異育銀鯽胚胎發育的觀察與不同溫度對其影響的研究

白小寧 張 荷

（1.鳳翔縣水利局 陜西 寶雞 721400）（2.貴陽市烏當區畜牧技術服務中心 貴州 貴陽 550018）

異育銀鯽（Allogynogenetic silver Crucian Carp）是以黑龍江省方正縣雙風水庫的天然雌核發育銀鯽（♀）與江西省興國縣產的紅鯉（♂）雜交，刺激卵子雌核發育產生的全雌性后代。這些后代由異源精子刺激銀鯽卵子雌核發育而來，并且有促進生長等異精效應，因而稱其為異育銀鯽。異育銀鯽自20世紀80年代初在全國開始推廣養殖后，目前已成為淡水養殖中的重要品種，其產量約占常規養殖魚類總產量的15℅以上，產值占常規養殖魚類總產值的75℅以上。水溫與魚類的生長和繁殖有著極密切的關系，本實驗通過觀察異育銀鯽胚胎發育各個階段的特征，以及不同溫度環境下對胚胎發育的影響，以期尋找最適的胚胎發育溫度，提高孵化率。

1 材料與方法

1.1 試驗的時間與地點

試驗于2014年3月份至8月份在陜西省安康市水產基地完成。

1.2 親魚的選擇與培育

選擇體質健壯，體重在250g以上的異育銀鯽和興國紅鯉雄魚，分池培育，至各自性腺發育良好。即母本銀鯽腹部膨大柔軟卵巢輪廓明顯，生殖孔突出微紅，輕壓腹部時有少量卵粒流出；父本興國紅鯉選擇第二特征明顯，輕壓腹部時有乳白色精液流出的親魚。

1.3 實驗方法

1.3.1 試驗分組及親魚的繁殖

按不同溫度區域分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組，Ⅰ組溫度為13～17℃；Ⅱ組溫度為18～22℃；Ⅲ組溫度為23～25℃，每組試驗設置三個平行組，平均每組試驗約用親魚20kg、25尾左右，共用親魚60kg、80尾。對三組培育的親魚進行繁殖試驗，繁殖均按常規技術進行，一次性注射催產劑，自然授精，微流水孵化。觀察催產后親本發情時間及親本流產、順產、和難產情況；共進行9次繁殖試驗。

1.3.2 胚胎發育觀察與記錄

親魚催產達到效應時間后母本親魚產卵，同時父本親魚排精，精卵結合后黏附于事先鋪設魚巢上。胚胎發育期間繼續進行微流水刺激，每隔2h測量并記錄催產池水溫。受精卵孵化期間，抽樣計算受精率，并定時抽取100個樣品進行目測和鏡檢，觀察胚胎發育進程并選擇典型時期的胚胎作圖并拍照記錄，計算孵化率。

1.4 實驗儀器與設施

催產劑：LRH-A2激素，PG激素，HCG激素；，連續變倍解剖鏡（XTZ-E）；顯微鏡（YSI.55.DISSOLVEO.OXYGEN Model#55112FT.SW:03A0858.AV）數碼攝象系統（Nikon E4500）。

2 結果

2.1 異育銀鯽胚胎發育期

異育銀鯽胚胎發育過程的分期及各期典型特征如下：

受精卵：卵質分布較均勻，極性不明顯。（見圖1，正面觀。）

卵裂期：首先胚盤突起，原生質集中于卵子的動物極而形成隆起的胚盤，同時受精膜與圍卵周隙形成。之后經過多次分裂，將胚盤分成32個卵裂球。（見圖2，側面觀。）

囊胚期：胚盾經多次卵裂，細胞越分越小，最后形成囊胚。胚盤處的細胞界線不清，高高隆起在植物極上，形成囊胚層。之后囊胚層逐漸變低，其表層細胞開始向卵黃部分下包。卵黃部位的植物極開始有節奏的變形運動，時而突出，時而凹陷，最后恢復為圓形，每一周期需60～90s。（見圖3，側面觀。）

原腸期：胚盤下包，胚盾明顯延長，卵黃部分變相運動十分明顯，卵黃部位的中間部分有時收縮而使卵黃分成兩部分，猶如分成兩葉，之后胚盤繼續下包至4/5，胚盾變狹窄，神經板形成，胚體轉成側臥，卵黃部分變形運動仍十分明顯。最后胚盤完全包圍了卵黃部分，胚體開始形成，胚孔開始封閉，卵黃部位變形運動消逝，神經板中線略下凹，脊索呈柱狀。（見圖4，正面觀。）

眼基出現期：胚體前端膨大形成腦部，在前腦兩側，出現一對橢圓形的突起，即眼的原基。體節出現四到五對，神經板頭端隆起。之后圓錐狀尾部的邊緣生長出透明膜狀的鰭，胚體有十五到十六對肌節，眼囊清楚，中間出現凹陷，在腦后方兩側各形成一橢圓形淡色的耳囊。胚體肌肉開始微微收縮，眼囊中出現晶體且清晰為形，體節二十對左右。在耳囊下方出現鰓板，為長圓形隆起，尾與胚體長軸成銳角。在卵黃囊前端眼的下方出現一管狀心臟，心臟搏動由微弱至有力，心跳每分鐘可達35～58次。（見圖5，側面觀。）

出膜期：由于尾部不斷擺動和頭部孵化酶的作用，仔魚從尾部脫膜而出，肌節三十五對以上，卵黃囊大，形似梨狀。第一對鰓裂形成。（見圖6，側面觀。）

2.2 不同溫度對異育銀鯽催產和魚卵孵化的影響

2.2.1 適宜溫度范圍

從三個溫度區間的試驗結果可以看出，適宜的繁殖水溫為18～22℃之間，效應時間14～16h，發情后2～4h產卵結束。催產率96.4%，平均絕對產卵量1.2萬粒，相對產卵量為4.62萬粒/kg。

2.2.2 低溫對催產和孵化的影響

Ⅰ組催產試驗，水溫一直在13～17℃，盡管催產藥物劑量加大30～50%，效應時間仍達22～30h，產卵過程持續8～15h，催產率75.3%，平均絕對產卵量0.68萬粒，相對產卵量2.72萬粒/kg。魚卵受精率為72%，低于一般情況80%的受精率。孵化率為71%，分別比Ⅱ、Ⅲ兩組低20%和16%。

2.2.3 高溫對催產和孵化的影響

Ⅲ組催產試驗，水溫一直在22～27℃，效應時間12～14h，產卵過程持續2～4h。催產率82.3%，平均絕對產卵量1.16萬粒，相對產卵量4.46萬粒/kg。受精率93%，孵化率87%，接近正常溫度的水平。

3 討論

在18～22℃這一溫度范圍內異育銀鯽性腺發育正常且較為一致，雌魚產卵順利，極少發生難產，卵子受精率94%，孵化率91%。在13～17℃的低溫情況下不僅催產的效應時間加長，雌魚卵巢發育進程極不一致，導致產卵時間延遲8～15h，很大一部分應發育到第Ⅴ期的卵子停留在Ⅳ末，致使產卵量只有正常溫度的一半，難產和流產親魚較多。

在13～17℃低溫催產條件下，受精率比較低是由部分魚卵不夠完全成熟導致。孵化率低的原因是，除觀察到胚胎發育過程夭折之外，還觀察到部分發育成魚苗，在卵膜中活動，若不用解剖針剖開卵膜，則始終不能破膜而出。一些研究魚類和兩棲類胚胎發育的專家認為，這是由于低溫影響，胚體有一種孵化腺體不能分泌卵膜溶解酶而造成的[8]。低于適宜溫度下限，溫度影響較大，不僅影響產卵、受精和孵化，而且孵出的魚苗體質較弱，抗病力較低。

在23～25℃的高溫下對催產影響不十分嚴重，主要表現在卵子發育時速加快，較易造成少數魚卵子過熟而難產，即由Ⅴ期轉化成Ⅳ期，或因拉網操作和人工授精不及時而流產，催產率和產卵率稍低于正常溫度。說明高于適宜溫度上限，溫度的影響不十分嚴重。

表1 不同水溫對異育銀鯽催產和孵化的影響

因此，人工催產應掌握天氣變化規律，選擇好繁殖日期，防止寒流侵襲。據報道，在自然條件下，隨著溫度的變化，銀鯽的繁殖時間有所提前或推遲，一般在水溫17℃左右開始自然繁殖。一般認為這是銀鯽開始繁殖的臨界溫度，但是在試驗過程中，我們發現異育銀鯽開始產卵的時間最早可在13～16℃。