北敗醬多糖的提取及其抑制亞硝化作用研究

楊輝

摘要：采用正交設計優化北敗醬（Sonchus arvensis L.）多糖的提取工藝，采用苯酚-硫酸法測定其多糖含量，紫外光解法測定北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除率。結果表明，最終的優化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時間3 h，料液比（g∶mL）為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時間2 h，料液比為1∶50。北敗醬地上部多糖含量為3.616%，相對標準偏差（RSD）為0.171 4%（n=3）；根部多糖含量為5.961%，RSD為0.140 9%（n=3）。北敗醬多糖對亞硝酸鹽的最大清除率為67.00%。

關鍵詞：北敗醬（Sonchus arvensis L.）；多糖；亞硝化作用；正交設計

中圖分類號：S647；S-3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）03-0654-03

北敗醬為菊科植物苣荬菜（Sonchus arvensis L.）全草[1]，性寒、味苦，有清熱解毒、消腫排膿化瘀的功效。臨床常用于治療闌尾炎、腸炎、痢疾、瘡癰、痔瘡等疾病[2]，民間常作野菜食用[3]。筆者在前期工作中曾發現北敗醬中的多糖含量較高。本試驗通過正交設計法對北敗醬多糖的提取工藝進行了優化，并對其抑制亞硝化反應的作用進行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

供試材料：北敗醬采自河北省赤城縣。葡萄糖對照品（中國藥品生物制品檢定所），其他試劑均為國產分析純，試驗用水為去離子水。

供試儀器：UV-2100型紫外可見分光光度計（北京萊伯泰科儀器有限公司）；TG-322A型微量分析天平（上海天平儀器廠）；RE-52AA型旋轉蒸發儀（上海亞榮儀器廠）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制 將葡萄糖對照品105 ℃干燥至恒重，精確稱取100 mg，加水溶解并定容至100 mL，得到1 000 mg/L葡萄糖對照品溶液。準確吸取該葡萄糖對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL置于25 mL容量瓶中，加水定容。分別精確量取1.0 mL，置于錐形瓶中，均加10%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，立即搖勻，室溫放置30 min，以去離子水做空白對照，在490 nm波長處測定吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對吸光度（A）繪制標準曲線。

1.2.2 正交試驗設計 在預試驗的基礎上，選擇提取溫度、提取時間及料液比3個因素作為考察對象，以多糖含量為測定指標，采用L9（34）正交試驗設計優化多糖提取工藝，試驗因素和水平見表1。

取北敗醬地上部分和根粗粉適量，分別經95%乙醇浸提3次，藥渣置于室溫干燥，得到藥材脫脂干粉。準確稱取藥材脫脂干粉9份，各1 g，按照正交設計方案的條件進行超聲水提，提取液濃縮后，加入4倍體積的無水乙醇，攪勻，靜置過夜，抽濾，所得沉淀依次用適量無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，置于干燥箱干燥，得到北敗醬的粗多糖。分別精確稱取北敗醬粗多糖1 mg，加水溶解并定容至100 mL，采用苯酚-硫酸法[4]測定多糖的提取率。

1.2.3 北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用 精確稱取一定量北敗醬多糖，加水溶解并定容，配制成濃度為1.001 mg/mL的多糖溶液。

北敗醬對亞硝酸鹽的清除作用[5]的測定：吸取北敗醬多糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mL于50.00 mL容量瓶中，加入25.00 mL pH 3.0的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液，再加入0.5 mmol/L的NaNO2溶液5.00 mL，用去離子水定容，37 ℃下恒溫水浴1 h。吸取1.00 mL反應液于7 cm的培養皿中，加入0.4%對氨基苯磺酸溶液2.00 mL，0.1% α-萘胺溶液2.00 mL，搖勻放置15 min后于525 nm處測吸光度值（Ax），同時用不含多糖的反應液作空白（A0），每個樣品平行測定3次，取其平均值。按下面公式計算清除率：

清除率=（A0-Ax）/A0×100%

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制

在490 nm波長處測定葡萄糖對照品溶液的吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對吸光度（A）繪制標準曲線。得到回歸方程為：A=9.107 5C+0.010 4，（r=0.999 2）。結果表明，當葡萄糖質量濃度為0.04～0.24 mg/mL時，其質量濃度與吸光度成良好的線性關系。

2.2 正交試驗結果

由表2可知，影響北敗醬根中多糖提取率的因素主次順序為A、B、C，影響北敗醬地上部分多糖提取率的因素主次順序為A、C、B；方差分析結果（表3）表明，提取溫度和提取時間對北敗醬根中多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B2C2；提取溫度對北敗醬地上部分多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B1C3。

2.3 最佳工藝驗證

分別稱取北敗醬根及地上部分脫脂干粉10 g，各3份，按優選出的工藝條件進行多糖提取，測定結果見表4。結果表明，北敗醬根及地上部分的多糖平均提取率為5.961%（n=3，RSD=0.140 9%）和3.616%（n=3， RSD=0.171 4%）。驗證結果表明，正交試驗設計所選最佳工藝穩定、可靠。

2.4 北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用

北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用結果見圖1。由圖1可知，當多糖液用量為6 mL時，相當于濃度為12.00%的多糖，其對亞硝酸鈉的清除率達到峰值，為67.00%。

3 小結與討論

本試驗結果表明，北敗醬多糖含量較高，其根部多糖含量高于地上部分，一般對北敗醬的食用多局限于地上部分，本試驗結果表明北敗醬根部同樣具有較高的食用價值。

超聲提取北敗醬多糖最佳提取溫度為85 ℃，過高的溫度可能造成多糖的水解。北敗醬根較地上部分質地致密，因此提取根部多糖所用時間相對較長，而料液比對提取率沒有顯著影響，因此二者均選擇1∶50作為料液比。因此，最終的優化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時間3 h，料液比為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時間2 h，料液比為1∶50。

北敗醬為傳統的藥食兩用植物，資源豐富，本試驗結果表明，北敗醬多糖在體外模擬胃液的條件下，能有效地清除亞硝酸鹽，從而阻斷致癌物質N-亞硝胺的合成，起到預防癌癥的目的。對北敗醬多糖加以適當分離提純，開發其藥食功能，有望成為高附加值的功能性食品。

參考文獻：

[1] 肖培根.新編中藥志[M].第三卷. 北京：化學工業出版社，2002. 55-61.

[2] 劉 巍，楊智鋒，姜姍姍.北敗醬乙醇提取物消腫排膿作用研究[J].陜西中醫，2007，28（1）：111-112.

[3] 張洪民，渠桂榮，吳立軍，等.裂葉苣荬菜的研究進展[J].中草藥，1997，28（11）：691-693.

[4] 郁 瑋，楊小明，劉偉民，等.苯酚-硫酸法測定無花果中多糖含量的研究[J].食品科技，2009，34（10）：256-258.

[5] 黃高凌，翁聰澤，倪 輝，等.琯溪蜜柚果皮提取物抑制亞硝化反應的研究[J].食品科技，2007，28（12）：36-39.

摘要：采用正交設計優化北敗醬（Sonchus arvensis L.）多糖的提取工藝，采用苯酚-硫酸法測定其多糖含量，紫外光解法測定北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除率。結果表明，最終的優化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時間3 h，料液比（g∶mL）為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時間2 h，料液比為1∶50。北敗醬地上部多糖含量為3.616%，相對標準偏差（RSD）為0.171 4%（n=3）；根部多糖含量為5.961%，RSD為0.140 9%（n=3）。北敗醬多糖對亞硝酸鹽的最大清除率為67.00%。

關鍵詞：北敗醬（Sonchus arvensis L.）；多糖；亞硝化作用；正交設計

中圖分類號：S647；S-3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）03-0654-03

北敗醬為菊科植物苣荬菜（Sonchus arvensis L.）全草[1]，性寒、味苦，有清熱解毒、消腫排膿化瘀的功效。臨床常用于治療闌尾炎、腸炎、痢疾、瘡癰、痔瘡等疾病[2]，民間常作野菜食用[3]。筆者在前期工作中曾發現北敗醬中的多糖含量較高。本試驗通過正交設計法對北敗醬多糖的提取工藝進行了優化，并對其抑制亞硝化反應的作用進行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

供試材料：北敗醬采自河北省赤城縣。葡萄糖對照品（中國藥品生物制品檢定所），其他試劑均為國產分析純，試驗用水為去離子水。

供試儀器：UV-2100型紫外可見分光光度計（北京萊伯泰科儀器有限公司）；TG-322A型微量分析天平（上海天平儀器廠）；RE-52AA型旋轉蒸發儀（上海亞榮儀器廠）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制 將葡萄糖對照品105 ℃干燥至恒重，精確稱取100 mg，加水溶解并定容至100 mL，得到1 000 mg/L葡萄糖對照品溶液。準確吸取該葡萄糖對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL置于25 mL容量瓶中，加水定容。分別精確量取1.0 mL，置于錐形瓶中，均加10%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，立即搖勻，室溫放置30 min，以去離子水做空白對照，在490 nm波長處測定吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對吸光度（A）繪制標準曲線。

1.2.2 正交試驗設計 在預試驗的基礎上，選擇提取溫度、提取時間及料液比3個因素作為考察對象，以多糖含量為測定指標，采用L9（34）正交試驗設計優化多糖提取工藝，試驗因素和水平見表1。

取北敗醬地上部分和根粗粉適量，分別經95%乙醇浸提3次，藥渣置于室溫干燥，得到藥材脫脂干粉。準確稱取藥材脫脂干粉9份，各1 g，按照正交設計方案的條件進行超聲水提，提取液濃縮后，加入4倍體積的無水乙醇，攪勻，靜置過夜，抽濾，所得沉淀依次用適量無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，置于干燥箱干燥，得到北敗醬的粗多糖。分別精確稱取北敗醬粗多糖1 mg，加水溶解并定容至100 mL，采用苯酚-硫酸法[4]測定多糖的提取率。

1.2.3 北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用 精確稱取一定量北敗醬多糖，加水溶解并定容，配制成濃度為1.001 mg/mL的多糖溶液。

北敗醬對亞硝酸鹽的清除作用[5]的測定：吸取北敗醬多糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mL于50.00 mL容量瓶中，加入25.00 mL pH 3.0的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液，再加入0.5 mmol/L的NaNO2溶液5.00 mL，用去離子水定容，37 ℃下恒溫水浴1 h。吸取1.00 mL反應液于7 cm的培養皿中，加入0.4%對氨基苯磺酸溶液2.00 mL，0.1% α-萘胺溶液2.00 mL，搖勻放置15 min后于525 nm處測吸光度值（Ax），同時用不含多糖的反應液作空白（A0），每個樣品平行測定3次，取其平均值。按下面公式計算清除率：

清除率=（A0-Ax）/A0×100%

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制

在490 nm波長處測定葡萄糖對照品溶液的吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對吸光度（A）繪制標準曲線。得到回歸方程為：A=9.107 5C+0.010 4，（r=0.999 2）。結果表明，當葡萄糖質量濃度為0.04～0.24 mg/mL時，其質量濃度與吸光度成良好的線性關系。

2.2 正交試驗結果

由表2可知，影響北敗醬根中多糖提取率的因素主次順序為A、B、C，影響北敗醬地上部分多糖提取率的因素主次順序為A、C、B；方差分析結果（表3）表明，提取溫度和提取時間對北敗醬根中多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B2C2；提取溫度對北敗醬地上部分多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B1C3。

2.3 最佳工藝驗證

分別稱取北敗醬根及地上部分脫脂干粉10 g，各3份，按優選出的工藝條件進行多糖提取，測定結果見表4。結果表明，北敗醬根及地上部分的多糖平均提取率為5.961%（n=3，RSD=0.140 9%）和3.616%（n=3， RSD=0.171 4%）。驗證結果表明，正交試驗設計所選最佳工藝穩定、可靠。

2.4 北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用

北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用結果見圖1。由圖1可知，當多糖液用量為6 mL時，相當于濃度為12.00%的多糖，其對亞硝酸鈉的清除率達到峰值，為67.00%。

3 小結與討論

本試驗結果表明，北敗醬多糖含量較高，其根部多糖含量高于地上部分，一般對北敗醬的食用多局限于地上部分，本試驗結果表明北敗醬根部同樣具有較高的食用價值。

超聲提取北敗醬多糖最佳提取溫度為85 ℃，過高的溫度可能造成多糖的水解。北敗醬根較地上部分質地致密，因此提取根部多糖所用時間相對較長，而料液比對提取率沒有顯著影響，因此二者均選擇1∶50作為料液比。因此，最終的優化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時間3 h，料液比為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時間2 h，料液比為1∶50。

北敗醬為傳統的藥食兩用植物，資源豐富，本試驗結果表明，北敗醬多糖在體外模擬胃液的條件下，能有效地清除亞硝酸鹽，從而阻斷致癌物質N-亞硝胺的合成，起到預防癌癥的目的。對北敗醬多糖加以適當分離提純，開發其藥食功能，有望成為高附加值的功能性食品。

參考文獻：

[1] 肖培根.新編中藥志[M].第三卷. 北京：化學工業出版社，2002. 55-61.

[2] 劉 巍，楊智鋒，姜姍姍.北敗醬乙醇提取物消腫排膿作用研究[J].陜西中醫，2007，28（1）：111-112.

[3] 張洪民，渠桂榮，吳立軍，等.裂葉苣荬菜的研究進展[J].中草藥，1997，28（11）：691-693.

[4] 郁 瑋，楊小明，劉偉民，等.苯酚-硫酸法測定無花果中多糖含量的研究[J].食品科技，2009，34（10）：256-258.

[5] 黃高凌，翁聰澤，倪 輝，等.琯溪蜜柚果皮提取物抑制亞硝化反應的研究[J].食品科技，2007，28（12）：36-39.

摘要：采用正交設計優化北敗醬（Sonchus arvensis L.）多糖的提取工藝，采用苯酚-硫酸法測定其多糖含量，紫外光解法測定北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除率。結果表明，最終的優化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時間3 h，料液比（g∶mL）為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時間2 h，料液比為1∶50。北敗醬地上部多糖含量為3.616%，相對標準偏差（RSD）為0.171 4%（n=3）；根部多糖含量為5.961%，RSD為0.140 9%（n=3）。北敗醬多糖對亞硝酸鹽的最大清除率為67.00%。

關鍵詞：北敗醬（Sonchus arvensis L.）；多糖；亞硝化作用；正交設計

中圖分類號：S647；S-3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）03-0654-03

北敗醬為菊科植物苣荬菜（Sonchus arvensis L.）全草[1]，性寒、味苦，有清熱解毒、消腫排膿化瘀的功效。臨床常用于治療闌尾炎、腸炎、痢疾、瘡癰、痔瘡等疾病[2]，民間常作野菜食用[3]。筆者在前期工作中曾發現北敗醬中的多糖含量較高。本試驗通過正交設計法對北敗醬多糖的提取工藝進行了優化，并對其抑制亞硝化反應的作用進行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

供試材料：北敗醬采自河北省赤城縣。葡萄糖對照品（中國藥品生物制品檢定所），其他試劑均為國產分析純，試驗用水為去離子水。

供試儀器：UV-2100型紫外可見分光光度計（北京萊伯泰科儀器有限公司）；TG-322A型微量分析天平（上海天平儀器廠）；RE-52AA型旋轉蒸發儀（上海亞榮儀器廠）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制 將葡萄糖對照品105 ℃干燥至恒重，精確稱取100 mg，加水溶解并定容至100 mL，得到1 000 mg/L葡萄糖對照品溶液。準確吸取該葡萄糖對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL置于25 mL容量瓶中，加水定容。分別精確量取1.0 mL，置于錐形瓶中，均加10%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，立即搖勻，室溫放置30 min，以去離子水做空白對照，在490 nm波長處測定吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對吸光度（A）繪制標準曲線。

1.2.2 正交試驗設計 在預試驗的基礎上，選擇提取溫度、提取時間及料液比3個因素作為考察對象，以多糖含量為測定指標，采用L9（34）正交試驗設計優化多糖提取工藝，試驗因素和水平見表1。

取北敗醬地上部分和根粗粉適量，分別經95%乙醇浸提3次，藥渣置于室溫干燥，得到藥材脫脂干粉。準確稱取藥材脫脂干粉9份，各1 g，按照正交設計方案的條件進行超聲水提，提取液濃縮后，加入4倍體積的無水乙醇，攪勻，靜置過夜，抽濾，所得沉淀依次用適量無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，置于干燥箱干燥，得到北敗醬的粗多糖。分別精確稱取北敗醬粗多糖1 mg，加水溶解并定容至100 mL，采用苯酚-硫酸法[4]測定多糖的提取率。

1.2.3 北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用 精確稱取一定量北敗醬多糖，加水溶解并定容，配制成濃度為1.001 mg/mL的多糖溶液。

北敗醬對亞硝酸鹽的清除作用[5]的測定：吸取北敗醬多糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mL于50.00 mL容量瓶中，加入25.00 mL pH 3.0的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液，再加入0.5 mmol/L的NaNO2溶液5.00 mL，用去離子水定容，37 ℃下恒溫水浴1 h。吸取1.00 mL反應液于7 cm的培養皿中，加入0.4%對氨基苯磺酸溶液2.00 mL，0.1% α-萘胺溶液2.00 mL，搖勻放置15 min后于525 nm處測吸光度值（Ax），同時用不含多糖的反應液作空白（A0），每個樣品平行測定3次，取其平均值。按下面公式計算清除率：

清除率=（A0-Ax）/A0×100%

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制

在490 nm波長處測定葡萄糖對照品溶液的吸光度（A），以葡萄糖濃度（C）對吸光度（A）繪制標準曲線。得到回歸方程為：A=9.107 5C+0.010 4，（r=0.999 2）。結果表明，當葡萄糖質量濃度為0.04～0.24 mg/mL時，其質量濃度與吸光度成良好的線性關系。

2.2 正交試驗結果

由表2可知，影響北敗醬根中多糖提取率的因素主次順序為A、B、C，影響北敗醬地上部分多糖提取率的因素主次順序為A、C、B；方差分析結果（表3）表明，提取溫度和提取時間對北敗醬根中多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B2C2；提取溫度對北敗醬地上部分多糖的提取率有顯著影響，最佳提取工藝為A2B1C3。

2.3 最佳工藝驗證

分別稱取北敗醬根及地上部分脫脂干粉10 g，各3份，按優選出的工藝條件進行多糖提取，測定結果見表4。結果表明，北敗醬根及地上部分的多糖平均提取率為5.961%（n=3，RSD=0.140 9%）和3.616%（n=3， RSD=0.171 4%）。驗證結果表明，正交試驗設計所選最佳工藝穩定、可靠。

2.4 北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用

北敗醬多糖對亞硝酸鹽的清除作用結果見圖1。由圖1可知，當多糖液用量為6 mL時，相當于濃度為12.00%的多糖，其對亞硝酸鈉的清除率達到峰值，為67.00%。

3 小結與討論

本試驗結果表明，北敗醬多糖含量較高，其根部多糖含量高于地上部分，一般對北敗醬的食用多局限于地上部分，本試驗結果表明北敗醬根部同樣具有較高的食用價值。

超聲提取北敗醬多糖最佳提取溫度為85 ℃，過高的溫度可能造成多糖的水解。北敗醬根較地上部分質地致密，因此提取根部多糖所用時間相對較長，而料液比對提取率沒有顯著影響，因此二者均選擇1∶50作為料液比。因此，最終的優化提取方案為根部多糖提取溫度85 ℃，提取時間3 h，料液比為1∶50；地上部分多糖提取溫度85 ℃，提取時間2 h，料液比為1∶50。

北敗醬為傳統的藥食兩用植物，資源豐富，本試驗結果表明，北敗醬多糖在體外模擬胃液的條件下，能有效地清除亞硝酸鹽，從而阻斷致癌物質N-亞硝胺的合成，起到預防癌癥的目的。對北敗醬多糖加以適當分離提純，開發其藥食功能，有望成為高附加值的功能性食品。

參考文獻：

[1] 肖培根.新編中藥志[M].第三卷. 北京：化學工業出版社，2002. 55-61.

[2] 劉 巍，楊智鋒，姜姍姍.北敗醬乙醇提取物消腫排膿作用研究[J].陜西中醫，2007，28（1）：111-112.

[3] 張洪民，渠桂榮，吳立軍，等.裂葉苣荬菜的研究進展[J].中草藥，1997，28（11）：691-693.

[4] 郁 瑋，楊小明，劉偉民，等.苯酚-硫酸法測定無花果中多糖含量的研究[J].食品科技，2009，34（10）：256-258.

[5] 黃高凌，翁聰澤，倪 輝，等.琯溪蜜柚果皮提取物抑制亞硝化反應的研究[J].食品科技，2007，28（12）：36-39.