非水滴定法測定鹽酸替羅非班的含量

王曉玲，聶忠莉，楊彩霞，唐雪楓，陳 果，劉 瑋

(1.峨眉山通惠制藥有限公司，四川 峨眉山 614200;2.成都大學(xué) 生物產(chǎn)業(yè)學(xué)院，四川 成都 610106;3.綿陽市 食品藥品檢驗所，四川 綿陽 621000)

0 引 言

鹽酸替羅非班(Tirofiban Hydrochloride)，化學(xué)名為N-正丁基磺酰基-O-［4-(4-哌啶基)丁基］-L-酪氨酸鹽酸鹽—水合物，是一種非肽類血小板表面糖蛋白GPⅡb/Ⅲa 受體拮抗劑［1］，臨床上主要用于不穩(wěn)定性心絞痛與非Q 波心肌梗死等病癥的冶療［2］.鹽酸替羅非班試行標(biāo)準(zhǔn)(YBH05622009)采用的溶劑中含有醋酸汞［3］.醋酸汞為有機(jī)汞鹽，毒性大，比金屬汞和無機(jī)汞化合物更易導(dǎo)致中毒事件發(fā)生，對環(huán)境和生態(tài)的影響巨大.本研究以割除汞鹽為目的，建立用于鹽酸替羅非班含量的測定方法.

1 儀器、試藥與試劑

1.1 儀 器

實驗所用儀器包括:WDDY－2008 型微機(jī)自動電位滴定儀(蘇州江東精密儀器有限公司);JB－06型磁力攪拌器(上海雷磁儀器廠).

1.2 試藥與試劑

實驗所用試藥與試劑包括:鹽酸替羅非班工作對照品(批號，120601)、鹽酸替羅非班(批號，130101、130201、130301)，由成都新恒創(chuàng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn);冰醋酸、醋酐、結(jié)晶紫均為分析純;高氯酸滴定液(0.10 mol/L，25 ℃).

2 方法與結(jié)果

2.1 滴定方法

取本品約0.3 g，精密稱定，加冰醋酸10 mL、醋酸酐30 mL 使其溶解，加結(jié)晶紫指示劑1 滴，用高氯酸滴定液(0.1 mol/L)滴定，至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正［4－5］.每1 mL 高氯酸滴定液(0.1 mol/L)相當(dāng)于47.71 mg 的C22H36N2O5S·HCl.

2.2 溶劑選擇

因本品含有結(jié)晶水，單用冰醋酸作溶劑，可能會因為少量水的存在嚴(yán)重影響滴定突躍，需要加入醋酸酐中和.為此，本實驗對醋酸酐與冰醋酸的比例進(jìn)行了篩選，根據(jù)滴定情況擬定了3 個篩選條件:條件A，用冰醋酸20 mL 與醋酸酐20 mL;條件B，用冰醋酸15 mL 與醋酸酐25 mL;條件C，用冰醋酸10 mL 與醋酸酐30 mL.采用電位指示判斷終點，結(jié)果如圖1 所示.

如圖1 所示，條件A 測定含量偏高，滴定突躍不明顯，而條件B 與條件C 的測定結(jié)果與高效液相色譜法測定數(shù)據(jù)一致，但條件C 的滴定突躍更加明顯，其空白無干擾滴定曲線如圖2 所示.因此，擬將條件C 作為鹽酸替羅非班含量測定的溶劑，并進(jìn)行方法驗證.

圖2 條件C 空白滴定曲線圖

2.3 方法驗證

2.3.1 回收率.

取鹽酸替羅非班工作對照品適量(相當(dāng)于測定量的80%、100%、120%)，每個濃度樣品各3 份，按照“2.1”項下方法測定，計算9 份樣品的回收率和RSD(見表1).結(jié)果顯示，9 份樣品的平均回收率為100.18%，平均RSD 為0.2%.

表1 回收率實驗結(jié)果

2.3.2 重復(fù)性.

取鹽酸替羅非班工作對照品0.3 g，共6 份，精密稱定，按照“2.1”項下方法滴定，計算6 份樣品的含量和RSD(見表1).結(jié)果顯示，6 份樣品的平均含量為100.66%，RSD 為0.2%，表明該法重復(fù)性良好.

2.3.3 中間精密度.

在實驗中由另一分析人員，按重復(fù)性項下實驗內(nèi)容同法操作.結(jié)果顯示，6 份樣品的平均含量為100.23%，RSD 為0.19%，表明該法中間精密度良好.

2.3.4 耐用性.

在實驗中，適當(dāng)調(diào)整溶劑比例(±3 mL)及實驗室溫度(±5 ℃)，結(jié)果顯示，所測樣品含量無明顯變化，表明該法具有較好耐用性.

2.4 含量測定

取3 批鹽酸替羅非班原料藥(批號:130101、130201、130301)分別采用非水滴定法與高效液相色譜法測定其含量，結(jié)果如表2 所示.結(jié)果顯示，2 種方法對鹽酸替羅非班含量測定無明顯差別，此表明，本法完全可用于鹽酸替羅非班含量的測定.

表2 鹽酸替羅非班含量測定結(jié)果

3 討 論

醋酸汞的使用原理是，在高氯酸非水滴定中，用醋酸溶液使化合物堿性增強(qiáng).而鹽酸在醋酸中酸性太強(qiáng)，對高氯酸滴定產(chǎn)生干擾，故生物堿的氫鹵酸鹽不可直接滴定，需加入適量醋酸汞后，使其生成在醋酸溶劑中難解離的鹵化汞，再進(jìn)行滴定.選擇醋酸酐取代醋酸汞主要是因為在pKb 較大時，采用醋酸酐取代醋酸作為溶劑可增強(qiáng)化合物的堿性，利于高氯酸滴定.此外，加入醋酸酐可中和醋酸以及鹽酸替羅非班中的水分.

［1］張煜，羊鎮(zhèn)宇.GPⅡb/Ⅲa 受體拮抗劑—替羅非班在急性冠脈綜合征中的應(yīng)用與進(jìn)展［J］.臨床醫(yī)學(xué)工程，2009，16(10):107－108.

［2］楊曉燕，龔培力，王琳，等.替羅非班治療急性冠狀動脈綜合征的療效和安全性評價［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26(3):275－278.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［4］中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［5］馬廣慈.藥物分析方法與應(yīng)用［M］.北京:科學(xué)出版社，2000.