雌激素受體和17β-羥類固醇脫氫酶1在子宮內膜息肉中的表達及其意義

肖 佩,張翠玲,孫 黎,王樹鶴

雌激素受體和17β-羥類固醇脫氫酶1在子宮內膜息肉中的表達及其意義

肖 佩1,張翠玲2,孫 黎3,王樹鶴4

目的研究雌激素受體(estrogen receptor，ER)和17β-羥類固醇脫氫酶1(17β-HSD1)在子宮內膜息肉( endometrial polyps，EPs)中的表達情況，進一步從分子水平闡明EPs的發病機制。方法選擇EPs患者47例，其中，息肉組織作為病例組，同一患者宮腔內遠離息肉組織的正常內膜作為對照1組，同時選擇50例行宮腔鏡檢查的婦女的正常子宮內膜組織作為對照2組。采用免疫組織化學法檢測ER和17β-HSD1在各組的表達情況并進行比較。結果ER在EPs中表達的陽性率是80.9%，17β-HSD1在EPs中表達的陽性率是76.6%，二者在EPs中表達均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。ER和17β-HSD1在EPs中的表達呈正相關(r=0.619，P<0.01)。結論ER和17β-HSD1在EPs中的過度表達可能是EPs發生、發展的原因。

子宮內膜息肉；雌激素受體；17β-羥類固醇脫氫酶1

子宮內膜息肉( endometrial polyps，EPs) 是突出于宮腔內的單發或多發的結節狀腫物，它雖然是育齡婦女及絕經后婦女的常見疾病，但是目前EPs的發病機制尚不明確，多數臨床醫師對于EPs所導致的癥狀也僅局限在月經改變方面[1]。此外，EPs較易復發，尚無公認確切有效的預防措施，因此研究EPs的發病機制具有重要的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源 選擇2011-07至2012-07在北京軍區總醫院婦科行EPs切除術的患者47例作為病例組，同時取該患者遠離息肉的正常子宮內膜組織47例作為對照1組，同期選擇在該院行宮腔鏡檢查子宮內膜組織正常的婦女50例作為對照2組。病例組與對照2組在年齡、孕次、產次方面構成比無統計學差別。所有標本均來自絕經前婦女，年齡23～48歲，平均(35.6±3.74)歲，所有患者均在月經來潮后第3～7天內行宮腔鏡檢查術和宮腔鏡電切術。所有病例均在宮腔鏡下取標本，然后通過顯微鏡來觀察子宮內膜的形態，通過病理區別EPs和正常子宮內膜。所有的患者均無子宮肌瘤、子宮內膜異位癥、子宮腺肌癥、子宮內膜癌、宮頸癌、卵巢腫瘤等合并癥，無其他惡性疾病及嚴重并發癥。

1.1.2 主要試劑 羊抗兔ER抗體、羊抗兔17β-HSD1抗體、DAB顯色試劑盒、過氧化酶免疫組化染色試劑盒、辣根酶標記的鏈酶親和素均購自北京博奧森生物技術有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標本制備方法 切除的組織立即常規10%甲醛溶液固定，并送入病理科，再用不同梯度的乙醇對其脫水，二甲苯透明20 min，最后進行石蠟包埋，將標本制成石蠟包塊。

1.2.2 免疫組化方法 常規石蠟切片HE染色，核實病理組織學診斷。ER和17β-HSD1蛋白的染色方法按S-P試劑盒說明書步驟進行，0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)微波18 min行抗原修復，羊抗兔ER抗體、羊抗兔17β-HSD1抗體4 ℃過夜。經DAB顯色后，蘇木精復染，中性樹膠封片。陰性對照采用 0.01 mol/LPBS(pH=7.4)液體代替一抗，其他步驟不變。

1.2.3 染色結果判定方法 采用雙盲法，由2名病理醫師分別閱片。采用半定量法，ER和17β-HSD1在胞質和胞核均有表達，隨機觀察10個高倍鏡視野，放大倍數100倍，胞核按每高倍鏡視野陽性細胞數百分比記分:陽性細胞數<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。胞質按著色強度記分：染色呈淡黃色者記為1分；呈黃色者記為2分；呈棕黃色者記為3分。上述兩種記分的乘積即為陽性強度：0分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8 分為中度陽性(++)，9～12分為強陽性 (+++)。

1.3 統計學處理 采用SPSS16.0統計軟件,實驗數據采用χ2檢驗及Spearman秩相關分析，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

ER和17β-HSD1在病例組中的表達呈陽性(圖1A和圖2A)，并且在細胞質和細胞核中均有表達，但是二者在對照1組和對照2組中的表達均呈陰性(圖1B、C和圖2B、C)。ER和17β-HSD1在病例組中的表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義(χ2ER=61.50，P<0.05；χ217β-HSD1=51.82，P<0.05，表1)，但是ER和17β-HSD1在兩對照組中的表達并無差別(χ2ER=0.006，P>0.05,χ217β-HSD1=0.22，P>0.05)。ER和17β-HSD1在病例組中的表達均比對照組中高，經Spearman等級相關分析發現，ER和17β-HSD1在病例組中表達呈正相關(r=0.619，P<0.01)。

圖1 ER在子宮內膜中的表達(HE，×100)

圖2 17β-HSD1在子宮內膜中的表達(HE，×100)

表1 ER和17β-HSD1在子宮內膜組織中的表達情況

3 討 論

EPs是最常見的子宮內膜良性病變之一，由腺體及間質組成，是子宮內膜基底層過度增生形成的一種瘤樣病變，可發生在青春期后的任何年齡。近年來，隨著陰道超聲和宮腔鏡的廣泛應用，EPs發病率呈明顯上升趨勢，引起眾多學者的關注。EPs的發病率為7.8%～41.0%[2]，好發于 35歲以上女性，隨著年齡的增長其發病率呈增高趨勢。EPs 多為良性病變，但亦可發生惡變。Costa-Paiva等[3]通過大樣本統計發現，EPs 的惡變率約為 4.1%。雖然EPs是很常見的臨床疾病，治療相對簡單，但易復發，發病機制及病因迄今尚未達成共識，因此目前尚無良好的預防措施。大部分學者研究認為，子宮內膜局部的雌激素水平及雌激素受體水平過高可能與EPs的形成有關系[4]。

有研究發現，EPs患者多合并有不孕癥、PCOS、子宮內膜異位癥及子宮腺肌癥等，故認為 EP 與上述疾病的發病機制相似，均為雌激素依賴性疾病[5,6]。本實驗正是以此為出發點，探討EPs是否與子宮內膜局部高水平的雌激素有關，但是直接測定子宮內膜組織中的雌激素濃度難度很大，因此，本實驗選擇影響局部雌激素代謝及功能的兩個相關因素，即ER和17β-HSD1。

ER的配體是雌激素，當子宮內膜局部表達過多的ER與雌激素結合后，會導致子宮內膜細胞內不同基因轉錄，表達過多的導致子宮內膜細胞增殖的產物[7]，比如細胞周期素D1、c-MYC、血管內皮生長因子等，最終結果是子宮內膜細胞過度增殖。另外，還有研究提示，雌激素受體還可以調節啟動子序列中富含GC的基因的表達[8]。由此分析，子宮內膜局部有高水平的雌激素受體，導致子宮內膜細胞內的基因轉錄發生變化，促進細胞增生的蛋白、因子等產物增加，從而會出現子宮內膜細胞的過度增生，進而就有可能會發展為EPs。

17β-HSD1是17β-HSDs的成員之一，它催化雌酮C17位置上的酮基轉化為醇基，使低生物活性的雌酮轉化為高生物活性的雌二醇，是一個催化還原反應的酶。該酶是雌二醇合成最后步驟的關鍵酶，也是直接調節雌二醇在局部組織中的受體前水平的重要的酶。17β-HSD1在雌激素的轉化中起著非常重要的作用，由它催化的底物包括：雌二醇 (E2)、雌酮、去氫表雄酮(DHEA)、二氫睪酮(DHT)和雄甾烯二酮(androstenedione，4-dione)等。而17β-HSD1的催化雌酮活化的效率最高。17β-HSD1基因的啟動子含有典型的GC豐富區[9]，因此雌激素受體陽性的細胞中17β-HSD1的表達可能會增加。17β-HSD1主要分布在卵巢組織、胎盤組織和乳腺組織中，其表達率在 60%的惡性組織中增加顯著，而且其與細胞凋亡直接相關。國外學者在研究乳腺癌細胞 MCF-7和T47D的實驗中證實，用siRNA抑制17β-HSD1的表達之后，活化的雌激素明顯減少，細胞增殖下降[10]，表明17β-HSD1參與了雌激素依賴性疾病的發生。另有研究發現，孕激素可提高17β-HSD1活性和促使mRNA的表達升高[11]。

本研究發現，ER和17β-HSD1在EPs中表達陽性率明顯高于對照組，且二者在對照組中的表達并無差異。進一步經Spearman秩相關分析發現，ER和17β-HSD1在EPs中表達呈正相關。這可能由于EPs的發病機制受雌、孕激素受體調節，雌激素是ER的配體，二者結合后不但調控子宮內膜局部的基因表達，還調節啟動子序列中富含GC的17β-HSD1基因的表達，從而生成更多的高活性的雌激素，在二者的共同作用下，局部的子宮內膜細胞增生，逐漸形成息肉。因此ER和17β-HSD1可能在EPs的發生、發展中起到較為重要的作用。

[1] 王樹鶴. 子宮內膜息肉研究進展[J]. 武警醫學，2012, 23(10): 829-832.

[2] Lee S C，Kaunitz A M，Sanchez-Ramos L，etal． The onco-genic potential of endometrial polyps: a systematic review and meta-analysis[J]． Obstet Gynecol，2010, 116 (5): 1197-1205.

[3] Costa-Paiva L, Godoy C E Jr, Antunes A Jr,etal． Risk of malignancy in endometrial polyps in premenopausal and postmenopausal women according to clinicopathologic characteristics[J]．Menopause，2011，18( 12) : 1278-1282.

[4] Gul A, Ugur M, Iskender C,etal. Immunohistochemical expression of estrogen and progesterone receptor in endometrial polyps and its relationship tocl-inical parameters [J]. Arch Gynecol Obstet，2010，281(3): 479-483.

[5] Indraccolo U，Barbieri F． Relationship between adenomy-osis and uterine polyps[J]． Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2011，157( 2) : 185-189.

[6] Munro M G，Critchley H O，Fraser I S． The FIGO systems for nomenclature and classification of causes of abnormal uterine bleeding in the reproductive years: who needs them[J]. Am J Obstet Gynecol，2012，207 ( 4 ) : 259-265.

[7] 賈弘褆，馮作化，屈 伸,等. 生物化學與分子生物學[M]. 2版. 北京：人民衛生出版社，2010：440.

[8] 苗知春，羅志勇. 雌激素受體信號轉導的研究[J].生命的化學，2010, 30(6)：854-858.

[9] 倪 鑫，唐曉露. 17β-羥基類固醇脫氫酶[J]. 生理科學進展，2002, 33(2), 172-175.

[10] Aka JA, Mazumdar M, Chen C Q,etal. 17beta-Hydroxysteroid Dehy-drogenase Type 1 Stimulates Breast Cancer by Dihydrotestosterone Inactivation in Addition to Estradiol Production [J]. Mol Endocrinol, 2010, 24(4): 832-845.

[11] Xu B, Kitawaki J, Koshiba H,etal. Differential effects of progestogens, by type and regimen, on estrogen-metabolizing enzymes in human breast cancer cells [J]. Maturitas, 2007,56(2):142.

(2013-09-03收稿 2013-10-18修回)

(責任編輯 武建虎)

Expressionandsignificanceofestrogenreceptorand17beta-hydroxysteroiddehydrogenase1inendometrialpolyps

XIAO Pei1, ZHANG Cuiling2，SUN Li3, and WANG Shuhe4.
1. Clinical School of Anhui Medical University，Hefei 230000，China; 2．Department of Obstetrics and Gynecology，Chinese Medicine Hospital of Linyi City, Linyi 276003, China; 3．Department of Gynecology and Obstetrics, Hefei Municipal First People’s Hospital, Hefei 230000, China; 4. Department of Gynecology and Obstetrics, Beijing Military Command General Hospital, Beijing 100700, China

ObjectiveTo study the expressions of ER and 17β-HSD1in endometrial polyps, and to clarify the pathogenesis of endometrial polyps in molecular level.MethodsEndometrial polyps from 47 patients were taken as the study group; at the same time, normal endometrial tissue far from endometrial polyps were taken from the same 47 patients as the control group 1 and normal endometria from 50 subjects were taken as the control group 2 who underwent hysteroscopy. Immunohistochemical examination was conducted to detect ER and 17β-HSD1expressions which were compared between the groups.ResultsThe positive expression rate of ER in polyps group was 80.9%, which was 76.6% for 17β-HSD1. The rates were higher than those of the control group(P<0.01). The expressions of ER and 17β-HSD1were related to the risk of endometrial polyps(r=0.619，P<0.01).ConclusionsExcessive expressions of ER and 17β-HSD1in premenopausal endometrial polyps may be the cause of occurrence and development of endometrial polyps.

endometrial polyps；estrogen receptor; 17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1

肖 佩，碩士研究生，E-mail: xiaopei150520@163.com

1. 230000合肥,安徽醫科大學北京軍區總醫院臨床學院；2. 276003，山東省臨沂市中醫醫院婦產科；3. 230000，安徽省合肥市第一人民醫院婦產科； 4. 100700，北京軍區總醫院婦產科

王樹鶴，E-mail：haotongzhi8@sina.com

R711.7