絞股藍總苷對局灶性腦缺血大鼠腦組織含水量、腦梗死面積及腦組織形態學的影響

耿瑋崢，王 翰,姜 微，張大威，李天舒，呂文偉*

(1.延邊大學2011級臨床醫學系 2班，吉林 延吉133000；2.解放軍第三軍醫大學學員旅八隊 臨床醫學專業，重慶 400038；3.吉林大學中日聯誼醫院 超聲科，吉林 長春130033;4.吉林大學基礎醫學院 機能實驗中心，吉林 長春130021)

絞股藍為葫蘆科絞股藍屬多年生草質藤本植物，性寒、味甘、微苦[1]，歸肺、脾、心、腎經，有補氣養陰、清肺化痰、養心安神之功效。目前已分離鑒定出80余種皂苷,其中皂苷Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ、Ⅶ的化學結構與人參皂苷Rb1、Rb3、Rd、F2結構相同。現代藥理學研究表明，絞股藍皂苷對大鼠全腦缺血再灌注損傷及家兔急性不完全性腦缺血具有保護作用[2-3],對心肌缺血再灌注損傷有保護作用[4-5]。本實驗通過建立腦缺血模型，研究絞股藍總苷對局灶性腦缺血大鼠的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 絞股藍皂苷(含量>90%，吉林大學白求恩制藥廠提供)，步長腦心通膠囊由陜西咸陽步長制藥有限公司提供。批號：130924。氯化三苯基四氮唑由上海化學試劑公司提供。批號：20130910。

1.1.2 動物 健康雄性Wistar大鼠，體重250-300 g，由吉林大學基礎醫學院動物實驗中心提供，動物合格證號為SCXK-(吉)2013-0001。

1.1.3 儀器 CX21OL光學顯微鏡，日本奧林帕斯株式會社；LEICA QWIN圖象分析儀，泰盟科教儀器廠；CS501恒溫浴槽，南通科學儀器廠生產；LDZ5-2型離心機，北京醫用離心機廠生產；DT-500型電子天平，常熟雙杰測試儀器廠生產。

1.2 方法

1.2.1 大鼠局灶性腦缺血模型(MCAO)的制備 取32只雄性大鼠，隨即分為4組，即模型組、陽性藥組(步長腦心通2.0 g·kg-1)及絞股藍總苷低、高劑量組(3.0和12.0 g·kg-1)。每天灌胃給藥一次，連續給藥七天，末次給藥1 h后，模型組、陽性藥組及絞股藍總苷各劑量組大鼠稱重后腹腔注射水合氯醛(0.3 g·kg-1)麻醉，仰臥位固定于鼠板上。剪開頸部正中皮膚，鈍性分離并暴露左側頸總及頸內、外動脈，并在頸內外動脈分叉處結扎頸外動脈，左側頸總動脈分叉處剪口，插入頭端燒成圓鈍形直徑為0.25 mm的尼龍線，進線長度約18-20 mm，在大腦中動脈起始端堵塞大腦中動脈，然后將頸總動脈連同尼龍線一起結扎，逐層縫合后放回籠內。術后37℃保溫，待動物清醒后通過Zea Longa神經功能學評分判定模型是否制備成功。

1.2.2 大鼠神經功能學評分的測定 按文獻所述，待大鼠清醒后進行神經功能學評分：0分，無神經功能缺失癥狀,活動正常；1分，輕微神經功能缺損，對側前爪內收、不能伸直；2分，，中度局灶性神經功能缺損，前肢屈曲對側抵抗推力下降，向對側轉圈；3分，重度局灶性神經功能缺損，行走時身體偏癱側傾倒；4分，意識喪失，完全不能自發行走。

1.2.3 腦組織含水量測定 取32只雄性大鼠，分組、給藥及造模同前。大鼠麻醉后斷頭取腦,去除小腦、腦干及嗅球，電子分析天平稱取腦濕重，置于110℃烤箱中烘烤至恒重時稱取腦干重，按公式：腦組織含水量=(濕重-干重)/濕重，計算出腦組織的含水量。

1.2.4 腦梗死面積的測定 如前所述，大鼠麻醉后斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，從額板開始間隔2 mm冠狀切片，將切片置于1%氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液中(37℃)避光孵育30 min，然后置于10%甲醛中固定，正常組織染成紅色，梗死區呈現白色。用BL-2000圖象分析儀測定腦梗死面積。

1.2.5 大鼠腦組織病理形態學觀察 腦組織經10%福爾馬林固定48 h后，脫水、固定、石臘包埋、常規切片、HE染色，光鏡下觀察組織形態。

2 結果

2.1絞股藍總苷對局灶性腦缺血大鼠神經行為學評分的影響模型組、步長腦心通組、絞股藍總苷3.0 g·kg-1組和12.0 g·kg-1組的大鼠神經功能學指標變化(P<0.05、P<0.01)，見表1。

表1 絞股藍總苷對局灶性腦缺血大鼠神經功能學評分的影響

注：與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01

2.2絞股藍總苷對局灶性腦缺血大鼠腦組織含水量、腦梗死面積的影響步長腦心通組，絞股藍總苷3.0 g·kg-1組大鼠腦組織的含水量明顯低于腦缺血模型組(P<0.05)，絞股藍總苷12.0 g·kg-1組的作用更加明顯(P<0.001)，絞股藍總苷 3.0 g·kg-1及12.0 g·kg-1組大鼠的腦梗死面積明顯低于腦缺血模型組(P<0.05,P<0.01)，結果見表2。

2.3絞股藍總苷局灶性腦缺血大鼠病理形態學的影響1) 模型對照組：鏡下神經元呈嗜伊紅深染的多角形或小圓形，可見嗜神經現象。缺血區的腦組織結構變得疏松，有篩狀軟化灶形成。腦組織嚴重水腫，部分神經元變性壞死，表現為細胞胞體固縮，胞核固縮甚至消失，胞漿濃染著色較深。2) 陽性藥步長腦心通組：鏡下可見嗜神經現象。依然可見腦組織結構疏松，篩狀軟化灶形成。部分神經元呈變性壞死，表現為胞漿呈嗜伊紅，胞體為三角形，膠質細胞增生。3) 絞股藍總苷低劑量組：鏡下可見嗜神經現象。腦組織結構疏松，可見篩狀軟化灶。腦組織水腫，神經元變性壞死，壞死區內組織結構疏松。4) 絞股藍總苷高劑量組：鏡下可見少數神經元呈變性壞死改變，其胞體為三角形，胞漿呈嗜伊紅增強，這些神經元散在分布，無腦組織結構疏松及篩狀軟化灶形成。腦組織水腫，大多數神經元與膠質細胞分布結構均無明顯異常。見圖1。

表2絞股藍總苷對局灶性腦缺血大鼠腦含水量的影響

注：與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01 ，***P<0.001

圖1 絞股藍總苷對局灶性腦缺血大鼠病理形態學的影響(HE,×100)

3 討論

腦缺血損傷主要指由于腦動脈管腔狹窄或堵塞，導致腦組織缺血、缺氧,甚至水腫、壞死,進而引起受損區域神經功能缺損,出現受損神經組織所支配側軀體肌張力減弱、癱瘓甚至死亡等行為障礙癥狀。在一定程度上反映腦組織損傷的程度。因此,神經行為障礙癥狀常用作反映神經功能狀況的重要指標。本實驗結果表明，絞股藍總苷可降低缺血大鼠的神經學評分、腦梗死面積和腦組織含水量，說明絞股藍總苷可減輕缺血所造成的腦組織損傷和腦組織水腫，改善腦功能，對腦組織起保護作用。自由基介導的自由基連鎖反應是腦缺血后繼發性損傷的重要環節之一[6]。缺血性腦血管病多為腦血管痙攣或栓塞引起腦組織缺血缺氧而致能量耗竭、興奮性氨基酸釋放、細胞內鈣超載、自由基的產生等因素，線粒體破壞，功能喪失，溶酶體膜裂解，大量溶媒溢入細胞漿，促使腦細胞發生自溶。導致腦組織水腫、神經細胞變性壞死，腦細胞的各種生物酶活性喪失或轉化為對腦細胞有損害的酶，本實驗模型組鏡下可見缺血區腦組織神經元呈變性壞死缺血性改變，表明腦缺血模型是成功的。步長腦心通組和絞股藍總苷低劑量組的神經元變性壞死改變略有減輕。絞股藍總苷高劑量組神經元變性壞死輕微，未見篩狀軟化灶，治療效果明顯。

綜上所述，絞股藍總苷對腦缺血具有保護作用，其機制可能是通過抗氧化損傷來實現的。

參考文獻：

[1]張 永，丁國華，張建鄂，等． 絞股藍總皂甙對單側輸尿管結扎大鼠腎組織結締組織生長因子表達的影響[J]．實用醫學雜志，2005，21(16):1745．

[2]田 鶴,張成英,陳前芬.絞股藍總皂苷對大鼠全腦缺血再灌注損傷的保護作用[J].蚌埠醫學院學報,1993,18(2):117.

[3]王竹筠,邱培倫.絞股藍總皂苷對家兔急性不完全性腦缺血的保護作用[J].中國藥理學與毒理學雜志,1992,6 (3):204.

[4]周建正,肖 彬.絞股藍總皂苷和人參總皂苷對大鼠急性心肌缺血心臟舒張功能保護作用的比較[J].中國藥學雜志,1996,31(4):207.

[5]鄭奇斌,陳金和,吳基良.絞股藍總皂苷對大鼠急性心肌缺血再灌注損傷的影響[J].咸寧醫學院學報,2002,16(2):89.

[6]Lewen A.Matz P,Chan PH.Free radical pathways in CNS injury[J].Neurotrauma，2000,17(10)：871.