AEG-1在不同級(jí)別星形細(xì)胞瘤的表達(dá)及臨床意義

劉光普 胡威 溫嘉霖 李勁松 張敬泉 汪華僑

星形細(xì)胞瘤是從星形細(xì)胞轉(zhuǎn)變而來(lái)的具有特定形態(tài)學(xué)改變和生物學(xué)行為的腫瘤，主要發(fā)生在大腦半球、小腦、腦干和脊髓。星形細(xì)胞瘤是膠質(zhì)瘤發(fā)病率最高的一類(lèi)，占膠質(zhì)瘤40%以上，約占顱內(nèi)腫瘤17%。根據(jù)其分化程度的不同分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)，目前認(rèn)為，星形細(xì)胞瘤的病理分級(jí)、Ki-67陽(yáng)性率、發(fā)病年齡、術(shù)前等待時(shí)間是與其預(yù)后密切相關(guān)的因素，而腫瘤組織微囊變和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)則為其保護(hù)因素[1]。星形細(xì)胞上調(diào)基因-1(AEG-1)是新近發(fā)現(xiàn)的，與多種腫瘤(如乳腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、惡性黑色素瘤)的侵襲、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)的癌基因。本研究在評(píng)價(jià)傳統(tǒng)臨床預(yù)后因素的基礎(chǔ)上，探討AEG-1在不同級(jí)別星形細(xì)胞瘤的表達(dá)規(guī)律及其與腫瘤惡性程度和預(yù)后的關(guān)系。

材料與方法

一、研究對(duì)象

在2000年1月至2012年6月梅州市人民醫(yī)院神經(jīng)外科收治的星形細(xì)胞瘤患者中，以隨機(jī)數(shù)字表法分別抽取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)患者各20例，共計(jì)80例。病例入選標(biāo)準(zhǔn)：①符合WHO(2000年)神經(jīng)上皮源性腫瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)；②入院時(shí)間為2000年1月至2012年6月；③患者術(shù)前均未曾進(jìn)行放射治療或化學(xué)治療，且均為初次手術(shù)；④未合并其他基礎(chǔ)疾病。患者年齡18～64歲，中位年齡40歲。

二、腫瘤分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

按照WHO(2000年)神經(jīng)上皮源性腫瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，星形細(xì)胞瘤根據(jù)細(xì)胞分化程度由高到低分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)，惡性程度依次增加。

三、 方 法

1.AEG-1表達(dá)水平的檢測(cè)

重新收集入選患者的手術(shù)標(biāo)本蠟塊，由病理科重新切片，應(yīng)用EnVision免疫組織化學(xué)染色法，檢測(cè)所抽取病例中不同級(jí)別的星形細(xì)胞瘤組織中AEG-1的表達(dá)水平。兔抗人AEG-1多克隆抗體購(gòu)自英國(guó)Abeam公司，免疫組織化學(xué)染色試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)染色。另在病理科既往手術(shù)標(biāo)本中，選擇1例正常腦組織標(biāo)本、1例乳腺癌標(biāo)本行AEG-1 EnVision免疫組織化學(xué)染色，分別用作陰性對(duì)照及陽(yáng)性對(duì)照。

2.染色結(jié)果判定

AEG-1陽(yáng)性反應(yīng)物分布于細(xì)胞核周?chē)陌麧{，呈胞漿型。每張切片觀察5個(gè)高倍視野(×200)，分別選取切片左上、左下、右上、右下及中央5個(gè)點(diǎn)，對(duì)AEG-1陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行手工計(jì)數(shù)：陽(yáng)性細(xì)胞比例少于10%為陰性，10%～ 50%為陽(yáng)性，大于50%為強(qiáng)陽(yáng)性[2]。

3.預(yù)后隨訪

以手術(shù)日期為隨訪起點(diǎn)，末次隨訪時(shí)間(2013年7月)為終點(diǎn)，通過(guò)電話、門(mén)診和書(shū)信等隨訪患者的預(yù)后，預(yù)后判定標(biāo)準(zhǔn)為生存或死亡。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、AEG-1表達(dá)水平與腫瘤級(jí)別關(guān)系

AEG-1免疫反應(yīng)呈胞漿型，胞核周?chē)麧{可見(jiàn)強(qiáng)弱不等的黃至褐黃色染色。正常腦組織中無(wú)AEG-1蛋白的特異性染色，不同級(jí)別星形細(xì)胞瘤標(biāo)本切片陽(yáng)性分布表現(xiàn)不均一，見(jiàn)圖1。80例腫瘤組織中，76例表達(dá)AEG-1，總陽(yáng)性率為95%(76/80)，其中陽(yáng)性36例，強(qiáng)陽(yáng)性40例；陰性4例(5%)。不同級(jí)別星形細(xì)胞瘤中AEG-1陽(yáng)性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，低級(jí)別星形細(xì)胞瘤組陽(yáng)性表達(dá)率低于高級(jí)別星形細(xì)胞瘤組，見(jiàn)表1。AEG-1陰性組、陽(yáng)性組和強(qiáng)陽(yáng)性組年齡、性別、腫瘤切除程度及術(shù)后化學(xué)治療時(shí)間比較分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。AEG-1水平與腫瘤分級(jí)呈正相關(guān)(rs=0.493，P<0.001)。

二、 AEG-1的表達(dá)水平與預(yù)后的關(guān)系

80例患者均獲得隨訪；隨訪時(shí)間13～108個(gè)月，中位時(shí)間52個(gè)月。Ⅰ～Ⅳ級(jí)星形細(xì)胞瘤患者中位生存時(shí)間分別為7、3、4、3年(見(jiàn)圖2)。AEG-1陰性組、陽(yáng)性組和強(qiáng)陽(yáng)性組的中位生存時(shí)間分別為7、5和4年。經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，AEG-1陰性組、陽(yáng)性組、強(qiáng)陽(yáng)性組的生存率分別為75%、47%、53%，AEG-1陽(yáng)性者生存率低于陰性者(χ2=3.709，P<0.05)，見(jiàn)表2。AEG-1水平與患者的生存率呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.299，P<0.001)。

表1 不同級(jí)別星形細(xì)胞瘤中AEG-1陽(yáng)性表達(dá)率的比較

圖1 AEG-1在不同級(jí)別星形細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)(EnVision染色，×200)

胞核黃染為AEG-1陽(yáng)性；A：Ⅱ級(jí)星形細(xì)胞瘤組織，AEG-1呈陽(yáng)性；B：Ⅲ級(jí)星形細(xì)胞瘤組織，AEG-1呈強(qiáng)陽(yáng)性；C：Ⅳ級(jí)星形細(xì)胞瘤組織，AEG-1呈強(qiáng)陽(yáng)性；D：Ⅰ級(jí)星形細(xì)胞瘤組織，AEG-1呈陰性

表2 不同AEG-1 表達(dá)水平者的生存情況比較

圖2 不同級(jí)別星形細(xì)胞瘤患者的生存曲線

討 論

星形細(xì)胞瘤是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)病率最高的原發(fā)性腫瘤，目前其根治仍是神經(jīng)醫(yī)學(xué)的難題。因此，早期正確評(píng)價(jià)各級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤患者的預(yù)后對(duì)臨床治療具有很重要的意義，但影響其預(yù)后的因素很多，目前多數(shù)研究觀點(diǎn)認(rèn)為腫瘤的病理類(lèi)型、手術(shù)切除程度、術(shù)后放射治療或化學(xué)治療、發(fā)病年齡、臨床表現(xiàn)均為影響患者的預(yù)后的因素。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者預(yù)后較差，而低級(jí)別、病程長(zhǎng)、腫瘤位于小腦、以癲癇為主要表現(xiàn)、無(wú)頭痛及性格改變、腫瘤全切除者， 一般預(yù)后較佳。從切除程度來(lái)講，腫瘤全切者5年生存率可達(dá)80%，部分切除腫瘤或單純行腫瘤活組織檢查者5年生存率僅為45%～50%， 對(duì)40歲以上腫瘤次全切除的患者，放射治療可獲得滿意效果。腫瘤復(fù)發(fā)者多伴有腫瘤惡性程度增加，導(dǎo)致預(yù)后不佳，大約半數(shù)腫瘤復(fù)發(fā)后惡變，其中近1/3腫瘤復(fù)發(fā)后演變?yōu)槟z母細(xì)胞瘤(WHO Ⅳ級(jí))，復(fù)發(fā)后腫瘤的快速生長(zhǎng)常為死亡原因。

AEG-1是新近發(fā)現(xiàn)的與多種腫瘤的侵襲、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)的癌基因，如乳腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和惡性黑色素瘤等。人AEG-1又稱(chēng)為 Metadherin，最早(2005年)是在研究HIV相關(guān)性癡呆時(shí)，用快速消減技術(shù)在人原始胚胎星形細(xì)胞(PHFA)中克隆的與HIV或TNF-α誘導(dǎo)有關(guān)的基因，定位于8q22，表達(dá)產(chǎn)物分布于核周胞漿，是一種胞漿蛋白[1]。作為Ha-ras下游的靶基因，AEG-1主要通過(guò)激活NF-κB發(fā)揮作用，而且通過(guò)小RNA干擾技術(shù)敲除AEG-1表達(dá)可降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲性[3]。近5年的研究聚焦于AEG-1促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，認(rèn)為AEG-1調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵是增加了腫瘤細(xì)胞的侵襲性和黏附性[4]。基于其潛在的臨床關(guān)聯(lián)性，AEG-1表達(dá)情況已在不同腫瘤細(xì)胞系中進(jìn)行了檢測(cè)，包括膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系(如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤T98G和G18)，初步展示了AEG-1作為原癌基因的特性[5]。業(yè)已證實(shí)95%以上的高惡度膠質(zhì)瘤中都存在AEG-1表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象，如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和SV-40轉(zhuǎn)化的成人星形細(xì)胞瘤細(xì)胞，正常腦組織中則無(wú)表達(dá)。近年來(lái)對(duì)AEG-1越來(lái)越深入的研究顯示，AEG-1在腫瘤演進(jìn)中具有極為重要的作用，在腫瘤細(xì)胞如胃癌、乳腺癌、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤、前列腺癌細(xì)胞中AEG-1都呈高表達(dá)，并且其表達(dá)量與臨床分期呈正相關(guān)，而與性別、年齡無(wú)關(guān)；AEG-1在非小細(xì)胞肺癌的轉(zhuǎn)移中起重要作用，其高表達(dá)提示差的臨床后果；AEG-1是結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的生物學(xué)標(biāo)記[6-7]。據(jù)此AEG-1有望作為監(jiān)測(cè)腫瘤預(yù)后的指標(biāo)及腫瘤治療的新靶點(diǎn)分子，通過(guò)抑制AEG-1表達(dá)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)凋亡，抑制腫瘤血管的生成及降低腫瘤細(xì)胞的耐藥性，從而達(dá)到改善腫瘤的臨床療效、提高患者的生存率及生活質(zhì)量的目的。目前已有一些措施可以對(duì)癌細(xì)胞AEG-1發(fā)揮作用，如氯化鎘可以下調(diào)乳腺癌細(xì)胞AEG-1的表達(dá)；AEG-1的DNA疫苗可以減少乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移，同時(shí)提高對(duì)阿霉素的化學(xué)治療敏感性；然而，其在星形細(xì)胞瘤中的作用尚未可知[8-9]。故探討AEG-1這一與腫瘤侵襲性相關(guān)的分子標(biāo)記物，可以為進(jìn)一步制定有效的輔助治療方案提供有力的指導(dǎo)。

本研究中，80例星形細(xì)胞瘤、1例正常腦組織和1例乳腺癌標(biāo)本(陽(yáng)性對(duì)照)采用EnVision法檢測(cè)AEG-1蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)正常腦組織中無(wú)AEG-1蛋白的特異性染色；而95%星形細(xì)胞瘤中存在AEG-1表達(dá)。作為Ha-ras信號(hào)途徑的重要組成部分，AEG-1經(jīng)Ha-ras蛋白激活后結(jié)合NF-kB啟動(dòng)細(xì)胞異常生存途徑，介導(dǎo)細(xì)胞的異常增殖、增加細(xì)胞黏附性以及抗凋亡能力，反映腫瘤的惡性程度[9]。本研究顯示，隨著腫瘤惡性程度的增高AEG-1表達(dá)水平也升高，表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤的級(jí)別呈正相關(guān)(r=0.481,P<0.05)，AEG-1陽(yáng)性者術(shù)后生存率較陰性者低，且呈負(fù)相關(guān)，初步提示AEG-1表達(dá)陽(yáng)性者預(yù)后較差。

綜上所述，AEG-1表達(dá)強(qiáng)度和水平與星形細(xì)胞瘤惡性程度關(guān)系密切，可作為臨床評(píng)估星形細(xì)胞瘤患者預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)之一。

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