胃腺癌突變型P53蛋白和PCNA的表達及對比研究

廖謙和,徐 丹,紀竹青,范麗麗

(沭陽人民醫院 病理科，江蘇 沭陽223600)

胃癌的發生是多因素、多途徑和多階段的，與抑癌基因的失活、癌基因的激活以及細胞增殖與凋亡失衡等有關，而細胞增殖活性及某些癌基因突變與胃癌的關系尤為密切。本研究應用免疫組化法檢測胃腺癌組織中突變型P53蛋白和增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表達情況，以探討其在胃癌發生發展中的作用。

1 材料與方法

1.1材料收集我院2008年1月至2012年12月經外科手術切除的胃腺癌標本42例，所有患者術前均未接受過化療或放療，術后手術標本經病理確診。患者中男31例，女11例，年齡39-81歲，平均65.6歲。TNM分期：胃癌Ⅰ期6例，Ⅱ期14例，Ⅲ期18例，Ⅳ期4例。胃腺癌病理組織學分級：高分化腺癌6例，中分化腺癌22例，低分化腺癌14例。伴有淋巴結轉移29例，無淋巴結轉移13例。

1.2方法每例胃癌標本取組織2-3塊，包括胃癌病變組織的胃壁黏膜、肌層及漿膜。標本經10%中性福爾馬林固定，常規石蠟切片，HE染色。免疫組織化學采用EnVision法，標記以正常胃黏膜組織10例作對照。所用試劑購自基因科技(上海)有限公司，抗體為突變型P53蛋白(DO-7)、PCNA(PC10)，一抗稀釋濃度為1∶50。

1.3結果判定陽性細胞標記為棕黃色顆粒，突變型P53蛋白、PCNA陽性細胞定位在細胞核。每張切片隨機選擇10個高倍視野，根據切片中陽性細胞所占同類細胞總數百分比和陽性標記細胞著色強度的差異，分別記為-、+、++、+++四個等級，即不著色為陰性(-)，0-25%為(+)，25%-50%為(++)，>50%為(+++)。

1.4統計學處理用SPSS13.0統計軟件處理，采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 突變型P53蛋白陽性表達 突變型P53蛋白在胃腺癌組織中的陽性細胞表達在胃腺癌的細胞核，呈棕黃色顆粒狀(圖1)，P53陽性細胞表達率為81.0%，P53表達與胃腺癌分化程度，淋巴結轉移有顯著性意義(P<0.05)，而與患者年齡、性別、胃腺癌浸潤深度之間無顯著性意義(P>0.05)，見表1。

2.2 PCNA陽性表達 PCNA在胃腺癌組織中的陽性細胞表達在胃腺癌的細胞核，呈棕黃色顆粒狀(圖2)，PCNA陽性細胞表達率為85.7%。PCNA表達與胃腺癌分化程度，淋巴結轉移有顯著性意義(P<0.05)，而與患者年齡、性別、胃腺癌浸潤深度之間無顯著性意義(P>0.05)，見表1。

2.3 突變型P53蛋白、PCNA與胃腺癌分化程度的關系 42例胃腺癌陽性率隨病理分級增加陽性率有上升趨勢， 突變型P53蛋白在高、中、低分化組的胃腺癌中陽性率分別為50.0%(3/6)、81.8%(18/22)和92.9%(13/14)，低分化組顯著高于高分化組(P<0．05)。PCNA在高、中、低分化組的胃腺癌中陽性率分別為50.0%(3/6)、86.4%(19/22)和100.0%(14/14),低分化組顯著高于高分化組(P<0．05)。中、低分化腺癌中P53和PCNA陽性表達強度多在“++”以上。正常胃黏膜組織中突變型P53蛋白不表達，正常胃黏膜中PCNA不表達或僅見于基底層的單個細胞表達。突變型P53蛋白、PCNA在胃腺癌組與正常胃黏膜兩組間的差異具有顯著性(P<0.05)。

圖1突變型P53蛋白在胃腺癌細胞核中的陽性表達(LSAB×400)圖2PCNA在胃腺癌細胞核中的陽性表達(LSAB×400)

表1 突變型P53蛋白、PCNA在胃腺癌組織中的陽性表達(n=42)

2.4突變型P53蛋白、PCNA與胃腺癌淋巴結轉移的關系有淋巴結轉移組29例中，突變型P53蛋白檢測陽性率為93.1%,陽性強度多在++以上，PCNA檢測陽性率為96,6%，陽性強度亦在++～+++以上。突變型P53蛋白、PCNA在有淋巴結轉移組與無淋巴結轉移兩組間的差異具有顯著性(P<0.05)。

2.5突變型P53蛋白和PCNA在胃腺癌組織中表達的相關性突變型P53蛋白和PCNA在胃腺癌組織中均有較高的表達，42例胃腺癌中突變型P53蛋白表達陽性占33例(78.6%)，PCNA表達陽性占37例(88.1%)，兩指標的陽性表達多在“++”以上，經等級相關性分析突變型P53蛋白和PCNA呈顯著正相關(P<0.01)。

3 討論

人類P53基因定位于17p13.1，是一個非常重要的抑癌基因，全長16-20 kb，基因組有11個外顯子，10個內含子。P53分野生型和突變型，野生型P53因半衰期短，含量低，用免疫組化方法檢測不到，而突變型P53蛋白降解緩慢，積聚在核內易于被檢測。野生型P53具有抑制癌細胞的增殖和促進癌細胞凋亡的作用，而突變型P53蛋白通常不再能控制細胞增殖，這就導致無效的DNA修復和遺傳不穩定。大多數突變型P53通過阻止野生型P53結合到靶基因啟動子而施加明顯的負面效應，因此突變型P53參與腫瘤的惡性轉化[1]。本組研究結果顯示，胃腺癌組織中突變型p53蛋白的表達與胃癌的分化程度、淋巴結轉移有關，各組間差異顯著(P<0.05),與文獻研究結果相符[2]。突變型P53蛋白過度表達與侵襲性增加和預后不良相關，與腫瘤細胞的高度增生及分化程度有關，分化越低的腫瘤，突變型P53蛋白的表達水平越高，具有重要的預后價值[3]。本組研究結果提示突變型p53蛋白在胃癌發生發展中有重要作用，突變型P53蛋白在胃腺癌組織中的過度表達反映了其對癌細胞的抑制作用喪失或減弱，并失去對癌細胞增殖的負調節作用，使癌細胞不斷增殖而促進癌細胞轉移。

PCNA又稱周期抗原，是一種與細胞周期相關的酸性核蛋白，分子量為36 000，其表達在細胞增殖周期Gl后期開始升高，Gi/S期時達高峰，S期持續高水平，能與DNA多聚酶輔助蛋白結合，參與細胞DNA的復制，是反映細胞增殖活性的一個良好指標[4]。其在細胞增殖中發揮重要作用，因此PCNA的表達可反映局部細胞的增生狀態[5]。PCNA在癌細胞中高表達反映腫瘤細胞過度增殖，可促進腫瘤的發生。有研究報道PCNA可在多種腫瘤組織中高表達[6]。本組研究結果顯示，胃腺癌組織中PCNA的表達與胃癌的分化程度、淋巴結轉移有關，各組間差異顯著(P<0.05),說明癌組織中細胞增殖活性明顯增高，細胞增殖旺盛，分化差易轉移，預后較差。與文獻研究結果相符[7,8]。

本組資料中突變型P53蛋白、PCNA在胃腺癌組織中均有較高表達，提示這兩個指標與胃癌發生發展存在密切相關性，其陽性表達在評估胃癌惡性程度、估計患者預后和指導臨床治療等方面有著重要的參考價值。

參考文獻：

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