華重樓愈傷組織培養及薯蕷皂苷含量測定

王躍華+陳燕+張玨+張紅玉+游亞莉+田孟良+

摘要：以華重樓［Ｐａｒｉｓ ｐｏｌｙｐｈｙｌｌａ Ｓｍｉｔｈ ｖａｒ． ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ （Ｆｒａｎｃｈ．）Ｈａｒａ］植物多種器官為外植體，經不同消毒處理和培養基誘導培養后，觀察其愈傷組織的誘導生長情況；并以ＴTＣ法檢測誘導產生的愈傷組織中的薯蕷皂苷含量。結果表明，華重樓的隱芽、內層芽鞘、根莖、預處理后根莖和子房外植體經誘導培養后，均可不同程度地產生愈傷組織；其中以預處理后根莖外植體產生的愈傷組織生長速度最快，誘導率也最高，為３３．５％。經檢測結果顯示，多次繼代培養的華重樓愈傷組織中含有與華重樓對照藥材和薯蕷皂苷對照品相同的薯蕷皂苷或其類似物。

關鍵詞：華重樓［Ｐａｒｉｓ ｐｏｌｙｐｈｙｌｌａ Ｓｍｉｔｈ ｖａｒ． ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ （Ｆｒａｎｃｈ．）Ｈａｒａ］；外植體；誘導；愈傷組織

中圖分類號：Ｑ８１５文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０14）08－1936-05

Ｃａｌｌｕｓ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ of Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ Ｓａｐｏｎｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｐａｒｉｓ ｐｏｌｙｐｈｙｌｌａ Ｓｍｉｔｈ vａｒ． Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ （Franch.） Hara

ＷＡＮＧ Ｙｕｅ－ｈｕａ１， ＣＨＥＮ Ｙａｎ２， ＺＨＡＮＧ Ｊｕｅ１， ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｙｕ１， ＹＯＵ Ｙａ－ｌｉ１， ＴＩＡＮ Ｍｅｎｇ-ｌｉａｎｇ３

（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１０１0６， Ｃｈｉｎａ；

２． Ｓｉｃｈｕａｎ Ｊｉｎｔｕｄｉ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈｅｒｂａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．， Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１１１３０，Ｃｈｉｎａ；

３．Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｒｕｒａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ＹａＡｎ ６２５０１４， Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Tｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒｇａｎs ｏｆ Ｐａｒｉｓ ｐｏｌｙｐｈｙｌｌａ Ｓｍｉｔｈ ｖａｒ． ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｆｒａｎｃｈ．）Ｈａｒａ were used as ｅｘｐｌａｎｔｓ and were ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｗａｙ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎ ｓｅｒｉｏｕｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ. Tｈｅ ｄｉｏｓｃｉｎ ｏｆ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒａｌ ｃａｌｌｕｓ was detected by TTC． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｔｅｓ， ｉｎｎｅｒ ｃｏｌｅｏｐｔｉｌｅ， ｒｈｉｚｏｍｅ， ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ ｒｈｉｚｏｍｅ ａｎｄ ｏｖａｒｙ could ｐｒｏｄｕｃｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｉｎｇ. Aｍｏｎｇ ｔｈｅｍ ，ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｓｐｅｅｄ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｂｙ ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ ｒｈｉｚｏｍｅ ｗａｓ ｆａｓｔ， ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｓｔ ｔｏ ３３．５％． Ｔｈｅ ｓｅｖｅｒａｌ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃａｌｌｕｓ ｓｈｏｗｅｄ that ｔｈｅ ｓａｍｅ ｄｉｏｓｃｉｎ ｏｒ ｉｔｓ ａｎａｌｏｇｕｅ ｗｉｔｈ ｒｈｉｚｏｍｅ ａｎｄ ｄｉｏｓｃｉｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ． Tｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｅｘｐｌａｎｔ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ was screened out. Cａｌｌｕｓ could ｂｅ ａｃｑｕｉｒｅｄ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ. Tｈｅ ｓｅｖｅｒａｌ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｄｉｏｓｃｉｎ ｏｒ ｉｔｓ ａｎａｌｏｇｕｅ ｗｉｔｈ ｒｈｉｚｏｍｅ ａｆｔｅｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ. Iｔ will ｐｒｏｖｉｄｅ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｗａｙ ｆｏｒ ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｍａｔｅｒｉａｌ ｂｙ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐａｒｉｓ ｐｏｌｙｐｈｙｌｌａ Ｓｍｉｔｈ ｖａｒ． ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ （Ｆｒａｎｃｈ．）Ｈａｒａ； ｅｘｐｌａｎｔｓ； ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ； ｃａｌｌｕｓ

重樓（Ｒｈｉｚｏｍａ ｐａｒｉｄｉｓ）是名貴中藥材之一，全世界共有２４種，我國擁有１９種，其中以西南地區各省的種類和資源尤為豐富［１］。重樓為百合科植物華重樓（七葉一枝花）［Ｐａｒｉｓ ｐｏｌｙｐｈｙｌｌａ Ｓｍｉｔｈ ｖａｒ． ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ （Ｆｒａｎｃｈ．）Ｈａｒａ］和滇重樓［Ｐ． ｐｏｌｙｐｈｙｌｌａ Ｓｍｉｔｈ ｖａｒ． ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ（Ｆｒａｎｃｈ．） Ｈａｎｄ-Ｍａｚｚ］的干燥根莖［２］。重樓主要有效成分是甾體皂苷，其苷元主要為異螺甾烷醇類的薯蕷皂苷元和偏諾皂苷元［３］?，F代藥理研究表明，重樓具有抗腫瘤、止血、止咳平喘、抗菌、抗病毒、避孕等作用，其良好的療效使其已被眾多的制藥工業用于藥劑的生產中，是云南白藥、宮血寧、熱毒清等重要中成藥的主要成分，用途極廣泛［４－８］。

隨著中醫藥產業的快速發展，重樓藥材的需求量正以每年２０％的幅度遞增，而當前重樓主要靠采挖野生資源。由于長期過度采挖，致使野生重樓資源遭到了毀滅性的破壞，重樓已被列為國家重點保護野生藥材瀕危物種，也是云南?。常皞€重要瀕危藥用植物之一［９，１０］。利用組織培養技術生產藥用植物具有生長周期短、繁殖率高等優點，還能降低災害性氣候對植物生長的不利影響。因此積極開展對重樓植物的組織培養研究是解決當前重樓藥材嚴重短缺和更好地保護其野生植物資源的有效方法。然而到目前為止，重樓植物的組織培養研究都還未取得實質性進展［１１－１３］，也未獲得含有重樓有效成分皂苷的愈傷組織。

本研究針對當前重樓植物在組織培養研究過程中存在的諸多問題，以華重樓的多種器官為外植體，開展了大量有針對性的研究工作，以期利用組織培養技術有效解決重樓植物快速無性繁育的瓶頸問題以及為生產重樓植物次生代謝產物提供參考。

１ 材料與方法

１．１材料

１．１．１樣品重樓藥材采自四川省都江堰市，經四川大學張浩教授鑒定為百合科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）重樓屬（Ｐａｒｉｓ Ｌｉｎｎａｅｕｓ）植物華重樓的根莖；薯蕷皂苷對照品（批號：１１１７０７－２００５０１），由中國藥品生物制品鑒定所提供。

１．１．２藥品與試劑甲醇（批號：２００７０８３０）、三氯甲烷（批號：２０１１０５２４）、硫酸均由成都科龍化工試劑廠提供（批號：２００８０７２１）；純凈水，藍光飲用純凈水；其他試劑均為分析純。

１．１．３儀器硅膠Ｇ板，由上海信誼儀器廠提供；紫外燈，由無錫科達儀器廠提供。

１．２方法

１．２．１華重樓各營養器官外植體消毒和愈傷組織誘導選取華重樓生長健康的隱芽，從隱芽上剝離的內層芽鞘、根、幼葉、地上莖、根莖和預處理后根莖（切取倒苗后重樓帶芽的前兩節根莖，移栽到土壤中待其有新根長出時，挖出移栽體，再切去前端的芽體和后面一節根莖，只保留靠近芽體部分的第一節根莖，即為預處理后根莖）等為外植體。在超凈工作臺上先將各外植體經７０％乙醇消毒３０ ｓ，再用０．１％升汞溶液消毒，其中隱芽、內層芽鞘和幼葉消毒６ ｍｉｎ，地上莖消毒８ ｍｉｎ，根、根莖及預處理后根莖消毒１２ ｍｉｎ，最后用無菌水沖洗５次，并用吸水紙吸干各外植體水分；將消毒完成的外植體切成適當大小后接種于 ＭＳ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ培養基中，在溫度（２０±２） ℃，光照時間１２ ｈ／ｄ，光照度１ ０００～１ ５００ ｌｘ的培養條件下誘導培養６５ ｄ，統計各外植體愈傷組織誘導情況。

１．２．２華重樓花各組織外植體消毒和愈傷組織誘導選取華重樓植物花的花萼、花瓣、花藥、花絲、子房和花亭為外植體，在超凈工作臺上先用０．１％升汞消毒處理，其中花萼、花亭和子房消毒８ ｍｉｎ，花瓣、花絲和花藥消毒３ ｍｉｎ，再用無菌水沖洗３次，并用吸水紙吸干材料表面水分后將花萼、花瓣、花絲和花藥直接接入培養基中，花亭和子房縱切成兩半后再接入培養基中，培養基配方和培養條件與“１．２．１”相同。

１．２．３華重樓愈傷組織增殖選取經預處理后根莖外植體產生的白色和淺黃白色生長狀況良好的愈傷組織接入增殖培養基中，分別取培養生長５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５和６０ ｄ的愈傷組織并稱重，繪制愈傷組織的增殖生長曲線。

１．２．４細胞存活率檢測試驗培養材料的細胞存活率檢測采用氯化三苯基四氨唑還原法，簡稱ＴＴＣ法［１４］。

１．２．５愈傷組織中薯蕷皂苷含量測定對照品溶液的制備：取薯蕷皂苷對照品（使用前于五氧化二磷干燥器中干燥１２ ｈ以上）適量，準確稱取１ ｍｇ，加甲醇配制成１ ｍｇ／ｍＬ的對照品溶液。

華重樓對照藥材溶液的制備：取華重樓藥材于５５ ℃烘干后粉碎過４０目篩制得粉末。取粉末０．５ ｇ，加８５％乙醇１０ ｍＬ，加熱回流３０ ｍｉｎ后濾過，濾液作為對照藥材溶液。

供試品１的制備：選取繼代培養５代的華重樓愈傷組織按對照藥材溶液的制備方法進行制備。

供試品２的制備：選取繼代培養２代的華重樓愈傷組織按對照藥材溶液的制備方法進行制備。

空白對照品的制備：取８５％乙醇溶液作為空白對照品溶液。

１．２．６數據統計數據計算結果以x±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ １９．０軟件進行方差分析，新復極差法進行多重比較，其中Ｐ＜０．０５為差異顯著，Ｐ＜０．０１為差異極顯著。

２結果與分析

２．１華重樓各營養器官外植體愈傷組織誘導

本試驗選取華重樓７個不同部位的營養器官經消毒處理后接入ＭＳ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ培養基中，在培養６５ ｄ后統計其外植體愈傷組織誘導情況結果見表１。

從表１可以看出，華重樓植物的隱芽、內層芽鞘、未預處理根莖和預處理后根莖４個部位的外植體都能不同程度地誘導出愈傷組織，其中經預處理后根莖外植體愈傷組織誘導率極顯著高于其他外植體，為（３３．５±１．６）％（Ｐ＜０．０１）。經預處理后根莖外植體在接入培養基后３０～４０ ｄ就出現明顯的啟動現象，根莖橫切面的顏色由最初的白色變為淺棕黃色，并且其器官內的基本組織會產生明顯地體積膨大，常將根莖的皮部組織脹破，最終使得基本組織向外膨出，隨后在膨出的基本組織表面產生大量的白色愈傷組織，形如花菜狀、質地較緊密（圖１）；未預處理根莖在培養過程中，組織膨出不明顯，其愈傷組織的誘導率也較低為（１９．６±１．３）％，產生的愈傷組織顏色為白色和黃色，其產生數量也較少（圖２）；隱芽外植體在接入培養基的初期，主要表現為芽體的整體膨大，但隨著培養時間的延長，有部分隱芽出現了抽苗現象，但始終未見有愈傷組織產生（圖３）；而另一部分隱芽在體積膨大的基礎上，逐漸愈傷化（圖４），培養６５ ｄ后統計愈傷組織誘導率為（１２．８±１．３）％。內層芽鞘外植體在接入培養基２５ ｄ左右，芽鞘體積膨大而呈肥厚肉質，并在接下來的培養過程中，可觀察到膨大芽鞘的內表面和邊緣逐漸長出質地較緊密、顏色為白色的團塊狀愈傷組織（圖５）。

而華重樓的幼葉、地上莖和根外植體在培養６５ ｄ后都未觀察到有愈傷組織的產生；盡管幼葉和地上莖也能在培養基中保持較長時間的活力，而且幼葉膨大也非常明顯（圖６），但隨著培養時間的延長，幼葉會逐漸枯萎死亡，而地上莖則會因褐化而死亡；根外植體在接入培養基后，一直未發生形態上的變化，并且染菌率也低，這與Cheung等［７］的研究結果相似，在培養８０ ｄ后用ＴＴＣ法檢測培養的根細胞存活率僅為（４．５±０．２）％。

２．２華重樓花各器官外植體的愈傷組織誘導

華重樓花各器官外植體也接種在愈傷組織誘導培養基上，在培養６０ ｄ后統計各外植體的情況結果見表２。從表２可以看出，６種不同外植體在接入培養基中培養６０ ｄ后，只觀察到子房外植體有少量愈傷組織的產生。子房產生愈傷組織的部位主要在子房切面的子房壁傷口處有少量顏色為黃色和黃褐色零星顆粒狀愈傷組織產生（圖７）；子房產生的愈傷組織生長時間很短也就停止了，其原因主要是因為子房壁傷口在培養過程中產生褐變較嚴重的緣故。

花萼和花絲外植體在接入培養基后大多會出現膨大，但隨著培養時間的延長，最終都出現枯萎死亡；而花瓣和花藥外植體在接入培養基后，形態不發生變化，在培養８０ ｄ后用ＴＴＣ法檢測其細胞均已死亡；花亭外植體在接入培養基后，部分可在節處可產生一定的膨大，但隨著培養時間的延長，外植體會產生褐變而死亡。

２．３華重樓愈傷組織的增殖

選經預處理后根莖外植體產生的白色和淺黃白色愈傷組織２ ｇ／Ｌ接入ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的增殖培養基中，每隔５ ｄ取樣稱重并觀察其生長情況，繪制出愈傷組織增殖生長曲線見圖8。從圖8可以看出，在華重樓愈傷組織的增殖生長過程中，延遲期時間較長為１５～２０ ｄ左右；此后愈傷組織生長進入對數生長期，并開始迅速增殖生長。對數生長期持續時間為２０～２５ ｄ 左右，在此時間段愈傷組織細胞可增殖２倍多；此后，愈傷組織增殖生長進入平穩期，其增殖速度也明顯減慢。

２．４薯蕷皂苷含量的測定結果

按照《中華人民共和國藥典》２０１０版薄層色譜法（附錄ＶＩＢ）試驗，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各５ μL以及對照品溶液１０ μL，分別點于同一硅膠Ｇ薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水（體積比１５∶５∶１）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴１０％硫酸乙醇溶液在１０５ ℃加熱至斑點顯色清晰，分別至日光燈和紫外光燈（３６５ ｎｍ）下檢視。

由圖９、表３可以看出，供試品１（繼代培養５代的華重樓愈傷組織）與對照藥材和對照品都有顏色相同、遷移率相當的顯色斑點， 表明繼代培養５代的華重樓愈傷組織中具有薯蕷皂苷或其類似物；供試品２（繼代培養２代華重樓愈傷組織）不含與對照品相同的斑點，但在Ｒｆ＝０．６１１處的斑點與對照藥材和供試品１相當，表明繼代培養２代華重樓愈傷組織不含有薯蕷皂苷，但含有華重樓的其他成分；試驗結果顯示空白對照品無干擾。

３小結與討論

在對華重樓愈傷組織的誘導過程中，筆者發現在適宜的時期選擇有效的外植體部位是非常重要的。本研究中所采用的兩種根莖外植體都是除去了芽體后保留的第一節的根莖，結果表明，經預處理后的根莖外植體不僅愈傷組織誘導率更高，而且產生的愈傷組織數量也更多，愈傷組織的生長質量也更好，因而也確保了后繼愈傷組織的成功增殖；本研究也曾采用了除第一節根莖以外的其他根莖作為外植體進行愈傷組織誘導，但最終都未獲得愈傷組織，這也與延齡草（Trillium tschonoskii Maxim.）不同部位根莖誘導愈傷組織的情況相似［１５］；因此，華重樓植物頂芽后的第一節根莖細胞保持有較強的潛在分裂能力，細胞經誘導培養后較易脫分化產生愈傷組織。

薯蕷皂苷作為華重樓植物中的重要有效成分，是屬于植物的次生代謝產物。經多次繼代培養的華重樓愈傷組織，是可以在產生大量初生代謝產物的基礎上，進一步產生薯蕷皂苷次生代謝物；因此，在重樓植物以后的組織培養研究過程中，可有效地通過改變培養基中各成分的種類、比例以及積極開展前體飼喂技術和利用發根農桿菌的遺傳轉化技術，最終實現利用生物技術生產重樓植物有效成分薯蕷皂苷的目的。

本研究研究了華重樓各部位外植體誘導產生愈傷組織的情況，篩選出了經預處理后的根莖是產生愈傷組織的最佳外植體，并成功地建立了華重樓愈傷組織增殖培養體系，為開展華重樓組培苗的生產和篩選出次生代謝產物含量高的細胞株進行擴大培養奠定了工作基礎。

參考文獻：

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３小結與討論

在對華重樓愈傷組織的誘導過程中，筆者發現在適宜的時期選擇有效的外植體部位是非常重要的。本研究中所采用的兩種根莖外植體都是除去了芽體后保留的第一節的根莖，結果表明，經預處理后的根莖外植體不僅愈傷組織誘導率更高，而且產生的愈傷組織數量也更多，愈傷組織的生長質量也更好，因而也確保了后繼愈傷組織的成功增殖；本研究也曾采用了除第一節根莖以外的其他根莖作為外植體進行愈傷組織誘導，但最終都未獲得愈傷組織，這也與延齡草（Trillium tschonoskii Maxim.）不同部位根莖誘導愈傷組織的情況相似［１５］；因此，華重樓植物頂芽后的第一節根莖細胞保持有較強的潛在分裂能力，細胞經誘導培養后較易脫分化產生愈傷組織。

薯蕷皂苷作為華重樓植物中的重要有效成分，是屬于植物的次生代謝產物。經多次繼代培養的華重樓愈傷組織，是可以在產生大量初生代謝產物的基礎上，進一步產生薯蕷皂苷次生代謝物；因此，在重樓植物以后的組織培養研究過程中，可有效地通過改變培養基中各成分的種類、比例以及積極開展前體飼喂技術和利用發根農桿菌的遺傳轉化技術，最終實現利用生物技術生產重樓植物有效成分薯蕷皂苷的目的。

本研究研究了華重樓各部位外植體誘導產生愈傷組織的情況，篩選出了經預處理后的根莖是產生愈傷組織的最佳外植體，并成功地建立了華重樓愈傷組織增殖培養體系，為開展華重樓組培苗的生產和篩選出次生代謝產物含量高的細胞株進行擴大培養奠定了工作基礎。

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［１５］ 胡天印，錢麗華，劉漢卿．瀕危植物延齡草愈傷組織誘導研究［Ｊ］．浙江師范大學學報（自然科學版），２００６，２９（３）：３２６－３２９．

３小結與討論

在對華重樓愈傷組織的誘導過程中，筆者發現在適宜的時期選擇有效的外植體部位是非常重要的。本研究中所采用的兩種根莖外植體都是除去了芽體后保留的第一節的根莖，結果表明，經預處理后的根莖外植體不僅愈傷組織誘導率更高，而且產生的愈傷組織數量也更多，愈傷組織的生長質量也更好，因而也確保了后繼愈傷組織的成功增殖；本研究也曾采用了除第一節根莖以外的其他根莖作為外植體進行愈傷組織誘導，但最終都未獲得愈傷組織，這也與延齡草（Trillium tschonoskii Maxim.）不同部位根莖誘導愈傷組織的情況相似［１５］；因此，華重樓植物頂芽后的第一節根莖細胞保持有較強的潛在分裂能力，細胞經誘導培養后較易脫分化產生愈傷組織。

薯蕷皂苷作為華重樓植物中的重要有效成分，是屬于植物的次生代謝產物。經多次繼代培養的華重樓愈傷組織，是可以在產生大量初生代謝產物的基礎上，進一步產生薯蕷皂苷次生代謝物；因此，在重樓植物以后的組織培養研究過程中，可有效地通過改變培養基中各成分的種類、比例以及積極開展前體飼喂技術和利用發根農桿菌的遺傳轉化技術，最終實現利用生物技術生產重樓植物有效成分薯蕷皂苷的目的。

本研究研究了華重樓各部位外植體誘導產生愈傷組織的情況，篩選出了經預處理后的根莖是產生愈傷組織的最佳外植體，并成功地建立了華重樓愈傷組織增殖培養體系，為開展華重樓組培苗的生產和篩選出次生代謝產物含量高的細胞株進行擴大培養奠定了工作基礎。

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［１５］ 胡天印，錢麗華，劉漢卿．瀕危植物延齡草愈傷組織誘導研究［Ｊ］．浙江師范大學學報（自然科學版），２００６，２９（３）：３２６－３２９．