水蛭活血散腫口服液對大鼠腦缺血再灌注損傷的改善作用

侯學(xué)寨 張志民 宋志偉 郭麗菊 劉武剛 宋志勇

(河北省玉田縣中醫(yī)醫(yī)院神經(jīng)外科，河北 玉田 064199)

水蛭活血散腫口服液對大鼠腦缺血再灌注損傷的改善作用

侯學(xué)寨 張志民 宋志偉 郭麗菊1劉武剛 宋志勇△

(河北省玉田縣中醫(yī)醫(yī)院神經(jīng)外科，河北 玉田 064199)

目的觀察不同劑量水蛭活血散腫口服液對大鼠腦缺血再灌注損傷的改善作用。方法將SD大鼠隨機分為6組，分別為假手術(shù)組(手術(shù)不結(jié)扎血管，不注射硝普鈉)、模型對照組、水蛭活血散腫口服液低劑量組(2g生藥/kg)、水蛭活血散腫口服液中劑量組(4g生藥/kg)水蛭活血散腫口服液高劑量組(8 g生藥/kg)及通心絡(luò)膠囊組(1 g/kg)。各給藥組均灌胃給藥，容量為1 mL/100g體質(zhì)量。假手術(shù)組及模型對照組灌胃等容積蒸餾水，連續(xù)7 d。在末次灌胃后2h，在10%水合氯醛麻醉下(350mg/kg，腹腔注射)，分離并用無損傷動脈夾夾閉大鼠兩側(cè)頸動脈，同時迅速腹腔注射硝普鈉(2.5mg/kg，腹腔注射)，缺血45min后，將頸總動脈松開，再灌注30min。實驗結(jié)束腹主動脈取血2mL，3000r/min，4℃離心10min，取血清按說明書方法測定其中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。結(jié)果水蛭活血散腫口服液(2g、4g、8 g生藥/kg)可升高腦缺血再灌注損傷大鼠血清中NO、SOD含量，降低MDA含量，糾正氧自由基代謝紊亂。結(jié)論水蛭活血散腫口服液對大鼠腦缺血再灌注損傷具明顯的改善作用。

腦缺血；再灌注損傷；活血；水蛭；口服液

水蛭活血散腫口服液為河北省玉田縣中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，具活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)之功效。用于腦脈痹阻所致中經(jīng)絡(luò)所引起的半身不遂、肢體麻木等癥。我們通過實驗研究觀察不同劑量水蛭活血散腫口服液對大鼠腦缺血再灌注損傷的改善作用，為臨床應(yīng)用提供必要的藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 SD大鼠(二級)，體質(zhì)量180～200g，雄性，河北省實驗動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。

1.1.2 實驗藥物 水蛭活血散腫口服液(藥物組成：水蛭10g，三七5g，全蝎10g，大黃10g，丹參30g，天竺黃10g，土鱉蟲10g，益母草30g。制法：取處方中各藥水煎、醇沉、回流、濃縮、過濾、灌裝即得1 g生藥/mL冀藥制字Z20110091，批號 20110107)，玉田縣中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備；通心絡(luò)膠囊(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z19980015，批號111117，0.38 g/粒)；硝普鈉(北京制藥工業(yè)研究所實驗藥廠，用無菌蒸餾水溶解)。

1.1.3 實驗試劑 超氧化物歧化酶(SOD)測試盒，丙二醛(MDA)測試盒、一氧化氮(NO)測試盒，均為南京建成生物工程公司產(chǎn)品。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 將SD大鼠隨機分為6組，每組8只，分別為假手術(shù)組(手術(shù)不結(jié)扎血管，不注射硝普鈉)、模型對照組、水蛭活血散腫口服液低劑量組(2g生藥/kg)、水蛭活血散腫口服液中劑量組(4g生藥/kg)、水蛭活血散腫口服液高劑量組(8 g生藥/kg)及通心絡(luò)膠囊組(1 g/kg)。

1.2.2 給藥方法 各給藥組均灌胃給藥，容量為1 mL/100g體質(zhì)量。假手術(shù)組及模型對照組灌胃等容積蒸餾水，連續(xù)7 d。在末次灌胃后2h，在10%水合氯醛麻醉下(350mg/kg，腹腔注射)，分離并用無損傷動脈夾夾閉大鼠兩側(cè)頸動脈，同時迅速腹腔注射硝普鈉(2.5mg/kg，腹腔注射)，缺血45min后，將頸總動脈松開，再灌注30min。實驗結(jié)束腹主動脈取血2mL，3000r/min，4℃離心10min，取血清按說明書方法測定其中SOD、MDA、NO含量[1]。

2 結(jié) 果

2.1 各組對腦缺血再灌注大鼠血清SOD、MDA的影響 見表1。

組 別n劑量(g生藥/kg)SOD(U/L)MDA(mmol/L)假手術(shù)組8-345．67±40．11?9．11±2．96?模型對照組8-217．47±50．7112．22±2．80水蛭活血散腫口服液低劑量組82327．52±59．81?10．06±1．78水蛭活血散腫口服液中劑量組84342．45±60．58?8．95±1．98?水蛭活血散腫口服液高劑量組88333．96±49．73?10．52±1．94通心絡(luò)膠囊組81(g)319．03±52．29?8．43±1．44?

與模型對照組比較，*P<0.05

由表1可見，腦缺血再灌注后與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠血清SOD含量明顯降低(P<0.05)，MDA含量顯著增高(P<0.05)。水蛭活血散腫口服液低、中、高劑量組及通心絡(luò)膠囊組大鼠SOD含量明顯較模型對照組大鼠升高(P<0.05)，MDA含量明顯較模型對照組大鼠降低(P<0.05)。水蛭活血散腫口服液低、中、高劑量組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與通心絡(luò)膠囊組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。表明水蛭活血散腫口服液可升高腦缺血再灌注損傷大鼠血清中SOD含量，降低MDA含量，糾正氧自由基代謝紊亂。

2.2 各組對腦缺血再灌注大鼠血漿NO含量的影響 見表2。

組 別n劑量(g生藥/kg)假手術(shù)組8-210．83±52．64?模型對照組8-109．17±28．26水蛭活血散腫口服液低劑量組82165．97±53．14?水蛭活血散腫口服液中劑量組84183．89±41．04?水蛭活血散腫口服液高劑量組88172．78±52．60?通心絡(luò)膠囊組81(g)179．44±45．09?

與模型對照組比較，*P<0.05

由表2可見，缺血再灌注后，模型對照組大鼠血漿中NO含量明顯較假手術(shù)組大鼠降低(P<0.05)。水蛭活血散腫口服液低、中、高劑量組大鼠血漿NO含量明顯較模型對照組大鼠升高(P<0.05)。

3 討 論

大量研究表明，自由基代謝失衡在腦出血所致的腦損傷過程中扮演著重要角色；腦出血后繼發(fā)的腦組織缺血、腦水腫以及出血后血紅蛋白降解產(chǎn)物均可導(dǎo)致腦內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基，而腦出血后清除這些自由基的酶(如SOD)活性卻降低，而大量產(chǎn)生的自由基攻擊顱內(nèi)生物膜內(nèi)的不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生過氧化代謝產(chǎn)物MDA，造成生物膜受損，進(jìn)而導(dǎo)致血腦屏障通透性增加、功能障礙[2]，血漿中NO能使血管保持正常彈性減輕腦出血所致?lián)p傷。水蛭活血散腫口服液是根據(jù)中醫(yī)辨證論治理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論以及中藥的藥理研究成果而研制的制劑，方中水蛭、土鱉蟲破血逐瘀，大黃活血祛瘀、瀉火涼血，共為主藥；三七涼血止血，丹參養(yǎng)血活血，益母草活血，共為輔助；全蝎熄風(fēng)止痙，散結(jié)通絡(luò)，天竺黃化痰通絡(luò)，共為佐藥。諸藥合用，共奏活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)之功。現(xiàn)代藥理研究證明，水蛭主含抗凝血成分肝素、抗凝血酶等，具抗凝、降低血液黏度、抑制血小板聚集、改善血流量等作用[3]；三七主含三七總皂苷能抑制血小板凝集、降低血液黏度[3]；丹參主含丹參素有抑制血小板聚集、抗血栓形成作用[3]；全蝎具抗血栓抗腫瘤作用[3]。實驗結(jié)果表明，水蛭活血散腫口服液可明顯升高腦缺血再灌注損傷大鼠血漿中SOD含量，降低脂質(zhì)過氧化物的代謝產(chǎn)物MDA含量，從而糾正氧自由基代謝紊亂，可提高腦缺血再灌注大鼠血中NO含量，減輕腦缺血再灌注所致?lián)p傷。研究結(jié)果為臨床用藥提供了必要的藥理學(xué)依據(jù)。

[1] 宋書輝，于冰，徐旭，等.當(dāng)歸總苯酞對大鼠腦缺血再灌注損傷的改善作用[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27(1)：38-42.

[2] 蔣冠南，申錦林，覃麗，等.冰黃液對大鼠急性腦出血作用的研究[J].中藥藥理與臨床，2005，21(6)：74-75.

[3] 蔡少青.生藥學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：371，241-243.

(本文編輯：李珊珊)

ImprovingeffectofLeechesHuoxueSanzhongoralliquidoncerebralischemia-reperfusioninjuryinrats

HOUXuezhai，ZHANGZhimin，SONGZhiwei，etal.

DepartmentofNeurosurgery，HebeiProvinceYutianCountyHospitalofTraditionalChineseMedicine，Hebei，Yutian064199

ObjectiveTo study the effect of different dose of Leeches Huoxue Sanzhong oral liquid on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats.MethodsSD rats were randomly divided into six groups，sham operation group(operation without vascular ligation and injection of sodium nitroprusside)，cerebral ischemia-reperfusion model control group，Leeches Huoxue Sanzhong oral liquid low dose group(2g crude drug/kg)，Leeches Huoxue Sanzhong oral liquid middle dose group(4g crude drug/kg)，Leeches Huoxue Sanzhong oral liquid high dose group(8 g crude drug/kg) and Tongxinluo capsule group(1 g/kg).Each treatment group was administered orally with a capacity of 1 mL/100g body mass.Sham group and model control group was given the same volume of distilled water for 7 d.After the last administration at 2h，cerebral ischemia-reperfusion injury model was established.End of the experiment abdominal aortic blood was collected for determination of SOD，MDA and NO.ResultsLeeches Huoxue Sanzhong oral liquid(2g，4g and 8 g crude drug/kg) can increase contents of NO and SOD in serum of rat with cerebral ischemia-reperfusion injury，decrease MDA level，and correct oxygen free radicals metabolic disorders.ConclusionLeeches Huoxue Sanzhong oral liquid has obvious improving effect on ischemia reperfusion injury in rat brain.

Cerebral ischemia；Reperfusion injury；Activating blood；Leeches；Oral liquid

侯學(xué)寨(1966—)，男，副主任醫(yī)師。從事神經(jīng)外科臨床工作。

R-332；R282.740.5；R619.9；R743.31

A

1002-2619(2014)07-1076-03

2013-05-06)

△ 通訊作者：河北省玉田縣中醫(yī)醫(yī)院制劑科，河北 玉田 064199

1 河北省秦皇島市骨科醫(yī)院急診科，河北 秦皇島 066000