銀杏達莫注射液對急性肺損傷的實驗及分析

肖望+廖秀清+劉燕君+謝曉玲

[摘要] 目的 探討銀杏達莫注射液對急性肺損傷的保護作用。方法 健康家兔24只，采用完全隨機分為3組：對照組、模型組和實驗組，每組8只。觀察三組的MDA、SOD、肺干濕比、IL-10及TNF-a變化。結(jié)果 三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。實驗組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。三組肺干濕比比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。三組IL-10比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結(jié)論 銀杏達莫注射液對急性肺損傷具有明顯的保護作用。

[關鍵詞] 銀杏達莫注射液；急性肺損傷；保護作用

[中圖分類號] R541.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）06-27-03

急性肺損傷（ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是嚴重感染、創(chuàng)傷、休克等打擊后常見的外科危急并發(fā)癥，死亡率極高，目前仍無十分有效的治療方法和藥物[1-2]。本項目通過建立急性肺損傷動物模型，觀察銀杏達莫對組織形態(tài)學和生物學的影響，同時研究心率、呼吸、頻率、血氣分析和相關細胞因子表達的動態(tài)變化[3]，探討銀杏達莫注射液對急性肺損傷的保護作用和可能機制，以期為ALI/ARDS的臨床治療提供一個可能的新途徑，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

健康家兔24只，體重2.5～3.5kg，雌雄各半。

采用完全隨機分3組：對照組、模型組和實驗組，每組8只。動物許可證號：SYXK2006007。三組動物的體重、性別比等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 動物造模

乙醚吸入麻醉至家兔軀體變軟，四肢活動減少，家兔頭頸部后仰并以血管鉗向外輕拉家兔舌頭使口咽部充分暴露，以耳鏡快速置入家兔口腔并暴露其聲門，當聲門打開時迅速以注射軟管滴入LPS溶液（2mg/kg），豎立并左右晃動家兔身體以使藥物在兩肺內(nèi)分布均勻每天1次，連續(xù)2d。

1.3 方法

術(shù)前禁食12h，所有動物經(jīng)耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg），麻醉成功后，行頸動脈置管，連接多導生理監(jiān)測儀，連續(xù)記錄心率、呼吸頻率等變化。實驗組與模型組：耳緣靜脈緩慢推注油酸（0.1mL/kg），10min后靜脈注射生理鹽水30mL。對照組：耳緣靜脈注射生理鹽水30mL。

1.4 觀察指標

記錄各組動物在傷前和傷后1、2、3、4h的心率、呼吸頻率，并通過動脈插管抽取血標本，測定各時點血氣分析值和血清TNF-a、IL-10。4h后處死動物，取左肺下葉背段1cm×1cm×1cm大小肺組織，用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察其組織形態(tài)學變化。按Naokiis介紹的方法肺損傷進行評分：把肺損傷程度分為5分：0=無損傷，1=輕度損傷，2=中度損傷，3=重度損傷，4=極重度損傷。在左下肺相同的部位取1g大小的肺組織做出勻漿液，用硫代巴比妥酸法測定丙二醛含量和超氧化物歧化酶的活性；剩余肺組織稱重后置80℃烤箱，烘烤72h至恒重，計算肺濕/干（W/D）比。肺干濕比（W/D）=濕重/干重；肺系數(shù)=100×肺濕重/體重[4]。

1.5 統(tǒng)計學處理

應用SPSS15.0統(tǒng)計軟件，方差齊時兩兩比較采用LSD聯(lián)合SNK法；計量資料用（）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用x2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組上清液中MDA檢測及SOD活性結(jié)果比較

三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。實驗組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 三組肺干濕比比較

對照組肺干濕比為4.35±0.21，模型組為5.26±0.55，實驗組為4.97±0.51，三組肺干濕比比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=5.167，P<0.05）。

2.3 三組血清TNF-a、IL-10比較

三組IL-10比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.4 三組HE染色圖片

對照組：未見明顯改變，肺泡結(jié)構(gòu)多數(shù)保持完整，肺泡壁無水腫，肺間質(zhì)少見炎性細胞浸潤。模型組：肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細胞浸潤，肺泡腔內(nèi)少量炎性細胞，肺間質(zhì)水腫，肺泡間隔增寬，肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞、融合，肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)炎性出血。實驗組：肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細胞浸潤，肺泡腔內(nèi)少量炎性細胞，肺間質(zhì)水腫，肺泡間隔增寬，肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞、融合，肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)炎性出血。與模型組相差不多。見圖1。

A 正常對照組肺組織

B 油酸損傷組肺組織

C 實驗組肺組織

3 討論

急性肺損傷（ALI）是由多種肺內(nèi)外致病因素引起的，以急性呼吸困難為主要臨床表現(xiàn)的全身炎癥反應綜合征，其發(fā)病機制非常復雜，若不能得到及時有效的治療，往往會發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合癥（ARDS），甚至危及患者生命。至今ALI確切的發(fā)病機制尚未完全闡明，目前認為除有些致病因素對肺泡膜的直接損傷外，更重要的是多種效應細胞如中性粒細胞、巨唾細胞、血管內(nèi)皮細胞等在肺內(nèi)聚集、激活導致氧化應激及TNF-a、IL-10等促炎介質(zhì)增加，使肺內(nèi)抗炎介質(zhì)增加，促發(fā)過度炎癥反應，是ALI發(fā)生發(fā)展的關鍵環(huán)節(jié)[5-6]。

銀杏達莫注射液含有雙嘧達莫和銀杏葉提取制劑，銀杏葉提取制劑有效成分為銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯，是具有多種藥理作用的血管擴張劑。具有抑制血小板活化因子，防止血栓形成，擴張毛細血管、增加組織血流量、抑制脂質(zhì)過氧化，抑制OFR對組織的損傷，降低血中膽固醇及改善微循環(huán)等作用。而銀杏內(nèi)酯是目前被認為最有臨床應用前景的天然PAF受體拮抗劑[7]。其可清除氧自由基，防止自由基對神經(jīng)細胞的損傷，抑制自由基誘導的神經(jīng)細胞凋亡；雙嘧達莫可抑制血小板的第一相聚集和第二相聚集[8]，因而具有抗血栓形成作用，與銀杏內(nèi)酯聯(lián)合應用能協(xié)同改善腦組織供血流量。而銀杏黃酮苷是氧自由基的捕捉劑和清除劑，參與清除超氧陰離子，抑制脂質(zhì)氧化反應，從而起到保護腦細胞的作用[9-10]。endprint

MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細胞損傷程度。SOD是機體內(nèi)抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂質(zhì)過氧化反應受抑[11-12]。機體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量，SOD能清除OFR，從而抵抗細胞的氧化應激損傷。本研究中，三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計學意義；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計學意義。實驗組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計學意義。說明銀杏達莫具有保護損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比較復雜，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根據(jù)各研究實驗條件不同結(jié)果也各異。在本課題實驗條件下，IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計學差異；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計學意義。

綜上所述，銀杏達莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高，減輕PMN浸潤，清除氧自由基，減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護作用。

[參考文獻]

[1] 曹慧玲，呂士杰，姜艷霞，等.急性肺損傷家兔氧自由基變化及不同中藥治療作用的對比[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2006，13（3）：146-149.

[2] 馬希剛，張珍祥，徐永建.火把花根片對急性肺損傷的保護作用研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，劉功檢.內(nèi)毒素急性肺損傷與中性粒細胞凋亡研究現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥導報，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟憲麗，王平，等.黃零水提取物對急性肺損傷家兔的保護作用及其與膽堿能抗炎通路的相關性研究[J].中草藥，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黃芩和黃連對急性肺損傷家兔的保護作用及其與膽堿能抗炎通路的相關性實驗研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學，2012.

[6] 徐云潔，朱蕾.川芎嗪對急性肺損傷的保護作用[J].中國臨床醫(yī)學，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矯春曉，李敬田，等.銀杏達莫在內(nèi)皮細胞氧化損傷中保護作用的實驗研究[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹麗英.參附注射液對大蘭內(nèi)毒素性肺損傷的保護作用[J].實用醫(yī)學雜志，2010，26（6）：942-944.

[11] 謝丹紅，盛志新.銀杏葉的臨床應用[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 馮建利，姚博，杜怡峰.銀杏達莫對急性腦梗死病人血漿氧化修飾低密度脂蛋白水平的影響[J].中國新藥與臨床雜志，2007，26（2）：125-128.

（收稿日期：2014-01-14）endprint

MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細胞損傷程度。SOD是機體內(nèi)抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂質(zhì)過氧化反應受抑[11-12]。機體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量，SOD能清除OFR，從而抵抗細胞的氧化應激損傷。本研究中，三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計學意義；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計學意義。實驗組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計學意義。說明銀杏達莫具有保護損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比較復雜，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根據(jù)各研究實驗條件不同結(jié)果也各異。在本課題實驗條件下，IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計學差異；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計學意義。

綜上所述，銀杏達莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高，減輕PMN浸潤，清除氧自由基，減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護作用。

[參考文獻]

[1] 曹慧玲，呂士杰，姜艷霞，等.急性肺損傷家兔氧自由基變化及不同中藥治療作用的對比[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2006，13（3）：146-149.

[2] 馬希剛，張珍祥，徐永建.火把花根片對急性肺損傷的保護作用研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，劉功檢.內(nèi)毒素急性肺損傷與中性粒細胞凋亡研究現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥導報，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟憲麗，王平，等.黃零水提取物對急性肺損傷家兔的保護作用及其與膽堿能抗炎通路的相關性研究[J].中草藥，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黃芩和黃連對急性肺損傷家兔的保護作用及其與膽堿能抗炎通路的相關性實驗研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學，2012.

[6] 徐云潔，朱蕾.川芎嗪對急性肺損傷的保護作用[J].中國臨床醫(yī)學，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矯春曉，李敬田，等.銀杏達莫在內(nèi)皮細胞氧化損傷中保護作用的實驗研究[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹麗英.參附注射液對大蘭內(nèi)毒素性肺損傷的保護作用[J].實用醫(yī)學雜志，2010，26（6）：942-944.

[11] 謝丹紅，盛志新.銀杏葉的臨床應用[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 馮建利，姚博，杜怡峰.銀杏達莫對急性腦梗死病人血漿氧化修飾低密度脂蛋白水平的影響[J].中國新藥與臨床雜志，2007，26（2）：125-128.

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MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細胞損傷程度。SOD是機體內(nèi)抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂質(zhì)過氧化反應受抑[11-12]。機體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量，SOD能清除OFR，從而抵抗細胞的氧化應激損傷。本研究中，三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計學意義；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計學意義。實驗組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計學意義。說明銀杏達莫具有保護損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比較復雜，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根據(jù)各研究實驗條件不同結(jié)果也各異。在本課題實驗條件下，IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計學差異；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計學意義。

綜上所述，銀杏達莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高，減輕PMN浸潤，清除氧自由基，減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護作用。

[參考文獻]

[1] 曹慧玲，呂士杰，姜艷霞，等.急性肺損傷家兔氧自由基變化及不同中藥治療作用的對比[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2006，13（3）：146-149.

[2] 馬希剛，張珍祥，徐永建.火把花根片對急性肺損傷的保護作用研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，劉功檢.內(nèi)毒素急性肺損傷與中性粒細胞凋亡研究現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥導報，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟憲麗，王平，等.黃零水提取物對急性肺損傷家兔的保護作用及其與膽堿能抗炎通路的相關性研究[J].中草藥，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黃芩和黃連對急性肺損傷家兔的保護作用及其與膽堿能抗炎通路的相關性實驗研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學，2012.

[6] 徐云潔，朱蕾.川芎嗪對急性肺損傷的保護作用[J].中國臨床醫(yī)學，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矯春曉，李敬田，等.銀杏達莫在內(nèi)皮細胞氧化損傷中保護作用的實驗研究[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹麗英.參附注射液對大蘭內(nèi)毒素性肺損傷的保護作用[J].實用醫(yī)學雜志，2010，26（6）：942-944.

[11] 謝丹紅，盛志新.銀杏葉的臨床應用[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 馮建利，姚博，杜怡峰.銀杏達莫對急性腦梗死病人血漿氧化修飾低密度脂蛋白水平的影響[J].中國新藥與臨床雜志，2007，26（2）：125-128.

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