果均為陰性，表明歸膠顆粒對體細胞無致誘變及突變作用。

[1]鄧永健，郭志偉，王萌.當歸的化學成份及其藥理作用研究進展[J].新疆中醫藥，2006，24(5) :109-113.

[2]楊福安，王京娥.阿膠的研究現狀與展望[J].中國中醫藥信息雜志，2004，11(5) :467-468.