紅汁乳菇與馬尾松幼苗外生菌根合成研究*

薛振文，應國華，呂明亮，李伶俐，高鳳娟

(1.麗水市林業科學研究院，浙江 麗水 323000；2.麗水學院，浙江 麗水 323000)

紅汁乳菇與馬尾松幼苗外生菌根合成研究*

薛振文1，應國華1，呂明亮1，李伶俐1，高鳳娟2**

(1.麗水市林業科學研究院，浙江 麗水 323000；2.麗水學院，浙江 麗水 323000)

采用液體菌劑打孔接種無菌苗的方法，以菌根感染率為評價指標研究了液體菌劑不同接種量、不同季節接種、是否添加營養物對接種效果的影響。結果表明，接種馬尾松無菌苗液體菌劑量為500 mL·箱-1～1 000 mL·箱-1的處理能生產出理想的菌根苗；在春季接種苗木效果比秋季更好；在打孔接種后澆撒營養液菌根感染率明顯高于不澆營養液的處理。

紅汁乳菇；馬尾松；液體菌劑；菌根合成；菌根感染率

紅汁乳菇LactariushatsudakeTanaka是一種外生菌根食用菌，屬于紅菇科、乳菇屬，其味道鮮美，營養豐富，市場上十分走俏。在浙江西南部山區尤其是低山灌叢與針葉林區[1]有子實體自然分布，繁殖季節處于春秋兩季，產量受濕度、溫度和雨量等因素影響，當地農民有采食并市場上交易的習慣。目前紅汁乳菇市場供應全依賴于野生采集，由于過度采摘，導致產地自然資源破壞嚴重，產量逐漸減少。培育出高質量菌根苗是實現紅汁乳菇人工栽培的基礎，筆者已經掌握了培育低成本、高質量的牛肝菌菌根苗技術，并成功人工栽培出褐環粘蓋牛肝菌[2]，應用該套研究方法繼續對紅汁乳菇菌根苗的合成技術進行研究，報道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

紅汁乳菇菌種為麗水市林業科學研究院食用菌研究所在麗水采集、分離、保藏，編號L 5，經中國林業科學研究院熱帶林業研究所梁俊峰博士分子鑒定為紅汁乳菇。取發酵培養好的液體種過濾菌球150 mL，加營養液至500 mL，再加懸浮劑4 g，粉碎拌勻即制成菌劑。

1.2 供試苗木

以播種3個月后的馬尾松無菌苗為接種對象。育苗基質為泥炭、珍珠巖、土，混合后高溫滅菌，裝入經高錳酸鉀消毒過的育苗容器泡沫箱，每箱馬尾松無菌苗為200株左右。

1.3 液體菌劑不同接種量接種效果試驗

液體菌劑接種量設250 mL·箱-1、500 mL·箱-1、 1 000 mL·箱-1、 1 500 mL·箱-1、 2 000 mL·箱-1五個處理，每個處理5個重復。在每個泡沫箱中打25個孔，倒入液體菌劑后澆 1 000 mL營養液。接種9個月后檢查菌根發育情況。

1.4 添加營養物影響菌根合成的試驗

采用液體菌劑打孔接種法接種。接種量500 mL·箱-1，試驗設接種后基質表面澆 1 000 mL營養液和不澆營養液2個處理，每個處理5個重復。接種9個月后檢查菌根發育情況。

1.5 不同季節接種影響菌根合成的試驗

試驗接種季節設在春季3月25日、秋季10月18日，經觀察這兩段時間平均氣溫相差不大。每個季節接種5箱，接種9個月后檢查菌根發育情況。

1.6 統計方法

將菌根感染的多少及強弱，按一定的標準進行統計，以便分析其接種的效果。菌根感染的評價可以按株，也可按根段數來評價。

按株來計算，菌根感染率(P1)公式為：

P1=N1N×100%

式中：N1為感染菌根株數；N為統計總株數。

按根段數來計算，隨機抽取1株苗木，洗凈后將根切成長2 cm根段后統計菌根侵染率。菌根侵染率(P2)公式為：

P2=n1n×100%

式中：n1為侵染菌根根段數；n為總根段數。

菌根侵染率標準可分為5級，1級菌根侵染率1%以下；2級菌根侵染率1%～20%；3級菌根侵染率21%～40%；4級菌根侵染率41%～60%；5級根侵染率61%以上。

2 結果與分析

2.1 液體菌劑不同接種量接種效果試驗

每個處理分別隨機取100株苗木，根據以上菌根統計方法，統計菌根侵染情況，結果見表1。

表1 液體菌劑不同接種量接種效果研究

由表1可知，隨著接種菌劑量增加，感染菌根株樹比例也在增加，分別為57%、79%、92%、95%、98%。接種量超過500 mL·箱-1，感染菌根株樹比例超過80%，基本達到了菌根苗規模化生產要求，是較合適的菌劑接種量。菌劑量超過 1 000 mL·箱-1，感染菌根株樹比例超過90%，接種效果理想，但菌劑量消耗較大。

從菌根侵染率標準不同分級的結果看，接種量為250 mL·箱-1，1級苗所占比例最大，為43%，無5級苗；接種量為500 mL·箱-1，2級和3級苗所占比例大；接種量為 1 000 mL·箱-1，4級苗所占比例高，為38%；接種量為 1 500 mL·箱-1以上，5級苗所占比例高，為54%以上。隨著接種量的增加，優質苗比例也在增加。

菌根侵染率是描述菌根感染多少或強弱的指標，由表1可知，接種量為250 mL·箱-1的處理平均侵染率僅為18.73%，隨著接種量的增加，菌根平均侵染率也在增加，接種量為 2 000 mL·箱-1的處理，平均侵染率高達71.83%。

綜合結果，接種量為250 mL·箱-1的處理，菌根感染株數僅為57%，平均侵染率僅為18.73%，1級苗比例為43%，菌根合成效果不理想。隨著接種量的增加，感染菌根苗的比例增加，優質菌根苗比例也在增加。接種量為 2 000 mL·箱-1的處理，感染菌根苗的比例和優質菌根苗的比例最高，是最理想的菌劑接種量。

2.2 添加營養物對菌根合成率的影響試驗

每個處理分別隨機取100株苗木，根據以上菌根統計方法，統計菌根侵染情況，結果見表2。

表2 添加營養物對菌根合成率的影響試驗

由表2可知，接種菌劑后是否澆營養液，感染菌根株數比例差異比較大，分別為79%和52%；平均侵染率差異也較大，分別為31.3%、16.87%。澆營養液的處理，2級和3級苗所占比例大；不澆營養液的處理，1級苗所占比例明顯較大，高達48%。綜合可知，澆營養液的處理明顯好于不澆營養液的處理。

2.3 不同季節接種對菌根合成率的影響

每個處理分別隨機取100株苗木，根據以上菌根統計方法，統計菌根侵染情況，結果如表3。

表3 同季節接種對菌根合成率的影響研究

由表3可知，在春季和秋季接種，感染菌根株樹比例相差不多，分別為90%和85%，春季接種菌根感染株數略好。

從菌根侵染率苗木分級標準結果看，春季接種，4級苗所占比例最大，為34%；3級以上的苗木占到81%。秋季接種，4級苗所占比例也是最大，為36%；3級以上的苗木占到69%。比較春季、秋季接種，春季接種3級以上的苗木占到的比例明顯高于秋季。

從菌根侵染率指標可知，春季接種苗木平均侵染率為39.33%，秋季接種苗木平均侵染率為31.23%，采用春季接種苗木平均侵染率較高。

綜合比較，春季接種的苗木感染菌根的株數比例和苗木平均侵染率都高于秋季接種，其中3級以上的優質苗木比列也高于秋季接種。分析原因可能是春季氣溫開始回升，菌絲體在基質中能較長時間的生長和存活，增加了菌絲體與根系接觸的時間和機會，能更好地侵染苗木根系。而秋季接種，氣溫逐漸減低，苗木根系和菌絲向休眠的狀態發展，不利于菌絲侵染苗木根系。因而，采用春季接種苗木效果更好。

3 結論與討論

以出菇為目的的菌根苗培育方面，菌根感染率的高低可反應出苗木質量的好壞。菌根感染率越高，苗木質量越好。根據本試驗結果,液體菌劑接種量越多，感染菌根的機會越大，接種效果越好。但考慮到菌劑擴繁周期長和對菌根苗規格的要求，筆者認為接種菌劑量為500 mL·箱-1～1 000 mL·箱-1的處理，即能節省菌劑，又能生產出合格的菌根苗。當然，根據對菌根苗規格的要求，可以增加菌劑的使用量。接種菌劑12個月后觀察發現，接種量少的處理菌根感染率和浸染強度都明顯好于接種9個月后菌根，證明在泡沫箱中培育的菌根菌能較長時間存活或是已經侵染的菌根菌能繼續侵染根系形成菌根。

澆營養液的處理明顯好于不澆營養液的處理，原因是接種菌劑后澆營養液可為菌種在基質中繼續生長提供營養，延長了菌種在基質中的生存時間，也為無菌苗根系與菌絲體充分接觸感染延長了時間和增加了接觸的機會。

春季接種的苗木菌根感染率和侵染強度都高于秋季接種，其中3級以上的優質苗木比例也高于秋季接種。因而，采用春季接種苗木效果更好。

影響菌根合成的因素還有共生樹種選擇、菌根合成基質、宿主苗齡和接種方式[3]、接種菌劑劑型、活力、培育溫度、光照等條件尚需進一步研究。

[1]顧新偉，應國華，宋小亞. 浙南山區大型真菌的主要生態系統及菌物分布[J]. 食藥用菌，2012，20(5)：275-277.

[2]應國華，呂明亮，李伶俐，等. 褐環粘蓋牛肝菌人工栽培技術研究[J]. 中國食用菌，2009，28(5)：4-15.

[3]付紹春，譚琦，陳明杰，等. 美味牛肝菌與馬尾松幼苗無菌條件下的外生菌根合成[J]. 食用菌學報，2009，16(1)：31-36.

Studies on Mycorrhizal Formation ofPinusmassonianaInoculatedLactariushatsudake

XUE Zhen-wen1, YING Guo-hua1, LV Ming-liang1, LI Ling-li1, GAO Feng-juan2

(1.Lishui Forestry Research Institute in Zhejiang, Lishui Zhejiang 323000; 2.Lishui University, Lishui Zhejiang 323000)

The method of punching inoculating sterile seedlings of liquid culture were used, and mycorrhizal infection rate was used as evaluation index. The inoculation results affected by different inoculation quality, different inoculation season, adding nutritional substances or not. The results showed the liquid culture dose of 500 mL·box-1～1 000 mL·box-1inoculated onPinusmassonianasterile seedlings could produce ideal mycorrhizal seedlings. Seedlings inoculated in spring was better than that inoculated in autumnm. The mycorrhizal infection rate of spraying nutritional liquid after punching inoculation was much higher than the treatment which did not spray nutritional liquid.

Lactariushatsudake;Pinusmassoniana; Liquid culture; Mycorrhizal formation; Infective rate of the mycorrhiza

*項目來源：浙江省林業廳項目“紅汁乳菇菌根菌培育造林技術研究與示范”(2010SY06)；浙江省麗水市重點科技創新團隊“牛肝菌等菌根食用菌菌根苗生產關鍵技術研究”(2012cxtd06)。

薛振文(1980-)，男，工程師，主要從事食用菌、外生菌根的研究。

**通信作者：高鳳娟，研究方向為園林和園藝。E-mail: xzw102@163.com

2014-03-15

S646.9

A

1003-8310(2014)03-0018-02