KT和NAA對(duì)知母試管苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響

尹明華

摘要：探討了激動(dòng)素（KT）和萘乙酸（NAA）對(duì)知母（Anemarrhena asphodeloides）分蘗生長(zhǎng)發(fā)育和生理生化指標(biāo)的影響。結(jié)果表明，知母分蘗生長(zhǎng)發(fā)育的最佳培養(yǎng)基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L，此培養(yǎng)基條件下，知母分蘗的總?cè)~綠素含量、可溶性總糖含量和可溶性蛋白質(zhì)含量最高；而低濃度的KT與高濃度的NAA組合下知母試管苗總?cè)~綠素含量、可溶性總糖含量和可溶性蛋白質(zhì)含量較低。

關(guān)鍵詞：知母（Anemarrhena asphodeloides）；激動(dòng)素（KT）；萘乙酸（NAA）；分蘗生長(zhǎng)發(fā)育；生理生化指標(biāo)

中圖分類號(hào)：S567.23 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）03-0607-02

知母（Anemarrhena asphodeloides）為百合科（Liliaceae）知母屬（Anemarrhena Bunge）多年生宿根植物，其根、莖為常用中藥材，藥用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，味苦、寒，具有清熱瀉火、潤(rùn)腸滑燥、止渴除煩等功效[1]。在中國(guó)主要分布于河北、山西、內(nèi)蒙古、遼寧、黑龍江、吉林等省（區(qū)）[2]。知母皂苷元為知母的主要活性成分，已有研究表明，知母皂苷具有提高多種擬癡呆動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶功能和對(duì)抗β-淀粉樣蛋白引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用[3]。

目前國(guó)內(nèi)外主要對(duì)知母的化學(xué)成分[4]、提取工藝[5]、藥理作用[6]、臨床應(yīng)用[7]和栽培管理[8]等方面進(jìn)行了研究，而關(guān)于知母組織培養(yǎng)的研究較少[9，10]。試驗(yàn)探討了NAA（萘乙酸）和KT（激動(dòng)素）對(duì)知母分蘗生長(zhǎng)發(fā)育和生理生化指標(biāo)的影響，旨在為知母組培快繁和種質(zhì)保存提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料知母分蘗由上饒師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院植物組織培養(yǎng)室提供。

1.2 方法

選取相同條件下生長(zhǎng)良好的知母分蘗，切除根，留莖1.5 cm，每瓶接種5個(gè)知母分蘗，培養(yǎng)基如下：①M(fèi)S（CK）；②MS+KT 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L；③MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L；④MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L；⑤MS+KT 4 mg/L+NAA 0.5 mg/L。培養(yǎng)基中均加入30 g/L蔗糖和0.5 g/L瓊脂，調(diào)pH為5.8～6.0。培養(yǎng)條件為：光照時(shí)間14 h/d；光照度1 000～2 000 lx；溫度（25±1） ℃；相對(duì)濕度70%～80%。在60 d內(nèi)統(tǒng)計(jì)知母分蘗生長(zhǎng)發(fā)育情況。60 d后測(cè)定5組試管苗的生理生化指標(biāo)，總?cè)~綠素（葉綠素a和葉綠素b）含量的測(cè)定采用丙酮比色法[11]，可溶性蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法[12]，可溶性總糖含量的測(cè)定采用蒽酮比色法[12]。試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 KT和NAA對(duì)知母分蘗生長(zhǎng)發(fā)育的影響

從表1可知，沒有添加激素的對(duì)照組，不僅芽少芽短，而且根少根短。添加激素后，總體上可以促進(jìn)知母分蘗的生長(zhǎng)發(fā)育。當(dāng)KT濃度為2 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的升高，新生芽數(shù)極顯著增加，但新生芽長(zhǎng)、新生根數(shù)和新生根長(zhǎng)無顯著變化。當(dāng)KT濃度為4 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的升高，新生芽數(shù)和新生芽長(zhǎng)極顯著下降，而新生根數(shù)和新生根長(zhǎng)無顯著變化。當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時(shí)，隨著KT濃度的升高，新生根數(shù)無顯著變化，但新生芽數(shù)、新生芽長(zhǎng)和新生根長(zhǎng)極顯著增加。當(dāng)NAA濃度為0.5 mg/L時(shí)，隨著KT濃度的升高，新生芽數(shù)和新生根數(shù)無顯著變化，但新生根長(zhǎng)極顯著增加，而新生芽長(zhǎng)極顯著下降。因此，知母分蘗生長(zhǎng)發(fā)育的最佳培養(yǎng)基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

2.2 KT和NAA對(duì)知母試管苗生理生化指標(biāo)的影響

從表2可知，沒有添加激素的對(duì)照組，總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量和可溶性總糖含量均較低。添加激素后，總體上可以促進(jìn)總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量和可溶性總糖含量的增加。當(dāng)KT濃度為2 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的升高，總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量和可溶性總糖含量極顯著增加。當(dāng)KT濃度為4 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的升高，總?cè)~綠素含量和可溶性蛋白質(zhì)含量極顯著下降，而可溶性總糖含量無顯著變化。當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時(shí)，隨著KT濃度的升高，總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量和可溶性總糖含量極顯著增加。當(dāng)NAA濃度為0.5 mg/L時(shí)，隨著KT濃度的升高，總?cè)~綠素含量和可溶性蛋白質(zhì)含量無顯著變化，但可溶性總糖含量極顯著增加。因此，從生理生化指標(biāo)的變化來看，知母分蘗生長(zhǎng)發(fā)育的最佳培養(yǎng)基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

3 小結(jié)

植物材料的器官再生途徑一般是由細(xì)胞分裂與生長(zhǎng)素的比例來控制的[5]。KT和NAA是兩種常用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，分別屬于細(xì)胞分裂素類和生長(zhǎng)素類，它們?cè)谏a(chǎn)上尤其在組織培養(yǎng)中應(yīng)用較廣，KT和NAA在培養(yǎng)基中的含量及其比例不同都可以影響培養(yǎng)材料的生長(zhǎng)[13]。試驗(yàn)結(jié)果表明，知母分蘗生長(zhǎng)發(fā)育的最佳培養(yǎng)基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L，在此培養(yǎng)基下，知母分蘗的新生芽數(shù)、新生芽長(zhǎng)、新生根數(shù)和新生根長(zhǎng)總體上明顯增加。生理生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果也表明，此種培養(yǎng)基有利于知母試管苗的總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量以及可溶性總糖含量的提高。劉小鳳等[14]研究了不同濃度的NAA和KT對(duì)馬鈴薯組培苗鮮重、根重、須根數(shù)和腋芽數(shù)的影響，發(fā)現(xiàn)最佳的濃度組合為NAA 0.05～0.08 mL/L、KT 0.4～0.6 mL/L。祝紅藝等[13]也研究了培養(yǎng)基中KT與NAA含量對(duì)馬鈴薯組培苗生長(zhǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)KT為0.4 mg/L、NAA為0.04 mg/L時(shí)，組培苗鮮重、根重、根數(shù)、腋芽發(fā)生數(shù)及腋芽發(fā)生百分比顯著增加。徐恒戩[15]對(duì)KT和NAA對(duì)黑籽南瓜器官離體再生的影響研究發(fā)現(xiàn)，最佳的再生培養(yǎng)基為MS+KT 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L，此培養(yǎng)基下可獲得較高的不定芽誘導(dǎo)率，與本研究結(jié)果基本一致。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)出版社，2010.

[2] 鐘 可，王文全，靳鳳云，等.知母藥材礦質(zhì)元素特征及其與道地性的關(guān)系[J].中國(guó)新藥雜志，2013，22（4）：472-476，481.

[3] 王 琦，隋海娟，屈文慧，等.知母皂苷元對(duì)谷氨酸引起的皮層神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2013，29（2）：281-285.

[4] 朱富濤，黃雪峰，孔令義.知母中甾體皂苷類成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（11）：1497-1501，1570.

[5] 陳志紅，李一澍，盧國(guó)杰.知母總皂苷提取分離方法研究[J].應(yīng)用化工，2008，37（8）：841-843.

[6] 李滿妹，江 濤，黃杰昌，等.知母總黃酮對(duì)溴酸鉀誘發(fā)小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J].中草藥，2008，39（2）：252-255.

[7] 白世慶，劉艷紅.知母的藥理研究與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2007，1（4）：66-67.

[8] 孫 偉，李 敬，馬淑坤.知母種子繁殖技術(shù)及效益分析[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（3）：102-103.

[9] 郭晉華，王 莉.知母胚軸試管苗的誘導(dǎo)[J].植物生理學(xué)通訊，1985（3）：31.

[10] 李寶平，王佐芝，劉維忠，等.知母的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].山西師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），1993，7（3）：41-43.

[11] 李合生. 植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)[M]. 北京： 高等教育出版社，2000.

[12] 吳學(xué)紅，高 杰.洋蔥春化處理及可溶性糖和可溶性蛋白質(zhì)變化規(guī)律的研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，50（2）：294-299.

[13] 祝紅藝，柴 巖，劉小鳳，等.KT與NAA對(duì)馬鈴薯組培苗生長(zhǎng)的影響[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000，4（2）：7-9.

[14] 劉小鳳，吳云鋒，胡想順.不同濃度NAA和KT對(duì)馬鈴薯組培苗的影響及方程模型[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，11（6）：106-108.

[15] 徐恒戩.KT和NAA對(duì)黑籽南瓜器官離體再生的影響[J].北方園藝，2007（4）：200-202.

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)出版社，2010.

[2] 鐘 可，王文全，靳鳳云，等.知母藥材礦質(zhì)元素特征及其與道地性的關(guān)系[J].中國(guó)新藥雜志，2013，22（4）：472-476，481.

[3] 王 琦，隋海娟，屈文慧，等.知母皂苷元對(duì)谷氨酸引起的皮層神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2013，29（2）：281-285.

[4] 朱富濤，黃雪峰，孔令義.知母中甾體皂苷類成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（11）：1497-1501，1570.

[5] 陳志紅，李一澍，盧國(guó)杰.知母總皂苷提取分離方法研究[J].應(yīng)用化工，2008，37（8）：841-843.

[6] 李滿妹，江 濤，黃杰昌，等.知母總黃酮對(duì)溴酸鉀誘發(fā)小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J].中草藥，2008，39（2）：252-255.

[7] 白世慶，劉艷紅.知母的藥理研究與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2007，1（4）：66-67.

[8] 孫 偉，李 敬，馬淑坤.知母種子繁殖技術(shù)及效益分析[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（3）：102-103.

[9] 郭晉華，王 莉.知母胚軸試管苗的誘導(dǎo)[J].植物生理學(xué)通訊，1985（3）：31.

[10] 李寶平，王佐芝，劉維忠，等.知母的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].山西師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），1993，7（3）：41-43.

[11] 李合生. 植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)[M]. 北京： 高等教育出版社，2000.

[12] 吳學(xué)紅，高 杰.洋蔥春化處理及可溶性糖和可溶性蛋白質(zhì)變化規(guī)律的研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，50（2）：294-299.

[13] 祝紅藝，柴 巖，劉小鳳，等.KT與NAA對(duì)馬鈴薯組培苗生長(zhǎng)的影響[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000，4（2）：7-9.

[14] 劉小鳳，吳云鋒，胡想順.不同濃度NAA和KT對(duì)馬鈴薯組培苗的影響及方程模型[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，11（6）：106-108.

[15] 徐恒戩.KT和NAA對(duì)黑籽南瓜器官離體再生的影響[J].北方園藝，2007（4）：200-202.

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)出版社，2010.

[2] 鐘 可，王文全，靳鳳云，等.知母藥材礦質(zhì)元素特征及其與道地性的關(guān)系[J].中國(guó)新藥雜志，2013，22（4）：472-476，481.

[3] 王 琦，隋海娟，屈文慧，等.知母皂苷元對(duì)谷氨酸引起的皮層神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2013，29（2）：281-285.

[4] 朱富濤，黃雪峰，孔令義.知母中甾體皂苷類成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（11）：1497-1501，1570.

[5] 陳志紅，李一澍，盧國(guó)杰.知母總皂苷提取分離方法研究[J].應(yīng)用化工，2008，37（8）：841-843.

[6] 李滿妹，江 濤，黃杰昌，等.知母總黃酮對(duì)溴酸鉀誘發(fā)小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J].中草藥，2008，39（2）：252-255.

[7] 白世慶，劉艷紅.知母的藥理研究與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2007，1（4）：66-67.

[8] 孫 偉，李 敬，馬淑坤.知母種子繁殖技術(shù)及效益分析[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（3）：102-103.

[9] 郭晉華，王 莉.知母胚軸試管苗的誘導(dǎo)[J].植物生理學(xué)通訊，1985（3）：31.

[10] 李寶平，王佐芝，劉維忠，等.知母的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].山西師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），1993，7（3）：41-43.

[11] 李合生. 植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)[M]. 北京： 高等教育出版社，2000.

[12] 吳學(xué)紅，高 杰.洋蔥春化處理及可溶性糖和可溶性蛋白質(zhì)變化規(guī)律的研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，50（2）：294-299.

[13] 祝紅藝，柴 巖，劉小鳳，等.KT與NAA對(duì)馬鈴薯組培苗生長(zhǎng)的影響[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000，4（2）：7-9.

[14] 劉小鳳，吳云鋒，胡想順.不同濃度NAA和KT對(duì)馬鈴薯組培苗的影響及方程模型[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，11（6）：106-108.

[15] 徐恒戩.KT和NAA對(duì)黑籽南瓜器官離體再生的影響[J].北方園藝，2007（4）：200-202.