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低碘環境下氟中毒子代大鼠甲狀腺的病理學觀察

2014-08-08 18:40:16李沖婁政馳陳玲麗孔令蕓孫相和
湖北農業科學 2014年8期

李沖+婁政馳+陳玲麗+孔令蕓+孫相和+黃靜+郭東光+寧紅梅+王選年+葛亞明+

摘要:研究高氟與低碘條件下對子代大鼠甲狀腺的影響情況。健康Wistar大鼠(雌∶雄=3∶1)32只隨機分為4組。對照組飼喂大鼠標準飼料,飲用去離子水;高氟組飼喂大鼠標準飼料,飲100mg/L氟化鈉(NaF)去離子水;低碘組飼喂低碘飼料,飲用去離子水;高氟低碘組飼喂低碘飼料,飲100mg/L氟化鈉(NaF)去離子水。模型建立后,生產子代,分別取10、20、30日齡子代大鼠甲狀腺稱重并進行HE染色。結果表明,與對照組相比,3個試驗組的甲狀腺出現了不同程度的損傷,但試驗組間甲狀腺重與體重比值差異不顯著。高氟組甲狀腺濾泡不完整,且含有細胞碎片;低碘組甲狀腺濾泡大小不等,上皮細胞有的呈高柱狀;而高氟低碘組的甲狀腺濾泡除具有低碘組的特點外,還伴有局灶性細胞壞死。表明碘缺乏情況下氟中毒對大鼠甲狀腺的損害更大。

關鍵詞:高氟低碘;子代大鼠;甲狀腺;HE染色

中圖分類號:R599.9文獻標識碼:A文章編號:0439-8114(2014)08-1845-03

Thyroid Histopathology in Offspring of Fluorosis Rat under Low Iodine

LI Chong1,LOU Zheng-chi2,CHEN Ling-li1,KONG Ling-yun1,SUN Xiang-he1,HUANG Jing1,

GUO Dong-guang1, NING Hong-mei1,WANG Xuan-nian1,3,GE Ya-ming1

(1. Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453003, Henan,China; 2. Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453003,Henan,China; 3.Bio-technology Center, Xinxiang University, Xinxiang 453003,Henan,China)

Abstract:The effects of high-fluoride and low-iodine on the thyroid of offspring rats were studied. Thirty-two health Wistar rats were randomly divided into four groups (female∶male=3∶1) and treated with water, high-fluoride(100mg NaF/L), low-iodine(0.085 8 μg/g) or both high-fluoride (100 mg/L NaF)and low-iodine (0.085 8 μg/g) for 3 months, respectively. The offspring rats were treated as same. The thyroid gland in 10-day, 20-day and 30-day old offspring rats were taken and stained by HE. The results showed that compared with the control, the thyroid glands in all three treated groups appeared different damage, but the mean values of thyroid weight in the experimental groups were not significantly different. The thyroid follicles in high fluoride group were not complete and contained cellular debris. The thyroid follicles in low iodine group had different sizes and some epithelial cells had high columnar. The thyroid follicles in high fluoride and low iodine group showed focal necrosis besides the characteristics in low iodine group. It is indicated that damage of thyroid gland caused from Fluorosis were much more serious under iodine deficiency.

Key words: high fluoride and low iodine; offspring rats; thyroid; HE staining

氟是人畜必需的微量元素之一,適量的氟可以促進生長發育和繁殖,但當氟含量超過機體所需時,就會引起氟中毒,造成機體多系統的損傷[1-3]。研究表明,氟中毒時有過量的氟在甲狀腺聚積,從而發揮其細胞毒害作用,不僅損傷濾泡上皮細胞甚至造成細胞壞死,而且還影響甲狀腺的功能,導致甲狀腺對碘的攝取、吸收、合成和分泌均降低,同時對促甲狀腺激素(TSH)刺激的反應性也降低[4,5]。當機體內缺碘,甲狀腺將出現代償性增生腫大,以維持甲狀腺的功能。氟中毒和碘缺乏病分布廣泛,在中國出現兩者交叉流行的現象[6,7]。關于兩者的相互作用及其對甲狀腺的損傷機制研究仍不甚清楚。

本試驗模擬自然高氟低碘環境,對低碘環境下氟中毒子代大鼠甲狀腺進行病理學觀察,旨在研究高氟與低碘對甲狀腺有無協同損害作用,為防治氟中毒提供理論依據。

1材料與方法

1.1試驗動物及飼料

選擇32只體重為50 g左右的健康Wistar大鼠。低碘飼料是從低碘地區采購的小麥、玉米、大豆為原料所制成的大鼠飼料。采用硫氰酸鐵-亞硝酸催化動力學法和氟離子電極法測定飼料中的氟碘含量,結果氟含量為26.51 mg/kg,碘含量為0.085 8 μg/g;正常飼料氟含量為25.57 mg/kg,碘含量為0.3543 μg/g。

1.2主要試劑及儀器

氟化鈉(NaF,國產分析純),生理鹽水,20%烏拉坦溶液,多聚甲醛,氨水,乙醇,二甲苯,石蠟,蘇木精染色液,伊紅染色液。

HH-4型數顯恒溫水浴鍋(金壇市杰瑞爾電器有限公司),YD-6D型智能生物組織包埋機(浙江省金華市益迪醫療設備廠),RM2235型石蠟切片機(德國Leica公司),YD-B型智能生物組織烤片機(浙江省金華市益迪醫療設備廠),DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司),DS-Fi2型熒光顯微鏡(NIKON公司),BS214D型精密電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司)。

1.3試驗方法

1.3.1動物模型的建立健康Wistar大鼠32只,隨機分為4組(每組6只雌鼠,2只雄鼠):對照組、高氟組、低碘組和高氟低碘組。飼喂3個月后,收集大鼠尿液,測碘含量見表1。

1.3.2子代大鼠的產生動物模型建立后,將雌雄大鼠合籠過夜,次日檢查陰道栓,確定其是否懷孕。將懷孕母鼠產出子代大鼠的當天記為第0天,仔鼠飼喂方法同母鼠飼喂。

1.3.3甲狀腺組織HE染色分別在子代大鼠10、20、30日齡時,各組隨機取出6只,20%烏拉坦溶液腹腔注射麻醉,生理鹽水心臟灌流,甲醛固定至動物尸體僵硬為止。立即采集甲狀腺稱重后投入多聚甲醛中固定24 h,進行HE染色,中性樹膠封固后于顯微鏡下觀察。

1.3.4試驗數據的統計分析采用SAS統計軟件進行數據分析。

2結果與分析

2.1不同處理對子代大鼠甲狀腺重量的影響

由表2可知,與對照組相比,20、30日齡低碘組子代大鼠甲狀腺重與體重比值升高,在20日齡時差異顯著(P<0.05);10日齡高氟組大鼠甲狀腺與體重比值降低,隨后在20日齡和30日齡時比值升高;高氟低碘組的變化趨勢和高氟組一致。

2.2子代大鼠甲狀腺的病理學變化

對照組大鼠甲狀腺濾泡完整,濾泡腔內充滿膠質,濾泡上皮細胞呈立方狀,排列基本整齊(圖1-1、圖1-5、圖1-9);高氟組大鼠甲狀腺存在不完整的濾泡,其內含有脫落的上皮細胞以及變性壞死的上皮細胞碎片(圖1-2、圖1-6、圖1-10);低碘組大鼠甲狀腺組織濾泡大小不等,濾泡上皮細胞呈不規則高柱狀,間或有增生形成的突起突向濾泡腔(圖1-3、圖1-7、圖1-11);高氟低碘組大鼠甲狀腺組織濾泡大小不等,濾泡上皮細胞呈不規則高柱狀,間或有增生形成的突起突向濾泡腔,并且有局灶性細胞傷害(圖1-4、圖1-8、圖1-12)。

3討論

氟和碘常以化合物或絡合物的形式存在,溶于水后以離子態存在,這便決定了它們有共同的分布。氟中毒和碘缺乏在部分地區出現了雙重危害,對甲狀腺的形態功能有一定的協同作用[7,8]。有資料報道甲狀腺對氟較為敏感,過量的氟會在甲狀腺聚積[9]。關于氟與甲狀腺關系的觀點主要有:①氟對甲狀腺的結構和功能沒有影響;②氟只在低碘環境下才對甲狀腺的結構和功能有影響;③單純性氟中毒可直接影響甲狀腺的結構和功能[10,11];④氟中毒在低碘、適量碘或過量碘情況下均能直接或間接地影響甲狀腺的形態功能[12]。本試驗也支持第④種觀點。

據貴州省碘缺乏地區的調查和監測顯示,部分地區出現患甲狀腺腫率高、鹽碘高和尿碘高“三高”現象[13]。李宏彬等[14]的研究顯示貴州省的甲狀腺腫大率高是由多種因素引起的,即使在食鹽中補碘,但由于氟的影響,仍然出現了“三高”現象,表明氟與碘之間有一定的交互作用,對甲狀腺的結構功能有影響。

本試驗在高氟低碘條件下觀察子代大鼠甲狀腺的形態結構。結果表明,試驗組間甲狀腺重與體重比值差異不顯著。氟中毒對甲狀腺的形態功能有損害作用;單純性碘缺乏使甲狀腺代償性增大;而低碘環境下,氟中毒對甲狀腺的結構與功能損傷更大,這說明碘缺乏與氟中毒對甲狀腺結構和功能的損害具有協同作用。

參考文獻:

[1] 李廣生,井玲,徐輝.地方性氟中毒發病機制的研究進展[J].中華病理學雜志,2005,34(10):632-634.

[2] 朱緋,周良生,李術.氟中毒致貧血的研究進展[J].東北農業大學學報,2009,40(1):133-137.

[3] ZHOU Y J,ZHANG H L,HE J L,et al.Effects of sodium fluoride on reproductive function in female rats[J].Food and Chemical Toxicology,2013,56(4):297-303.

[4] OLIVIER B,LAURA A M,LUZ MARIA D R.Molecular mechanisms of fluoride toxicity[J].Chemico-Biological Interactions,2010,188(2):319-333.

[5] BANJI D,BANJI J F,GOURI P N,ANNAMALAI A R.Investigation on the role of spirulina platensis in ameliorating behavioural changes, thyroid dysfunction and oxidative stress in offspring of pregnant rats exposed to fluoride[J]. Food Chemistry,2013,140(1-2):321-331.

[6] SUSHEELA A K,BHATNAGAR M,VIG K,et al. Excess fluoride irrgestion and thyroid hormone ederang ements in children living in Delhi India[J].Fluoride,2005,38(2):98-108.

[7] 洪富貴,曹衍祥,楊冬,等.氟在不同環境中對兒童智力發育影響的研究[J].中國初級衛生保健,2001,15(3):56-57.

[8] 葛亞明,寧紅梅,安志興,等.氟中毒和碘缺乏病并發地區分布及流行病學概況[J].動物醫學進展,2009,30(10):104-107.

[9] 劉國艷,柴春彥,康世良.氟對雞甲狀腺組織超微結構的影響[J].中國獸醫學報,2002,22(5):512-514.

[10] 于燕妮,官志忠,劉家騮.慢性氟中毒對甲狀腺的影響[J].中華醫學雜志,1985,65(12):747-749.

[11] 官志忠,莊宗杰,楊沛施,等.缺碘和氟中毒對大鼠甲狀腺的協同作用[J].中國病理生理雜志,1989,5(3):158-162.

[12] 趙文元,朱惠民,高優真,等.碘氟在試驗性甲狀腺腫和氟中毒發病中的聯合作用[J].中國地方病防治雜志,1992,7(1):16-18.

[13] 李曉松,王述全,馬啟玲,等.貴州省碘缺乏病不同病區病情現狀對比分析[J].中國地方病學雜志,2001,20(4):296-297.

[14] 李宏彬,申旭波,許潔,等.氟、鈣與碘聯合染毒對大鼠甲狀腺系數和形態結構的交互作用[J].環境與健康雜志,2011,28(8):674-676.

1.3.2子代大鼠的產生動物模型建立后,將雌雄大鼠合籠過夜,次日檢查陰道栓,確定其是否懷孕。將懷孕母鼠產出子代大鼠的當天記為第0天,仔鼠飼喂方法同母鼠飼喂。

1.3.3甲狀腺組織HE染色分別在子代大鼠10、20、30日齡時,各組隨機取出6只,20%烏拉坦溶液腹腔注射麻醉,生理鹽水心臟灌流,甲醛固定至動物尸體僵硬為止。立即采集甲狀腺稱重后投入多聚甲醛中固定24 h,進行HE染色,中性樹膠封固后于顯微鏡下觀察。

1.3.4試驗數據的統計分析采用SAS統計軟件進行數據分析。

2結果與分析

2.1不同處理對子代大鼠甲狀腺重量的影響

由表2可知,與對照組相比,20、30日齡低碘組子代大鼠甲狀腺重與體重比值升高,在20日齡時差異顯著(P<0.05);10日齡高氟組大鼠甲狀腺與體重比值降低,隨后在20日齡和30日齡時比值升高;高氟低碘組的變化趨勢和高氟組一致。

2.2子代大鼠甲狀腺的病理學變化

對照組大鼠甲狀腺濾泡完整,濾泡腔內充滿膠質,濾泡上皮細胞呈立方狀,排列基本整齊(圖1-1、圖1-5、圖1-9);高氟組大鼠甲狀腺存在不完整的濾泡,其內含有脫落的上皮細胞以及變性壞死的上皮細胞碎片(圖1-2、圖1-6、圖1-10);低碘組大鼠甲狀腺組織濾泡大小不等,濾泡上皮細胞呈不規則高柱狀,間或有增生形成的突起突向濾泡腔(圖1-3、圖1-7、圖1-11);高氟低碘組大鼠甲狀腺組織濾泡大小不等,濾泡上皮細胞呈不規則高柱狀,間或有增生形成的突起突向濾泡腔,并且有局灶性細胞傷害(圖1-4、圖1-8、圖1-12)。

3討論

氟和碘常以化合物或絡合物的形式存在,溶于水后以離子態存在,這便決定了它們有共同的分布。氟中毒和碘缺乏在部分地區出現了雙重危害,對甲狀腺的形態功能有一定的協同作用[7,8]。有資料報道甲狀腺對氟較為敏感,過量的氟會在甲狀腺聚積[9]。關于氟與甲狀腺關系的觀點主要有:①氟對甲狀腺的結構和功能沒有影響;②氟只在低碘環境下才對甲狀腺的結構和功能有影響;③單純性氟中毒可直接影響甲狀腺的結構和功能[10,11];④氟中毒在低碘、適量碘或過量碘情況下均能直接或間接地影響甲狀腺的形態功能[12]。本試驗也支持第④種觀點。

據貴州省碘缺乏地區的調查和監測顯示,部分地區出現患甲狀腺腫率高、鹽碘高和尿碘高“三高”現象[13]。李宏彬等[14]的研究顯示貴州省的甲狀腺腫大率高是由多種因素引起的,即使在食鹽中補碘,但由于氟的影響,仍然出現了“三高”現象,表明氟與碘之間有一定的交互作用,對甲狀腺的結構功能有影響。

本試驗在高氟低碘條件下觀察子代大鼠甲狀腺的形態結構。結果表明,試驗組間甲狀腺重與體重比值差異不顯著。氟中毒對甲狀腺的形態功能有損害作用;單純性碘缺乏使甲狀腺代償性增大;而低碘環境下,氟中毒對甲狀腺的結構與功能損傷更大,這說明碘缺乏與氟中毒對甲狀腺結構和功能的損害具有協同作用。

參考文獻:

[1] 李廣生,井玲,徐輝.地方性氟中毒發病機制的研究進展[J].中華病理學雜志,2005,34(10):632-634.

[2] 朱緋,周良生,李術.氟中毒致貧血的研究進展[J].東北農業大學學報,2009,40(1):133-137.

[3] ZHOU Y J,ZHANG H L,HE J L,et al.Effects of sodium fluoride on reproductive function in female rats[J].Food and Chemical Toxicology,2013,56(4):297-303.

[4] OLIVIER B,LAURA A M,LUZ MARIA D R.Molecular mechanisms of fluoride toxicity[J].Chemico-Biological Interactions,2010,188(2):319-333.

[5] BANJI D,BANJI J F,GOURI P N,ANNAMALAI A R.Investigation on the role of spirulina platensis in ameliorating behavioural changes, thyroid dysfunction and oxidative stress in offspring of pregnant rats exposed to fluoride[J]. Food Chemistry,2013,140(1-2):321-331.

[6] SUSHEELA A K,BHATNAGAR M,VIG K,et al. Excess fluoride irrgestion and thyroid hormone ederang ements in children living in Delhi India[J].Fluoride,2005,38(2):98-108.

[7] 洪富貴,曹衍祥,楊冬,等.氟在不同環境中對兒童智力發育影響的研究[J].中國初級衛生保健,2001,15(3):56-57.

[8] 葛亞明,寧紅梅,安志興,等.氟中毒和碘缺乏病并發地區分布及流行病學概況[J].動物醫學進展,2009,30(10):104-107.

[9] 劉國艷,柴春彥,康世良.氟對雞甲狀腺組織超微結構的影響[J].中國獸醫學報,2002,22(5):512-514.

[10] 于燕妮,官志忠,劉家騮.慢性氟中毒對甲狀腺的影響[J].中華醫學雜志,1985,65(12):747-749.

[11] 官志忠,莊宗杰,楊沛施,等.缺碘和氟中毒對大鼠甲狀腺的協同作用[J].中國病理生理雜志,1989,5(3):158-162.

[12] 趙文元,朱惠民,高優真,等.碘氟在試驗性甲狀腺腫和氟中毒發病中的聯合作用[J].中國地方病防治雜志,1992,7(1):16-18.

[13] 李曉松,王述全,馬啟玲,等.貴州省碘缺乏病不同病區病情現狀對比分析[J].中國地方病學雜志,2001,20(4):296-297.

[14] 李宏彬,申旭波,許潔,等.氟、鈣與碘聯合染毒對大鼠甲狀腺系數和形態結構的交互作用[J].環境與健康雜志,2011,28(8):674-676.

1.3.2子代大鼠的產生動物模型建立后,將雌雄大鼠合籠過夜,次日檢查陰道栓,確定其是否懷孕。將懷孕母鼠產出子代大鼠的當天記為第0天,仔鼠飼喂方法同母鼠飼喂。

1.3.3甲狀腺組織HE染色分別在子代大鼠10、20、30日齡時,各組隨機取出6只,20%烏拉坦溶液腹腔注射麻醉,生理鹽水心臟灌流,甲醛固定至動物尸體僵硬為止。立即采集甲狀腺稱重后投入多聚甲醛中固定24 h,進行HE染色,中性樹膠封固后于顯微鏡下觀察。

1.3.4試驗數據的統計分析采用SAS統計軟件進行數據分析。

2結果與分析

2.1不同處理對子代大鼠甲狀腺重量的影響

由表2可知,與對照組相比,20、30日齡低碘組子代大鼠甲狀腺重與體重比值升高,在20日齡時差異顯著(P<0.05);10日齡高氟組大鼠甲狀腺與體重比值降低,隨后在20日齡和30日齡時比值升高;高氟低碘組的變化趨勢和高氟組一致。

2.2子代大鼠甲狀腺的病理學變化

對照組大鼠甲狀腺濾泡完整,濾泡腔內充滿膠質,濾泡上皮細胞呈立方狀,排列基本整齊(圖1-1、圖1-5、圖1-9);高氟組大鼠甲狀腺存在不完整的濾泡,其內含有脫落的上皮細胞以及變性壞死的上皮細胞碎片(圖1-2、圖1-6、圖1-10);低碘組大鼠甲狀腺組織濾泡大小不等,濾泡上皮細胞呈不規則高柱狀,間或有增生形成的突起突向濾泡腔(圖1-3、圖1-7、圖1-11);高氟低碘組大鼠甲狀腺組織濾泡大小不等,濾泡上皮細胞呈不規則高柱狀,間或有增生形成的突起突向濾泡腔,并且有局灶性細胞傷害(圖1-4、圖1-8、圖1-12)。

3討論

氟和碘常以化合物或絡合物的形式存在,溶于水后以離子態存在,這便決定了它們有共同的分布。氟中毒和碘缺乏在部分地區出現了雙重危害,對甲狀腺的形態功能有一定的協同作用[7,8]。有資料報道甲狀腺對氟較為敏感,過量的氟會在甲狀腺聚積[9]。關于氟與甲狀腺關系的觀點主要有:①氟對甲狀腺的結構和功能沒有影響;②氟只在低碘環境下才對甲狀腺的結構和功能有影響;③單純性氟中毒可直接影響甲狀腺的結構和功能[10,11];④氟中毒在低碘、適量碘或過量碘情況下均能直接或間接地影響甲狀腺的形態功能[12]。本試驗也支持第④種觀點。

據貴州省碘缺乏地區的調查和監測顯示,部分地區出現患甲狀腺腫率高、鹽碘高和尿碘高“三高”現象[13]。李宏彬等[14]的研究顯示貴州省的甲狀腺腫大率高是由多種因素引起的,即使在食鹽中補碘,但由于氟的影響,仍然出現了“三高”現象,表明氟與碘之間有一定的交互作用,對甲狀腺的結構功能有影響。

本試驗在高氟低碘條件下觀察子代大鼠甲狀腺的形態結構。結果表明,試驗組間甲狀腺重與體重比值差異不顯著。氟中毒對甲狀腺的形態功能有損害作用;單純性碘缺乏使甲狀腺代償性增大;而低碘環境下,氟中毒對甲狀腺的結構與功能損傷更大,這說明碘缺乏與氟中毒對甲狀腺結構和功能的損害具有協同作用。

參考文獻:

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[3] ZHOU Y J,ZHANG H L,HE J L,et al.Effects of sodium fluoride on reproductive function in female rats[J].Food and Chemical Toxicology,2013,56(4):297-303.

[4] OLIVIER B,LAURA A M,LUZ MARIA D R.Molecular mechanisms of fluoride toxicity[J].Chemico-Biological Interactions,2010,188(2):319-333.

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[7] 洪富貴,曹衍祥,楊冬,等.氟在不同環境中對兒童智力發育影響的研究[J].中國初級衛生保健,2001,15(3):56-57.

[8] 葛亞明,寧紅梅,安志興,等.氟中毒和碘缺乏病并發地區分布及流行病學概況[J].動物醫學進展,2009,30(10):104-107.

[9] 劉國艷,柴春彥,康世良.氟對雞甲狀腺組織超微結構的影響[J].中國獸醫學報,2002,22(5):512-514.

[10] 于燕妮,官志忠,劉家騮.慢性氟中毒對甲狀腺的影響[J].中華醫學雜志,1985,65(12):747-749.

[11] 官志忠,莊宗杰,楊沛施,等.缺碘和氟中毒對大鼠甲狀腺的協同作用[J].中國病理生理雜志,1989,5(3):158-162.

[12] 趙文元,朱惠民,高優真,等.碘氟在試驗性甲狀腺腫和氟中毒發病中的聯合作用[J].中國地方病防治雜志,1992,7(1):16-18.

[13] 李曉松,王述全,馬啟玲,等.貴州省碘缺乏病不同病區病情現狀對比分析[J].中國地方病學雜志,2001,20(4):296-297.

[14] 李宏彬,申旭波,許潔,等.氟、鈣與碘聯合染毒對大鼠甲狀腺系數和形態結構的交互作用[J].環境與健康雜志,2011,28(8):674-676.

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