雙歧桿菌四聯活菌片聯合芪倍合劑對潰瘍性結腸炎患者T細胞亞群及Fas／FasL系統表達的調節＊

郭曉鶴，張彩鳳△，夏永華，朱艷麗，秦詠梅，韓 宇

（1.新鄉醫學院第一附屬醫院：1.消化科；2.皮膚科，河南新鄉 453100）

潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）屬于炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）的一種，是一種局限于結腸和直腸黏膜或黏膜下層的、邊界清楚的炎性反應。病變以遠端結腸受累多見，但也可累及整個結腸。臨床主要表現為腹痛、腹瀉、黏液膿血便、里急后重等，病程纏綿，易反復發作，治療無特異性。發病機制與免疫、遺傳和環境等因素有關［1］，免疫學說在UC的病因學中日益受到重視，微生態制劑雙歧桿菌四聯活菌片（以下簡稱為四聯活菌片）為腸道菌群調節藥物，可直接補充人體正常生理細菌，在腸道形成生物屏障，抑制腸道中某些致病菌，促進腸道蠕動，調整腸道菌群平衡，激發機體免疫力。芪倍合劑（豫藥制字Z04070018）是本院根據張仲景之大黃附子湯加味研制的一種灌腸劑，包括：黃芪300g，附子60g，大黃50g，干姜30g，五倍子50g，赤石脂600g，白及50g，其臨床療效肯定。用四聯活菌片聯合芪倍合劑治療UC，并對UC患者治療前后外周血T淋巴細胞亞群及Fas／FasL系統表達水平進行檢測，探討UC發病的免疫機制及聯合用藥的免疫調控作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 觀察病例為2009年6月至2012年6月本院消化科門診及住院的UC患者120例，其中，男53例，女67例，年齡13～75歲，平均（38.6±7.8）歲，病程3個月至18年，平均（5.6±2.1）年，用隨機數字表抽樣法分為3組，第一組為四聯活菌片聯合芪倍合劑治療患者40例，第二組為四聯活菌片治療患者40例，第三組為芪倍合劑治療患者40例，3組性別、年齡、病程、嚴重程度及分型差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。同樣方式抽取40名體檢者為健康對照組，其中，男18例，女22例，年齡18～57歲，平均（28.6±6.8）歲，均無免疫性疾病及系統性疾病史，本研究通過醫院倫理委員會批準，患者簽署知情同意書。

1.2 診斷標準及納入標準 根據2007年制訂的對中國炎癥性腸病診斷治療規范的標準［2］，在排除細菌性痢疾、阿米巴痢疾、慢性血吸蟲病、腸結核等感染性結腸炎、結腸克羅恩病、缺血性腸炎等疾病后，按以下診斷標準：（1）有典型臨床表現，并至少有內鏡3項特征性改變的1項和（或）黏膜活檢，可診斷為本病；（2）有典型臨床表現，并至少有X線鋇劑灌腸特征性改變3項中的1項，可診斷為本??；（3）臨床癥狀不典型，但有典型內鏡或X線鋇劑灌腸所見者，擬診為本病，并觀察發作情況。UC患者依據True－Love標準，將病情分為輕型、中型和重型。輕型：患者腹瀉每日4次以下，便血輕或無，無發熱，脈搏加快或貧血，血沉正常；中型：介于輕度與重度之間；重型：腹瀉每日6次以上，明顯黏液膿血便，體溫在37.5℃以上，脈搏在90次／分及以上，血紅蛋白小于100g／L，血沉大于30mm／h。內鏡分級參考改良的Baron分級標準：0級為黏膜正常；Ⅰ級為黏膜充血，血管模糊；Ⅱ級為黏膜有接觸性出血；Ⅲ級為黏膜有自發性出血；Ⅳ級為黏膜可見大小不等的潰瘍［3］。

1.3 方法 用藥：第一組，四聯活菌片（杭州龍達新科生物制藥有限公司，規格每粒0.5g）3粒／次，每天3次。同時口服本院自制中藥芪倍合劑（新鄉醫學院第一附屬醫院，規格每瓶100mL，每次50mL，每天2次）；第二組服用四聯治菌片，劑量同第一組；第三組服用芪倍合劑，劑量同第一組。以3個月為1個療程，觀察并記錄療效及不良反應。療效判斷：參照《臨床疾病診斷依據治愈好轉標準》［4］和《中藥新藥臨床研究指導原則（試行）》［5］制訂。痊愈：臨床癥狀消失，腸鏡檢查、腸黏膜檢查恢復正常。好轉：臨床癥狀減輕，腸鏡檢查、腸黏膜病變較前明顯改善，大便常規檢查有少量紅、白細胞。無效：治療前后，臨床癥狀和鏡檢等檢查無改善或無明顯改善?？傆行剩剑ㄈ龜担棉D例數）／總例數×100%。外周血淋巴細胞Fas及FasL的定量檢測及T細胞亞群分類檢測：采靜脈血3mL，肝素抗凝，離心取血清，用美國Coulter EPICS XL型流式細胞儀對3組病例治療前、后及健康對照組進行外周血淋巴細胞Fas、FasL表達水平的定量檢測及T細胞亞群分類檢測。試劑異硫氰酸熒光素（FITC）標記CD95單克隆抗體、FITC標記Fas配體單克隆抗體及FITC標記小鼠IgG1同型對照抗體購自法國Immunotech公司。

1.4 不良反應 觀察有無胃腸道癥狀（如惡心、嘔吐、食欲不振、腹瀉等）和其他不良反應情況。

1.5 統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行數據分析，計量資料用表示，采用t檢驗，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 臨床療效比較 四聯活菌片聯合芪倍合劑組總有效率達92.50%，各組臨床療效見表1。

2.2 外周血T細胞亞群檢測結果 各組治療前外周血T細胞（CD3＋）、輔助性 T 細胞（CD3＋CD4＋）、抑制性 T 細胞（CD3＋CD8＋）均高于健康對照組（P＜0.01），CD4＋／CD8＋比值下降（P＜0.01）；各組治療后 CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋CD8＋均較治療前下降（P＜0.05），CD4＋／CD8＋值也下降（P＜0.05），見表2。

表1 各組臨床療效比較

表2 各組治療前后外周血T細胞亞群檢測結果（）

表2 各組治療前后外周血T細胞亞群檢測結果（）

a：P＜0.05、b：P＜0.01，與健康對照組比較；c：P＜0.05、d：P＜0.01，與同組治療前比較。

組別 n 時間 CD3＋ CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋ CD4＋／CD8＋值第一組 40 治療前 68.65±5.15b 34.88±8.97b 21.76±5.19b 1.86±0.38b治療后 63.61±8.25d 33.68±7.96d 20.56±5.09d 1.57±0.66d第二組 40 治療前 65.91±5.05b 32.98±7.67b 21.76±5.29b 1.76±0.58b治療后 63.55±9.05d 33.54±6.88a 20.45±4.59a 1.45±0.56第三組 40 治療前 67.51±5.10a 35.48±5.65b 22.66±4.79a 1.66±0.58a治療后 62.54±7.65d 32.78±7.65c 22.76±8.97c 1.35±0.56c健康對照組 40 63.91±5.35 33.88±9.97 20.76±6.19 1.58±0.88

表3 各組治療前后外周血淋巴細胞Fas及FasL的表達情況（）

表3 各組治療前后外周血淋巴細胞Fas及FasL的表達情況（）

組別 n 時間Fas FasL第一組 40治療前 48.54±14.46b 1.27±0.69治療后 35.78±12.19d 1.09±1.20第二組 40治療前 42.38±12.45b 1.18±1.35治療后 36.55±13.34c 1.17±1.26

續表3 各組治療前后外周血淋巴細胞Fas及FasL表達情況（）

續表3 各組治療前后外周血淋巴細胞Fas及FasL表達情況（）

a：P＜0.05、b：P＜0.01，與健康對照組比較；c：P＜0.05、d：P＜0.01，與同組治療前后比較。

組別 n 時間Fas FasL第三組 40治療前 43.96±11.97b 40 38.55±9.99 1.18±1.251.27±1.24治療后 35.83±12.86ac 1.11±1.76健康對照組

2.3 外周血淋巴細胞Fas及FasL檢測結果 與健康對照組比較，各組治療前外周血淋巴細胞Fas表達明顯升高（P＜0.01），治療后Fas較治療前明顯下降（P＜0.01），見表3。

2.4 不良反應 第一組有2例出現惡心不適，第三組1例出現腹瀉加重，其余均無不良反應發生。

3 討 論

UC的病因和發病機制尚未明確，被 WHO列為疑難?。?］之一。它的病因和發病機制與免疫功能紊亂有密切的聯系［7］。Th1／Th2亞群平衡失調可能參與UC發?。?］，多認為是一種自身免疫性疾病，多種細胞因子［如IL、γ－干擾素、TNF、轉化生長因子（TGF）等］和炎性介質（白細胞三烯、血栓素、組胺、前列腺素等）參與UC的發生發展，引起組織破壞及炎性改變，具有較高的遺傳傾向［9］。由于其發病機理涉及多因素多環節相互作用，其治療是綜合的［10－11］。由于西藥治療本病存在毒副作用多、病情反復等［12］缺點，采用中醫藥治療越來越受到醫學界的關注。UC治療原則為盡早控制癥狀，維持緩解，預防復發，防治并發癥。因其病程遷延不愈，長達十幾年甚至幾十年亦有發生癌變的可能性［13］。流行病學資料提示UC的發病率在國內和國外都有逐年增高的趨勢［14－15］，可能與人們生活習慣、生活方式的變化、城市環境改變以及醫療水平的提高等有關。微生態制劑四聯活菌片為新型免疫調節劑，可誘導Th1反應，對外周血CD4＋T細胞亞群有一定的直接刺激作用，有助于調節和恢復體內Th1／Th2平衡，使CD4＋／CD8＋比值處于正常范圍。本研究表明，UC患者外周血T淋巴細胞亞群及Fas／FasL系統表達明顯升高，這與文獻報道的結果一致。芪倍合劑（豫藥制字Z04070018）是本院中藥制劑室研制的純中藥制劑具有健脾益腎、澀腸止瀉之功效。處方中黃芪補氣升陽、行滯通痹，五倍子澀腸止瀉，大黃瀉下攻積，附子散寒止痛，白及收斂止血，赤石脂斂瘡生肌，諸藥合用，相輔相成，具有健脾益腎、澀腸止瀉之功效。近年來研究表明，黃芪、附子、干姜都具有免疫調節作用，大黃有消炎及免疫調節和使局部血管收縮的止血作用，五倍子能使黏膜、潰瘍等局部組織蛋白凝固而呈現收斂作用，能加速血液凝固止血，對多種細菌均有明顯抑制和殺滅作用，赤石脂能吸附消化道的毒物和炎癥滲出物，使炎癥得以緩解。有研究報道芪倍合劑能顯著降低大鼠模型結腸組織促炎細胞因子、TNF－α、IL－8水平，表明其能抑制促炎細胞因子的分泌，調節免疫反應，減少炎癥遞質的釋放，從而有效阻斷免疫反應性對機體造成的損傷，達到治療的目的。研究表明在活動性UC病變區域或炎癥附近的區域的上皮細胞和保護性免疫細胞發生凋亡的程度和范圍都高于正常組織，且導致這種大量凋亡是通過Fas／FasL途徑完成的。Fas／FasL在結腸上皮細胞內的信號主要的是通過半胱天冬蛋白酶caspase介導細胞凋亡的，caspase可通過裂解細胞角蛋白18等引導細胞凋亡發生。

本研究通過對微生態制劑聯合芪倍合劑治療UC，無論在臨床療效還是各項指標的改善上均優于健康對照組，總有效率達92.5%，明顯高于四聯合菌片單獨治療（P＜0.01）。CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋較治療前降低（P＜0.05），CD4＋／CD8＋比值降低（P＜0.05），Fas明顯下降（P＜0.01），表明四聯合菌片在芪倍合劑的協同作用下，通過調整機體細胞免疫功能，提高UC的療效。

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