柱前衍生化法測(cè)定麗江產(chǎn)瑪咖中18種氨基酸含量

高萌+李明仙+李宇赤+王婉麗+李光

[摘要]目的 測(cè)定麗江產(chǎn)瑪咖中必需氨基酸的含量。方法 以2，4-二硝基氟苯為衍生試劑，與麗江產(chǎn)瑪咖中18種氨基酸柱前衍生，用Waters 600高效液相色譜儀，菲羅門公司Symmetry C18色譜柱，以含1% N，N-二甲基甲酰胺的0.05mol/L醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH=6.4）及乙腈∶水（1∶1）進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，柱溫為35℃，進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果 18種氨基酸的線性回歸方程r值為0.9995～1.0000（n=5），平均回收率為99.54%～101.84%，RSD值為0.38%～1.82%，n=6。結(jié)論 本法快速、簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確。

[關(guān)鍵詞] 柱前衍生化；瑪咖；氨基酸；2，4-二硝基氟苯；高效液相色譜法

[中圖分類號(hào)] Q517 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）06-33-05

Maca（lepidium meyenii walp.，一般音譯為“瑪咖”）是十字花科（cruciferae）獨(dú)行菜屬（lepidium）一年生或兩年生的草本植物，原產(chǎn)于秘魯海拔3500～4000m左右的胡寧（Junin）和帕斯克（Pasco）狹長(zhǎng)地帶[1]。瑪咖在南美的食用歷史已經(jīng)有5800多年，傳統(tǒng)上作為食物和草藥，可改善性功能[2]，提高生育力，抗疲勞[3]，抗腫瘤和用于治療抑郁癥、哮喘癥和女性更年期綜合征等。瑪咖中含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、牛磺酸、礦物質(zhì)鋅[4]等與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的化學(xué)成分，而且傳統(tǒng)上瑪咖就具有顯著的增強(qiáng)精力的“適應(yīng)原樣作用”[5]。目前，以瑪咖為原料的保健食品、食品日益增多[6]，但鮮有相關(guān)質(zhì)量控制方法方面報(bào)道，氨基酸作為其保健主要成分，建立

成熟的氨基酸測(cè)定方法，可為瑪咖鑒別、質(zhì)量控制、商品規(guī)格劃分提供參考。

大多數(shù)氨基酸無(wú)紫外吸收和熒光發(fā)射特征，為提高分析檢測(cè)靈敏度和分離選擇特性，通常將氨基酸進(jìn)行衍生化。目前已經(jīng)報(bào)道的用于氨基酸柱前衍生的衍生試劑有多種[7-12]，不同的衍生劑都有各自的不足，而2，4-二硝基氟苯（DNFB）衍生化方法因其試劑價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)便，所得產(chǎn)物相對(duì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)[13-14]采用該方法柱前衍生化測(cè)定麗江瑪咖中總氨基酸類成分，同樣考察水解因素及衍生化因素對(duì)結(jié)果的影響，有望為建立瑪咖藥材質(zhì)量控制方法提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

瑪咖購(gòu)自麗江產(chǎn)地；醋酸（分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；2，4-二硝基氟苯（分析純，成都格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司）；醋酸鈉（分析純，成都格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司）；碳酸鈉（分析純，成都格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司）；乙腈（分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；氫氧化鈉（分析純，成都格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司）；色譜純乙腈（美國(guó) Fisher公司）；N，N-二甲基甲酰胺（分析純，成都格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司）；苯酚（分析純，成都格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司）；磷酸二氫鉀（分析純，成都格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司）；pH為7.0的磷酸鹽緩沖液（0.1mol/L氫氧化鈉溶液29.1mL溶解0.68g磷酸二氫鉀，蒸餾水定容至100mL）；門冬氨酸等氨基酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為140624-200805）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

Waters 高效液相色譜儀，Empower色譜工作站（美國(guó)沃特世公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）；分析天平（賽多利斯公司）；電子天平（賽多利斯公司）；TGL16M湘智離心機(jī)（安徽誠(chéng)信啟動(dòng)設(shè)備有限公司）；酒精噴燈（上饒市教儀廠）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex Symmetry C18柱（5μm，4.6×250mm）。流動(dòng)相：A泵：含1%N，N-二甲基甲酰胺的0.05mol/L醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH=6.4）。B泵：乙腈∶水（1∶1）。檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm；流速：1mL/min；柱溫：30℃。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 分別精密稱取氨基酸對(duì)照品適量，加入蒸餾水定容至50mL，精密量取1mL置安瓿瓶中，加入0.5mol/L碳酸鈉溶液混勻，再加入1% DNFB乙腈溶液1mL，震蕩，密封于50℃水浴避光反應(yīng)90min，反應(yīng)結(jié)束后，加入磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為對(duì)照品溶液。

1.3.3 樣品處理 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置于安瓿瓶中，加入10mL含3%苯酚的6mol/L鹽酸溶液，密封后于105℃水解22h，反應(yīng)完成后后80℃水浴蒸干，加入少量蒸餾水超聲溶解后定容至10mL。取1mL定容后溶液，按“1.3.2項(xiàng)下”標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方法進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后放置至室溫，過(guò)0.45μm微孔濾膜，備用。

1.3.4 衍生化條件的優(yōu)化

1.3.4.1 衍生化試劑用量考察 取1.3.3項(xiàng)中定容后溶液1mL，分別加入衍生化試劑各1、2、3、4、5mL，與60℃衍生化60min，過(guò)濾后進(jìn)樣。

1.3.4.2 衍生化時(shí)間考察 取1.3.3項(xiàng)中定容后溶液1mL，加入衍生化試劑各2mL，與60℃水浴中分別加熱30、60、90、120min，過(guò)濾后進(jìn)樣。

1.3.4.3 衍生化溫度考察 取1.3.3項(xiàng)中定容后溶液1mL，加入衍生化試劑各2mL，分別在40、50、60、70、80℃水浴中加熱60min，過(guò)濾后進(jìn)樣。

1.3.5 水解條件的優(yōu)化

1.3.5.1 鹽酸用量考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置于安瓿瓶中，分別加入5、10、15mL含3%苯酚的6mol/L鹽酸溶液，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理最終定容至10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃避光反應(yīng)60min，濾液采用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。endprint

1.3.5.2 水解時(shí)間考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置于安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理水解改變?yōu)?0、22、24h，最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

1.3.5.3 水解溫度考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理水解溫度改變?yōu)?05、100、110℃水解22h，最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

1.3.5.4 苯酚用量考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置于安瓿瓶中，加入10mL分別含苯酚0%、1%、3%、5%的6mol/L鹽酸溶液，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

2 結(jié)果

2.1 衍生化條件優(yōu)化

以所得色譜圖中除衍生化試劑峰外色譜峰峰面積為考察指標(biāo)，比較不同衍生化條件下對(duì)峰面積的影響，結(jié)果如圖1～3所示。

2.2 水解條件優(yōu)化

以所得色譜圖中除衍生化試劑峰外色譜峰峰面積為考察指標(biāo)，將1.3.4項(xiàng)下樣品進(jìn)樣，比較不同衍生化條件下對(duì)峰面積的影響，結(jié)果如圖4～7所示。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取水解后定容樣品溶液1mL，按供試品制備方法進(jìn)行制備樣品，重復(fù)進(jìn)行5次，分別測(cè)定樣品中各氨基酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)得RSD范圍為0.908%～1.876%，RSD<2%，說(shuō)明試驗(yàn)重現(xiàn)性結(jié)果良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取“1.3.3項(xiàng)”下供試品制備的樣品，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算樣品中各氨基酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)得RSD范圍為0.568%～1.962%，說(shuō)明儀器精密度較好。

2.5 線性關(guān)系測(cè)定

稱取各氨基酸對(duì)照品適量，蒸餾水溶解后定容至100mL，分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液。設(shè)置進(jìn)樣量為2?L注入液相色譜儀，選取濃度與峰面積為橫縱坐標(biāo)，計(jì)算線性方程，結(jié)果見(jiàn)表2。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各氨基酸對(duì)照品進(jìn)樣濃度在上述范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.6 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取水解后定容樣品溶液1mL按“1.3.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液。于0、2、4、6、8h進(jìn)樣，測(cè)定5次。除組氨酸RSD為4.825%外，其他氨基酸基本穩(wěn)定。建議樣品溶液制備完后，立即測(cè)定。如果保存一段時(shí)間測(cè)定，應(yīng)放到?jīng)霭堤帲朔椒ㄖ苽涔┰嚻啡芤嚎梢栽?h內(nèi)完成，對(duì)樣品穩(wěn)定性要求不高。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取各氨基酸對(duì)照品適量與樣品混合，按“1.3.3項(xiàng)”下供試品制備方法進(jìn)行樣品制備。進(jìn)樣后分析各氨基酸回收率。結(jié)果表明各氨基酸含量平均值在99.62%～101.13%，RSD在1.03%～1.83%，說(shuō)明各氨基酸的回收率符合要求。

2.8 樣品測(cè)定

精密稱取麗江瑪咖樣品0.50g，按照“1.3.3項(xiàng)下”樣品制備方法制備進(jìn)樣，所得結(jié)果如圖8～9及表3所示。

3 討論

瑪咖作為新資源食品已被廣泛認(rèn)知，保健食品市場(chǎng)逐漸擴(kuò)大，微量元素及氨基酸可能是其主要的保健功效成分，本文采用DNFB柱前衍生化方法對(duì)測(cè)定中各氨基酸的含量進(jìn)行測(cè)定，該方法具有反應(yīng)條件易于控制，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)氨基酸含量影響較大的衍生化因素為溫度與時(shí)間，溫度過(guò)高氨基酸含量降低，可能是由于持續(xù)高溫會(huì)破壞氨基酸結(jié)構(gòu)造成氨基酸結(jié)構(gòu)相互轉(zhuǎn)化，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)盡管反應(yīng)條件不同，得到各氨基酸間比例變化，但總氨基酸量差異不大也從側(cè)面證實(shí)了該觀點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)報(bào)道[15]在酸水解液中加入苯酚是為了保護(hù)色氨酸基團(tuán)不被破壞，最終確定加入3%含量的苯酚能夠達(dá)到很好的水解效果，并建議衍生化條件為溫度采用2倍量衍生化試劑，于50℃，反應(yīng)90min。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2013-12-11）endprint

1.3.5.2 水解時(shí)間考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置于安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理水解改變?yōu)?0、22、24h，最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

1.3.5.3 水解溫度考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理水解溫度改變?yōu)?05、100、110℃水解22h，最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

1.3.5.4 苯酚用量考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置于安瓿瓶中，加入10mL分別含苯酚0%、1%、3%、5%的6mol/L鹽酸溶液，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

2 結(jié)果

2.1 衍生化條件優(yōu)化

以所得色譜圖中除衍生化試劑峰外色譜峰峰面積為考察指標(biāo)，比較不同衍生化條件下對(duì)峰面積的影響，結(jié)果如圖1～3所示。

2.2 水解條件優(yōu)化

以所得色譜圖中除衍生化試劑峰外色譜峰峰面積為考察指標(biāo)，將1.3.4項(xiàng)下樣品進(jìn)樣，比較不同衍生化條件下對(duì)峰面積的影響，結(jié)果如圖4～7所示。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取水解后定容樣品溶液1mL，按供試品制備方法進(jìn)行制備樣品，重復(fù)進(jìn)行5次，分別測(cè)定樣品中各氨基酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)得RSD范圍為0.908%～1.876%，RSD<2%，說(shuō)明試驗(yàn)重現(xiàn)性結(jié)果良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取“1.3.3項(xiàng)”下供試品制備的樣品，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算樣品中各氨基酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)得RSD范圍為0.568%～1.962%，說(shuō)明儀器精密度較好。

2.5 線性關(guān)系測(cè)定

稱取各氨基酸對(duì)照品適量，蒸餾水溶解后定容至100mL，分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液。設(shè)置進(jìn)樣量為2?L注入液相色譜儀，選取濃度與峰面積為橫縱坐標(biāo)，計(jì)算線性方程，結(jié)果見(jiàn)表2。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各氨基酸對(duì)照品進(jìn)樣濃度在上述范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.6 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取水解后定容樣品溶液1mL按“1.3.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液。于0、2、4、6、8h進(jìn)樣，測(cè)定5次。除組氨酸RSD為4.825%外，其他氨基酸基本穩(wěn)定。建議樣品溶液制備完后，立即測(cè)定。如果保存一段時(shí)間測(cè)定，應(yīng)放到?jīng)霭堤帲朔椒ㄖ苽涔┰嚻啡芤嚎梢栽?h內(nèi)完成，對(duì)樣品穩(wěn)定性要求不高。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取各氨基酸對(duì)照品適量與樣品混合，按“1.3.3項(xiàng)”下供試品制備方法進(jìn)行樣品制備。進(jìn)樣后分析各氨基酸回收率。結(jié)果表明各氨基酸含量平均值在99.62%～101.13%，RSD在1.03%～1.83%，說(shuō)明各氨基酸的回收率符合要求。

2.8 樣品測(cè)定

精密稱取麗江瑪咖樣品0.50g，按照“1.3.3項(xiàng)下”樣品制備方法制備進(jìn)樣，所得結(jié)果如圖8～9及表3所示。

3 討論

瑪咖作為新資源食品已被廣泛認(rèn)知，保健食品市場(chǎng)逐漸擴(kuò)大，微量元素及氨基酸可能是其主要的保健功效成分，本文采用DNFB柱前衍生化方法對(duì)測(cè)定中各氨基酸的含量進(jìn)行測(cè)定，該方法具有反應(yīng)條件易于控制，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)氨基酸含量影響較大的衍生化因素為溫度與時(shí)間，溫度過(guò)高氨基酸含量降低，可能是由于持續(xù)高溫會(huì)破壞氨基酸結(jié)構(gòu)造成氨基酸結(jié)構(gòu)相互轉(zhuǎn)化，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)盡管反應(yīng)條件不同，得到各氨基酸間比例變化，但總氨基酸量差異不大也從側(cè)面證實(shí)了該觀點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)報(bào)道[15]在酸水解液中加入苯酚是為了保護(hù)色氨酸基團(tuán)不被破壞，最終確定加入3%含量的苯酚能夠達(dá)到很好的水解效果，并建議衍生化條件為溫度采用2倍量衍生化試劑，于50℃，反應(yīng)90min。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2013-12-11）endprint

1.3.5.2 水解時(shí)間考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置于安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理水解改變?yōu)?0、22、24h，最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

1.3.5.3 水解溫度考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理水解溫度改變?yōu)?05、100、110℃水解22h，最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

1.3.5.4 苯酚用量考察 精密稱取過(guò)3號(hào)篩樣品0.5000g置于安瓿瓶中，加入10mL分別含苯酚0%、1%、3%、5%的6mol/L鹽酸溶液，按“1.3.3項(xiàng)下”方法處理最終定容為10mL。各取1mL溶液加入衍生化試劑2mL，與60℃水浴中分別加熱反應(yīng)60min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，備用進(jìn)樣。

2 結(jié)果

2.1 衍生化條件優(yōu)化

以所得色譜圖中除衍生化試劑峰外色譜峰峰面積為考察指標(biāo)，比較不同衍生化條件下對(duì)峰面積的影響，結(jié)果如圖1～3所示。

2.2 水解條件優(yōu)化

以所得色譜圖中除衍生化試劑峰外色譜峰峰面積為考察指標(biāo)，將1.3.4項(xiàng)下樣品進(jìn)樣，比較不同衍生化條件下對(duì)峰面積的影響，結(jié)果如圖4～7所示。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取水解后定容樣品溶液1mL，按供試品制備方法進(jìn)行制備樣品，重復(fù)進(jìn)行5次，分別測(cè)定樣品中各氨基酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)得RSD范圍為0.908%～1.876%，RSD<2%，說(shuō)明試驗(yàn)重現(xiàn)性結(jié)果良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取“1.3.3項(xiàng)”下供試品制備的樣品，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算樣品中各氨基酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)得RSD范圍為0.568%～1.962%，說(shuō)明儀器精密度較好。

2.5 線性關(guān)系測(cè)定

稱取各氨基酸對(duì)照品適量，蒸餾水溶解后定容至100mL，分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置安瓿瓶中，按“1.3.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液。設(shè)置進(jìn)樣量為2?L注入液相色譜儀，選取濃度與峰面積為橫縱坐標(biāo)，計(jì)算線性方程，結(jié)果見(jiàn)表2。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各氨基酸對(duì)照品進(jìn)樣濃度在上述范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.6 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取水解后定容樣品溶液1mL按“1.3.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液。于0、2、4、6、8h進(jìn)樣，測(cè)定5次。除組氨酸RSD為4.825%外，其他氨基酸基本穩(wěn)定。建議樣品溶液制備完后，立即測(cè)定。如果保存一段時(shí)間測(cè)定，應(yīng)放到?jīng)霭堤帲朔椒ㄖ苽涔┰嚻啡芤嚎梢栽?h內(nèi)完成，對(duì)樣品穩(wěn)定性要求不高。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取各氨基酸對(duì)照品適量與樣品混合，按“1.3.3項(xiàng)”下供試品制備方法進(jìn)行樣品制備。進(jìn)樣后分析各氨基酸回收率。結(jié)果表明各氨基酸含量平均值在99.62%～101.13%，RSD在1.03%～1.83%，說(shuō)明各氨基酸的回收率符合要求。

2.8 樣品測(cè)定

精密稱取麗江瑪咖樣品0.50g，按照“1.3.3項(xiàng)下”樣品制備方法制備進(jìn)樣，所得結(jié)果如圖8～9及表3所示。

3 討論

瑪咖作為新資源食品已被廣泛認(rèn)知，保健食品市場(chǎng)逐漸擴(kuò)大，微量元素及氨基酸可能是其主要的保健功效成分，本文采用DNFB柱前衍生化方法對(duì)測(cè)定中各氨基酸的含量進(jìn)行測(cè)定，該方法具有反應(yīng)條件易于控制，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)氨基酸含量影響較大的衍生化因素為溫度與時(shí)間，溫度過(guò)高氨基酸含量降低，可能是由于持續(xù)高溫會(huì)破壞氨基酸結(jié)構(gòu)造成氨基酸結(jié)構(gòu)相互轉(zhuǎn)化，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)盡管反應(yīng)條件不同，得到各氨基酸間比例變化，但總氨基酸量差異不大也從側(cè)面證實(shí)了該觀點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)報(bào)道[15]在酸水解液中加入苯酚是為了保護(hù)色氨酸基團(tuán)不被破壞，最終確定加入3%含量的苯酚能夠達(dá)到很好的水解效果，并建議衍生化條件為溫度采用2倍量衍生化試劑，于50℃，反應(yīng)90min。

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