抗核抗體和自身免疫性肝病相關抗體檢測在原發性膽汁性肝硬化診斷中的價值

胡玲，谷磊，劉蓓蓓，高成城

論著·臨床

抗核抗體和自身免疫性肝病相關抗體檢測在原發性膽汁性肝硬化診斷中的價值

胡玲，谷磊，劉蓓蓓，高成城

目的探討抗核抗體(ANA)和自身免疫性肝病相關抗體聯合檢測在原發性膽汁性肝硬化診斷中的價值。方法選取2012年7月—2013年12月住院的原發性膽汁性肝硬化患者40例作為觀察組，86例非自身免疫性肝病患者為對照組。采用間接免疫熒光法檢測患者血清ANA，采用免疫印跡法檢測抗線粒體抗體(AMA)、SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210，分析其診斷價值。結果觀察組患者AMA檢出率為95.00%(38/40)，明顯高于對照組的5.81% (5/86)(χ2=6.25，P<0.05)。ANA中的著絲點型、核膜型及核多點型檢出率分別為35.00%(14/40)、30.00%(12/40)和22.50%(9/40)，明顯高于對照組的11.63%(10/86)、5.81%(5/86)和3.49%(3/86)(χ2=2.725、6.780、2.876，P<0.05)。觀察組SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210檢出率明顯高于對照組(分別為30.00%、22.50%、17.50%、10.00%、15.00% vs. 3.49%、1.16%、4.65%、2.33%、3.49%，均P<0.05)。ANA檢測觀察組靈敏度和特異度及符合率分別為92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)，明顯高于對照組的84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。結論臨床采用ANA和自身免疫性肝病相關抗體譜聯合檢測，可提高原發性膽汁性肝硬化的臨床檢出率，為其診斷和治療提供重要的參考價值。

抗核抗體；肝硬化，原發性，膽汁性；自身免疫性肝病相關抗體

自身免疫性肝病主要是一組因患者自身抗體存在而導致的肝組織特異性病理損傷的慢性疾病，目前對其發病機制及相關致病因素還不明確[1，2]，臨床一般認為其與自身免疫存在一定關系。臨床上將其分為原發性膽汁性肝硬化(PBC)、自身免疫性肝炎(AIH)及原發性硬化性膽管炎(PSC)。這3種疾病可表現為嚴重肝臟病變，甚至可發展為肝硬化。隨著醫學檢驗技術的不斷發展，這類人群的臨床檢出率不斷增加。現探討抗核抗體(ANA)和自身免疫性肝病相關抗體在原發性膽汁性肝硬化患者中的診斷價值，為臨床診斷和治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年7月—2013年12月于我院住院的原發性膽汁性肝硬化患者40例作為觀察組，按照美國肝病學會2000年制定的PBC診斷標準確診[3]。其中男17例，女23例；年齡 52～75 歲，中位年齡62.0歲；病程1.1～3.4年，中位病程2.0年；基礎病：類風濕性關節炎12例，強直性脊柱炎10例，病毒性乙型肝炎10例，系統性硬化病8例；合并癥：糖尿病14例，高血壓17例，股骨頭壞死9例。非自身免疫性肝病患者86例為對照組，患者超聲及膽管造影檢查提示肝管正常。膽汁淤積生化指標堿性磷酸酶升高。其中男48例，女38例；年齡 49～74歲，中位年齡61.5歲；病程1.2～3.7年，中位病程2.4年；基礎病：類風濕關節炎15例，強直性脊柱炎12例，病毒性乙型肝炎9例，系統性硬化病4例；合并癥：糖尿病17例，高血壓13例，股骨頭壞死10例。2組患者性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。入選患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 觀測指標與方法 于早上9∶00，患者處于空腹下使用專用血凝真空管采集靜脈血液。以稀釋液稀釋、輕搖調勻，并置于抗凝管中，然后于采血后1 h內檢測完成，采用SYSMEX XS-800i血液分析儀，按照全自動血球計數儀標準操作程序檢測，稀釋液、溶血素、清洗液全部為儀器配套試劑以及美國貝克曼公司生產的質控液，抗凝劑用濃度為80 g/L的EDTA-K2溶液。觀察組與對照組均采用間接免疫熒光法檢測患者血清ANA，分別采用鼠腎、猴肝為抗原基質進行操作[4]。自身免疫性肝病自身抗體譜用免疫印跡法檢測：包括抗線粒體抗體(AMA)和抗核顆粒抗體(SP100)、抗肝—胰抗體與抗可溶性肝抗原抗體(SLA/LP)、抗肝細胞溶質抗原I型(LC-1)、抗肝腎微粒體抗體(LK-M)、抗核膜糖蛋白抗體(gp-210)。免疫印跡法：采集患者血清，然后按照1∶100比例稀釋，再利用歐蒙滴定平板技術，將抗原帶位置固定好，用肉眼判斷檢測結果[5]。陽性：觀察特定區條帶，清晰可見強著色帶。其中TS-型轉移脫色搖床(由江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司生產)，自身免疫性肝病自身抗體譜試劑盒由德國歐蒙公司提供并嚴格按照德國歐蒙公司提供操作說明書進行。

1.3 統計學方法 采用SPSS 19.0軟件進行統計與分析。計數資料以率(%)表示，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 AMA及ANA陽性檢出情況比較 觀察組患者AMA檢出率明顯高于對照組(P<0.05)；ANA中的著絲點型、核膜型及核多點型檢出率均明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組AMA及ANA陽性檢出情況比較 [例(%)]

2.2 自身免疫性肝病相關抗體陽性檢出情況比較 觀察組SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210檢出率均明顯高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 2組自身免疫性肝病相關抗體陽性檢出情況比較 [例(%)]

2.3 診斷試驗 觀察組ANA檢測靈敏度和特異度及符合率分別為92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)，明顯高于對照組的84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。

3 討 論

在診斷自身免疫性肝病時，自身抗體檢測也具有十分重要的應用價值[6]。但大多數患者自身抗體并無器官特異性或者種屬性，同時還無疾病特異性[7]。雖然自身抗體為自身免疫性肝病的血清檢測標志物，但在丙型肝炎和藥物性肝炎等患者人群中均可檢測到。自身免疫性肝病主要有PBC、AIH及PSC，目前臨床上非常關注其發病機制和診斷及治療方法[8]。AIH一般發病于女性人群，根據患者血清中所出現的自身抗體類型，將其分為I型：血清中抗平滑肌抗體和抗核抗體陽性；II型：血清中抗腎微粒抗體1陽性；III型：主要表現為抗可溶性肝抗原/肝胰抗體陽性[9]。

臨床上，PBC屬于一種慢性肝內膽汁淤積性疾病，這種疾病大多發生于中老年女性人群中，且大多數患者在晚期階段才得以確診。經2000年美國肝病學會所制定的PBC診斷指南[10]，這種疾病較為重要的免疫學診斷指標為抗線粒體抗體陽性，有95.0%～98.0%的PBC患者抗線粒體抗體表現為陽性[11]。本研究中，PBC患者的抗線粒體抗體陽性檢出率為95.00%，與相關報道一致。

SP100抗體是一種可溶性酸性磷酸化核蛋白，其在AMA陰性PBC患者中的陽性檢出率約為60.0%，明顯高于AMA陽性患者的20.0%[12]。所以SP100抗體對AMA陰性PBC患者的診斷具有非常重要的意義。本研究發現，在PBC患者核多點型ANA陽性檢出率為22.50%，明顯高于非自身免疫性肝病患者的3.49%(P<0.05)。抗gp-210抗體所識別的表位主要是gp-210羥基末端上15個氨基酸殘基，其自身抗體則被認為是PBC患者高度特異性抗體，特異性大約為95.00%。大約有50.0%AMA陰性PBC患者血清中可檢測到抗gp-210抗體，說明患者預后較差，同時其還可作為PBC患者預后判斷標準。在ANA中，抗gp-210主要表現為核膜型，本研究中，PBC患者的ANA核膜型陽性檢出率為30.00%，明顯高于非自身免疫性肝病患者的5.81%(P<0.05)。著絲點型抗體主要是系統性硬化癥患者的一種亞型，而PBC常常會與其存在10.00%～15.00%的重疊率。本研究發現，PBC患者著絲點型ANA陽性檢出率為35.00%，明顯高于非自身免疫性肝病患者的11.63%(P<0.05)。SP100抗體、AMA及gp210抗體對PBC的臨床診斷和預后判斷具有十分重要的參考價值。聯合檢測可提高其臨床診斷特異性，降低或避免發生漏診情況。此外，本研究發現，觀察組ANA檢測靈敏度和特異度及符合率分別為92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)明顯高于對照組84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。由此而說明采用ANA和自身免疫性肝病相關抗體檢測具有較高靈敏度和特異度，進而可提高臨床檢出率，并且患者檢測符合率較高。

AIH一般發病于中青年女性人群，主要表現為肝臟炎癥性疾病，極易發展為肝硬化，且患者病死率較高。采用免疫抑制劑治療具有較好的治療效果，因此需及早診斷和及時治療。采用ANA診斷AIH的診斷率為100.00%。而SLA/LP為AIH最特異性的檢測指標，其陽性檢出率在10.00%～30.00%，但是其陽性預測值接近100.00%，因此對AIH具有較高的特異性。此外，其在病毒性肝炎患者中主要表現為陰性反應。本研究中。在AIH發病機制中，LKM-1抗體的作用并不明確，同時在慢性丙型肝炎患者的血清中，其陽性率大約為6.00%。然在AIH患者中，LKM-1抗體的滴度要明顯高于慢性丙型肝炎患者。本研究發現，觀察組SP100、LSA/LP、LC-1、LK-M、gp-210檢出率均明顯高于對照組(P<0.05)。

總之，ANA和自身免疫性肝病相關抗體檢測可提高臨床原發性膽汁性肝硬化的診斷率。對原發性膽汁性肝硬化的診斷、治療及預后判斷均具有十分重要的應用價值。所以，對于存在肝臟功能損害和血清肝炎病毒感染指標為陰性者，尤其是女性人群，均需及時進行自身抗體檢測，以及早診斷，及時治療，改善預后，進而提高患者生活質量，降低臨床病死率。

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5 劉金濤.自身抗體在臨床自身免疫性肝病中的作用和診斷意義[J].中國免疫學雜志,2013,29(6):669-672.

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11 王波,丁楠,常波.乙型肝炎后肝硬化自身抗體檢測及其對肝功能影響的研究[J].中國實驗診斷學,2013,17(11):2022-2025.

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EvaluationofANAandautoimmuneliverdiseaseassociatedantibodiesindiagnosisofprimarybiliarycirrhosis

HULing*,GULei,LIUBeibei,GAOChengcheng.

*DepartmentofLaboratory,HuaianHospitalofNanjingMedicalUniversity,JiangsuProvince,Huaian223300,China

ObjectiveTo investigate the anti-nuclear antibody (ANA) and autoimmune hepatitis antibodies in detection of primary biliary cirrhosis.MethodsFrom July 2012 to December 2013, hospitalized patients with primary biliary cirrhosis of 40 cases were enrolled as the observation group, 86 patients with non-autoimmune liver disease patients as control group. Anti-nuclear antibodies in the sera of patients were detected by indirect immunofluorescence (ANA), Western blot was used to detect anti mitochondrial antibody (AMA), SP100,SLA/LP,LC-1, LK-M, gp-210, analyzed the diagnostic value of them.ResultsIn the observation group, AMA positive rate was 95.00% (38/40), significantly higher than that in the control group of 5.81% (5/86) (χ2=6.25,P<0.05), ANA’s the centromere type, nuclear membrane and nuclear multi point detection rates were 35.00% (14/40), 30.00% (12/40) and 22.50% (9/40), significantly higher than the control group with 11.63% (10/86), 5.81% (5/86) and 3.49% (3/86) (χ2=2.725、6.780、2.876，P<0.05). The observation group’s SP-100,SLA/LP,LC-1, LK-M, gp-210 positive rate were obviously higher than those of the control group (30.00%, 22.50%, 17.50%, 10.00%, 15.00% vs. 3.49%, 1.16%, 4.65%, 2.33%, 3.49%,P<0.05). The observation group’s sensitivity, specificity and coincidence rate was 92.50% (37/40), 87.50% (35/40), 95.00% (38/40), which were significantly higher than the control group with 84.88% (73/86), 77.91% (67/86), 87.21% (75/86) (P<0.05).ConclusionClinical application of ANA and autoimmune hepatitis antibody spectrum joint detection can improve the detection rate of clinical primary biliary cirrhosis, provides important reference value for the diagnosis and treatment.

Anti-nuclear antibody; Liver cirrhosis,primary,biliary; Autoimmune liver disease associated antibodies

223300 南京醫科大附屬淮安第一醫院檢驗科(胡玲、谷磊、劉蓓蓓)，消化科(高成城)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.11.007

2014-06-13)