小球藻快速增殖技術研究

張旭+鐘鴻干+孫楊+裴明海+王輝

摘 要：小球藻（ChLoreLLa pyrenoidosa）作為漁業生產常用藻，因其強大的光合作用和易于消化的特性，在魚、蝦、蟹、貝的養殖過程中起著很好的肥水和調水的作用。本研究通過實驗證明，在飛機草（Eupatorium odoratum）浸提液作用下，小球藻的增殖速度明顯高于未做添加組。可滿足小球藻大量、快速增殖的生產需求。

關鍵詞：小球藻；飛機草；快速增殖

小球藻為綠藻門小球藻屬單細胞綠藻，廣泛分布于自然界，以淡水水域種類多，生物量大。小球藻的光合作用是其他植物的10倍以上，在魚蝦蟹貝的養殖過程中起著很好的肥水和調水的作用。本研究發現，在飛機草浸提液的作用下，小球藻的增殖效果十分顯著，可滿足小球藻大量、快速增殖的生產需求。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗用MA培養基試劑均為分析純。Bicine 購于Sigma （St. Louis，MO，USA）。小球藻由海南大學水產養殖學科研究生聯合培養基地——中國水產科學研究院東海水產研究所海南瓊海研究中心提供，培養基選用MA培養基，pH 8.60±0.02，配方如表1。恒溫培養箱中培養，溫度（25±1） ℃，光照5 000 lx。飛機草粉末是由自然環境下隨處可見的野生飛機草 （莖和葉） 采摘后自然干燥，粉碎機粉碎后制得。

1.2 實驗方法

1.2.1 飛機草活性物質的浸提 準確稱取飛機草粉末 20.0 g，CaO 3.0 g于500 mL燒杯中混勻，加蒸餾水200 mL浸沒攪勻，用錫紙封口于室溫下浸提24 h后，經0.45 μm中速定性濾紙過濾，濾液即為飛機草浸提液，備用。

1.2.2 飛機草浸提液對小球藻的增殖影響 于12支10 mL培養管中加入5 mL MA培養基，121 ℃滅菌，冷卻后接入對數期藻液 1 mL，按梯度100 μL、200 μL、400 μL接入飛機草浸提液，對照組無添加。各條件組均做3聯處理，于恒溫培養箱中培養，每天搖勻一次。測定并記錄 1 mL對數期藻液的葉綠素 a 濃度。培養3 d后，再次測量各培養組的葉綠素 a 濃度。

1.3 數據的處理

1.3.1 顯微計數 取對數期小球藻0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL和4 mL，3 聯處理，稀釋相應倍數后各取100 μL 滴于浮游植物計數框后蓋好蓋玻片，進行顯微鏡檢。根據顯微鏡檢視野法進行細胞計數，計算公式如下：

1.3.2 統計分析 所得數據用Microsoft ExceL 2003和SPSS 17.0統計軟件進行分析。采用t檢驗進行差異顯著性檢驗，顯著差異水平為P<0.05。

2 結果與分析

通過3 d培養后發現，添加100 μL、200 μL和400 μL飛機草浸提液后的培養組，小球藻的細胞個數均明顯高于對照組，可見，飛機草含有促進小球藻增殖的活性物質，對小球藻的增殖具有促進作用。在實驗用劑量范圍內，添加200 μL飛機草浸提液的培養組在培養了3 d后細胞個數最多，如圖1。

3 結論

通過實驗研究發現，在MA培養基中添加飛機草浸提液培養小球藻，小球藻的增殖速度明顯快于未做添加的對照組。可見，飛機草浸提液中含有刺激小球藻快速增殖分裂的活性物質。

在實驗用飛機草浸提液劑量范圍下，小球藻的增殖效果均明顯高于對照組，其中200 μL劑量下的增殖效果明顯強于100 μL和400 μL組。可見，飛機草浸提液中刺激小球藻增殖分裂的活性物質與使用劑量之間并不是簡單的劑量越大刺激越強的關系。該活性物質的刺激作用與使用劑量、藻體濃度之間存在一定的函數關系。

實驗所用飛機草浸提液劑量范圍內，小球藻細胞個數與浸提液劑量的最強配比是58.5萬個/mL對應200 μL飛機草浸提液。

參考文獻：

[1] Ding WX， Shen HM， Ong CN. Microcystic cyanobact eria extract induces cytoskeL eton disruption and intraceLLuLar gLutathione aLterat ion in hepatocytes [J]. Environ HeaLth Persp.2000， 108： 605-609

摘 要：小球藻（ChLoreLLa pyrenoidosa）作為漁業生產常用藻，因其強大的光合作用和易于消化的特性，在魚、蝦、蟹、貝的養殖過程中起著很好的肥水和調水的作用。本研究通過實驗證明，在飛機草（Eupatorium odoratum）浸提液作用下，小球藻的增殖速度明顯高于未做添加組。可滿足小球藻大量、快速增殖的生產需求。

關鍵詞：小球藻；飛機草；快速增殖

小球藻為綠藻門小球藻屬單細胞綠藻，廣泛分布于自然界，以淡水水域種類多，生物量大。小球藻的光合作用是其他植物的10倍以上，在魚蝦蟹貝的養殖過程中起著很好的肥水和調水的作用。本研究發現，在飛機草浸提液的作用下，小球藻的增殖效果十分顯著，可滿足小球藻大量、快速增殖的生產需求。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗用MA培養基試劑均為分析純。Bicine 購于Sigma （St. Louis，MO，USA）。小球藻由海南大學水產養殖學科研究生聯合培養基地——中國水產科學研究院東海水產研究所海南瓊海研究中心提供，培養基選用MA培養基，pH 8.60±0.02，配方如表1。恒溫培養箱中培養，溫度（25±1） ℃，光照5 000 lx。飛機草粉末是由自然環境下隨處可見的野生飛機草 （莖和葉） 采摘后自然干燥，粉碎機粉碎后制得。

1.2 實驗方法

1.2.1 飛機草活性物質的浸提 準確稱取飛機草粉末 20.0 g，CaO 3.0 g于500 mL燒杯中混勻，加蒸餾水200 mL浸沒攪勻，用錫紙封口于室溫下浸提24 h后，經0.45 μm中速定性濾紙過濾，濾液即為飛機草浸提液，備用。

1.2.2 飛機草浸提液對小球藻的增殖影響 于12支10 mL培養管中加入5 mL MA培養基，121 ℃滅菌，冷卻后接入對數期藻液 1 mL，按梯度100 μL、200 μL、400 μL接入飛機草浸提液，對照組無添加。各條件組均做3聯處理，于恒溫培養箱中培養，每天搖勻一次。測定并記錄 1 mL對數期藻液的葉綠素 a 濃度。培養3 d后，再次測量各培養組的葉綠素 a 濃度。

1.3 數據的處理

1.3.1 顯微計數 取對數期小球藻0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL和4 mL，3 聯處理，稀釋相應倍數后各取100 μL 滴于浮游植物計數框后蓋好蓋玻片，進行顯微鏡檢。根據顯微鏡檢視野法進行細胞計數，計算公式如下：

1.3.2 統計分析 所得數據用Microsoft ExceL 2003和SPSS 17.0統計軟件進行分析。采用t檢驗進行差異顯著性檢驗，顯著差異水平為P<0.05。

2 結果與分析

通過3 d培養后發現，添加100 μL、200 μL和400 μL飛機草浸提液后的培養組，小球藻的細胞個數均明顯高于對照組，可見，飛機草含有促進小球藻增殖的活性物質，對小球藻的增殖具有促進作用。在實驗用劑量范圍內，添加200 μL飛機草浸提液的培養組在培養了3 d后細胞個數最多，如圖1。

3 結論

通過實驗研究發現，在MA培養基中添加飛機草浸提液培養小球藻，小球藻的增殖速度明顯快于未做添加的對照組。可見，飛機草浸提液中含有刺激小球藻快速增殖分裂的活性物質。

在實驗用飛機草浸提液劑量范圍下，小球藻的增殖效果均明顯高于對照組，其中200 μL劑量下的增殖效果明顯強于100 μL和400 μL組。可見，飛機草浸提液中刺激小球藻增殖分裂的活性物質與使用劑量之間并不是簡單的劑量越大刺激越強的關系。該活性物質的刺激作用與使用劑量、藻體濃度之間存在一定的函數關系。

實驗所用飛機草浸提液劑量范圍內，小球藻細胞個數與浸提液劑量的最強配比是58.5萬個/mL對應200 μL飛機草浸提液。

參考文獻：

[1] Ding WX， Shen HM， Ong CN. Microcystic cyanobact eria extract induces cytoskeL eton disruption and intraceLLuLar gLutathione aLterat ion in hepatocytes [J]. Environ HeaLth Persp.2000， 108： 605-609

摘 要：小球藻（ChLoreLLa pyrenoidosa）作為漁業生產常用藻，因其強大的光合作用和易于消化的特性，在魚、蝦、蟹、貝的養殖過程中起著很好的肥水和調水的作用。本研究通過實驗證明，在飛機草（Eupatorium odoratum）浸提液作用下，小球藻的增殖速度明顯高于未做添加組。可滿足小球藻大量、快速增殖的生產需求。

關鍵詞：小球藻；飛機草；快速增殖

小球藻為綠藻門小球藻屬單細胞綠藻，廣泛分布于自然界，以淡水水域種類多，生物量大。小球藻的光合作用是其他植物的10倍以上，在魚蝦蟹貝的養殖過程中起著很好的肥水和調水的作用。本研究發現，在飛機草浸提液的作用下，小球藻的增殖效果十分顯著，可滿足小球藻大量、快速增殖的生產需求。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗用MA培養基試劑均為分析純。Bicine 購于Sigma （St. Louis，MO，USA）。小球藻由海南大學水產養殖學科研究生聯合培養基地——中國水產科學研究院東海水產研究所海南瓊海研究中心提供，培養基選用MA培養基，pH 8.60±0.02，配方如表1。恒溫培養箱中培養，溫度（25±1） ℃，光照5 000 lx。飛機草粉末是由自然環境下隨處可見的野生飛機草 （莖和葉） 采摘后自然干燥，粉碎機粉碎后制得。

1.2 實驗方法

1.2.1 飛機草活性物質的浸提 準確稱取飛機草粉末 20.0 g，CaO 3.0 g于500 mL燒杯中混勻，加蒸餾水200 mL浸沒攪勻，用錫紙封口于室溫下浸提24 h后，經0.45 μm中速定性濾紙過濾，濾液即為飛機草浸提液，備用。

1.2.2 飛機草浸提液對小球藻的增殖影響 于12支10 mL培養管中加入5 mL MA培養基，121 ℃滅菌，冷卻后接入對數期藻液 1 mL，按梯度100 μL、200 μL、400 μL接入飛機草浸提液，對照組無添加。各條件組均做3聯處理，于恒溫培養箱中培養，每天搖勻一次。測定并記錄 1 mL對數期藻液的葉綠素 a 濃度。培養3 d后，再次測量各培養組的葉綠素 a 濃度。

1.3 數據的處理

1.3.1 顯微計數 取對數期小球藻0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL和4 mL，3 聯處理，稀釋相應倍數后各取100 μL 滴于浮游植物計數框后蓋好蓋玻片，進行顯微鏡檢。根據顯微鏡檢視野法進行細胞計數，計算公式如下：

1.3.2 統計分析 所得數據用Microsoft ExceL 2003和SPSS 17.0統計軟件進行分析。采用t檢驗進行差異顯著性檢驗，顯著差異水平為P<0.05。

2 結果與分析

通過3 d培養后發現，添加100 μL、200 μL和400 μL飛機草浸提液后的培養組，小球藻的細胞個數均明顯高于對照組，可見，飛機草含有促進小球藻增殖的活性物質，對小球藻的增殖具有促進作用。在實驗用劑量范圍內，添加200 μL飛機草浸提液的培養組在培養了3 d后細胞個數最多，如圖1。

3 結論

通過實驗研究發現，在MA培養基中添加飛機草浸提液培養小球藻，小球藻的增殖速度明顯快于未做添加的對照組。可見，飛機草浸提液中含有刺激小球藻快速增殖分裂的活性物質。

在實驗用飛機草浸提液劑量范圍下，小球藻的增殖效果均明顯高于對照組，其中200 μL劑量下的增殖效果明顯強于100 μL和400 μL組。可見，飛機草浸提液中刺激小球藻增殖分裂的活性物質與使用劑量之間并不是簡單的劑量越大刺激越強的關系。該活性物質的刺激作用與使用劑量、藻體濃度之間存在一定的函數關系。

實驗所用飛機草浸提液劑量范圍內，小球藻細胞個數與浸提液劑量的最強配比是58.5萬個/mL對應200 μL飛機草浸提液。

參考文獻：

[1] Ding WX， Shen HM， Ong CN. Microcystic cyanobact eria extract induces cytoskeL eton disruption and intraceLLuLar gLutathione aLterat ion in hepatocytes [J]. Environ HeaLth Persp.2000， 108： 605-609