紫外分光光度法測定烏藥中總生物堿含量

張劍等

摘要：用紫外分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。先用索氏提取法提取烏藥中的總生物堿，再以小檗堿為對照品，在pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，以溴甲酚綠指示液為顯色劑，在628 nm波長下利用分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。結果表明，小檗堿對照品在2.0～12.0 mg/L范圍內呈線性關系，回歸方程為D=0.008 2C+0167 1，r=0.999 1，烏藥中的總生物堿含量為0.301 4%。本方法操作簡便、迅速，測定結果準確、可靠。

關鍵詞：烏藥；總生物堿；分光光度法

中圖分類號：R284.1；O657.32 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2014）03-0266-02

烏藥[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒屬（Lindera）植物，為傳統的理氣止痛藥[1]，具有溫中散寒、理氣止痛的功效，最早記載于唐代陳藏器《本草拾遺》。現代藥理學研究表明，烏藥具有廣泛的藥理活性[2-3]。烏藥根的主要有效成分為異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜[4]，其中生物堿和呋喃倍半萜及其內酯類成分是烏藥的特征性成分[5-7]，具有較強的專屬性，也具有一定的活性。為了確保烏藥的質量標準評價有具體的量化指標，根據烏藥中所含成分的特點，本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的生物堿含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

主要儀器：紫外可見分光光度計（尤尼柯UV-4802）；98-1-C數顯控溫電熱套（天津泰斯特）；索式提取器；電子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚綠（AR）；小檗堿標準品（成都領航者生物技術有限公司）；pH值45的醋酸-醋酸鈉緩沖液；0.01 mol/L氫氧化鈉溶液（用乙醇溶解）。

試驗所用中藥材烏藥樣品采自江西贛南。

1.2 試驗方法

本研究所用試驗方法參照文獻[8-10]的方法并加以改進。

1.2.1 緩沖液的配制 pH值4.5緩沖液的配制：將 0.2 mol/L 氫氧化鈉滴加至冰醋酸中，調節pH值為45，即得醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。0.04%溴甲酚綠溶液的配制：稱取40 mg溴甲酚綠，加100 mL pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液溶解，過濾。

1.2.2 標準曲線的制備 稱取2 mg干燥至恒重的小檗堿對照品于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，搖勻。分別取1.2、2.4、3.6、4.8、6.0、7.2 mL標準溶液于 20 mL 量瓶中，用三氯甲烷稀釋至10 mL，分別加入5.0 mL pH值為45的緩沖液、2.0 mL 0.04%溴甲酚綠溶液，劇烈振搖5 min后靜置30 min。取5 mL下層液體，加入1.0 mL 0.01 mol/L 氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測吸光度。以小檗堿含量（C）為橫坐標，吸光度（D）為縱坐標制作標準曲線，得回歸方程。

1.2.3 空白溶液的制備 取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）、2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min。取 5 mL 下層液，加入1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液搖勻，作為空白溶液。

1.2.4 烏藥中總生物堿的提取 準確稱取0.5 g烏藥，用適量氨水濕潤后密封放置30 min，索式提取2 h后將提取液置于TLC（薄層色譜），滴加碘化鉍鉀溶液至不顯色為止；回收三氯甲烷，將殘留物放冷至室溫，再用三氯甲烷溶解并定容至20 mL。分別取 0.2 mL 提取物于量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混勻作為樣品液。分別取10 mL樣品液于3個20 mL容量瓶中，再分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）和2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min；取5 mL下層液，加 1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測定吸光度，計算生物堿含量與回收率，回收率計算公式為：

3 結論

本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的總生物堿含量，其原理是生物堿鹽的陽離子與酸性染料的陰離子定量結合生成有色的絡合物，可以定量地被某種有機溶劑萃取，因此通過測定萃取液的吸光度可以測定藥材中總生物堿含量。在本試驗中采用的生物堿的酸性染料為溴甲酚綠。同時考察了本方法的線性范圍、穩定性、精密度、回收率，結果表明本方法符合紫外可見分光光度法的測試條件，可以作為烏藥中總生物堿含量的測試方法。

生物堿大多具有復雜的環狀結構，具有顯著的生物活性，是烏藥中重要的有效成分。本試驗測得烏藥中總生物堿含量為0.301 4%（n=3）。本試驗建立的烏藥中總生物堿含量的測試方法可以為烏藥種源質量的篩選提供試驗方法和參考依據。

參考文獻：

[1]肖培根. 新編中藥志[M]. 北京：化學工業出版社，2002：230.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[S]. 北京：化學工業出版社，2005：53.

[3]中國醫學科學院藥物研究所.中藥志：第二冊[M]. 北京：人民衛生出版社，1981：926.

[4]程顯隆，魏 鋒，馮玉飛，等. RP-HPLC法測定烏藥中烏藥醚內酯和烏藥內酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2003，23（3）：225-227.

[5]許海丹，顧霞敏，葉文國. 烏藥化學成分的分布特性研究[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（1）：100-101.

[6]Han Z，Zheng Y，Chen N，et al. Simultaneous determination of four alkaloids in Lindera aggregata by ultra-high-pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A，2008，1212（1/2）：76-81.

[7]Gan L S，Yao W，Mo J X，et al. Alkaloids from Lindera aggregata[J]. Natural Product Communications，2009，4（1）：43-46.

[8]蔣愛芳，楊義芳，黃文武. 酸性染料比色法測定總生物堿的研究進展[J]. 中草藥，2006，37（增刊）：359-362.

[9]蔡大可，李 耿，彭紹忠，等. 酸性染料比色法測定痹痛消膏中烏頭生物堿的含量[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2007，18（1）：57-59.

[10]敖茂宏，劉 海，吳明開. 酸性染料比色法測定不同產地流蘇石斛中總生物堿的含量[J]. 江蘇農業科學，2012，40（10）：282-283.endprint

摘要：用紫外分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。先用索氏提取法提取烏藥中的總生物堿，再以小檗堿為對照品，在pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，以溴甲酚綠指示液為顯色劑，在628 nm波長下利用分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。結果表明，小檗堿對照品在2.0～12.0 mg/L范圍內呈線性關系，回歸方程為D=0.008 2C+0167 1，r=0.999 1，烏藥中的總生物堿含量為0.301 4%。本方法操作簡便、迅速，測定結果準確、可靠。

關鍵詞：烏藥；總生物堿；分光光度法

中圖分類號：R284.1；O657.32 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2014）03-0266-02

烏藥[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒屬（Lindera）植物，為傳統的理氣止痛藥[1]，具有溫中散寒、理氣止痛的功效，最早記載于唐代陳藏器《本草拾遺》。現代藥理學研究表明，烏藥具有廣泛的藥理活性[2-3]。烏藥根的主要有效成分為異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜[4]，其中生物堿和呋喃倍半萜及其內酯類成分是烏藥的特征性成分[5-7]，具有較強的專屬性，也具有一定的活性。為了確保烏藥的質量標準評價有具體的量化指標，根據烏藥中所含成分的特點，本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的生物堿含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

主要儀器：紫外可見分光光度計（尤尼柯UV-4802）；98-1-C數顯控溫電熱套（天津泰斯特）；索式提取器；電子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚綠（AR）；小檗堿標準品（成都領航者生物技術有限公司）；pH值45的醋酸-醋酸鈉緩沖液；0.01 mol/L氫氧化鈉溶液（用乙醇溶解）。

試驗所用中藥材烏藥樣品采自江西贛南。

1.2 試驗方法

本研究所用試驗方法參照文獻[8-10]的方法并加以改進。

1.2.1 緩沖液的配制 pH值4.5緩沖液的配制：將 0.2 mol/L 氫氧化鈉滴加至冰醋酸中，調節pH值為45，即得醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。0.04%溴甲酚綠溶液的配制：稱取40 mg溴甲酚綠，加100 mL pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液溶解，過濾。

1.2.2 標準曲線的制備 稱取2 mg干燥至恒重的小檗堿對照品于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，搖勻。分別取1.2、2.4、3.6、4.8、6.0、7.2 mL標準溶液于 20 mL 量瓶中，用三氯甲烷稀釋至10 mL，分別加入5.0 mL pH值為45的緩沖液、2.0 mL 0.04%溴甲酚綠溶液，劇烈振搖5 min后靜置30 min。取5 mL下層液體，加入1.0 mL 0.01 mol/L 氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測吸光度。以小檗堿含量（C）為橫坐標，吸光度（D）為縱坐標制作標準曲線，得回歸方程。

1.2.3 空白溶液的制備 取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）、2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min。取 5 mL 下層液，加入1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液搖勻，作為空白溶液。

1.2.4 烏藥中總生物堿的提取 準確稱取0.5 g烏藥，用適量氨水濕潤后密封放置30 min，索式提取2 h后將提取液置于TLC（薄層色譜），滴加碘化鉍鉀溶液至不顯色為止；回收三氯甲烷，將殘留物放冷至室溫，再用三氯甲烷溶解并定容至20 mL。分別取 0.2 mL 提取物于量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混勻作為樣品液。分別取10 mL樣品液于3個20 mL容量瓶中，再分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）和2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min；取5 mL下層液，加 1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測定吸光度，計算生物堿含量與回收率，回收率計算公式為：

3 結論

本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的總生物堿含量，其原理是生物堿鹽的陽離子與酸性染料的陰離子定量結合生成有色的絡合物，可以定量地被某種有機溶劑萃取，因此通過測定萃取液的吸光度可以測定藥材中總生物堿含量。在本試驗中采用的生物堿的酸性染料為溴甲酚綠。同時考察了本方法的線性范圍、穩定性、精密度、回收率，結果表明本方法符合紫外可見分光光度法的測試條件，可以作為烏藥中總生物堿含量的測試方法。

生物堿大多具有復雜的環狀結構，具有顯著的生物活性，是烏藥中重要的有效成分。本試驗測得烏藥中總生物堿含量為0.301 4%（n=3）。本試驗建立的烏藥中總生物堿含量的測試方法可以為烏藥種源質量的篩選提供試驗方法和參考依據。

參考文獻：

[1]肖培根. 新編中藥志[M]. 北京：化學工業出版社，2002：230.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[S]. 北京：化學工業出版社，2005：53.

[3]中國醫學科學院藥物研究所.中藥志：第二冊[M]. 北京：人民衛生出版社，1981：926.

[4]程顯隆，魏 鋒，馮玉飛，等. RP-HPLC法測定烏藥中烏藥醚內酯和烏藥內酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2003，23（3）：225-227.

[5]許海丹，顧霞敏，葉文國. 烏藥化學成分的分布特性研究[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（1）：100-101.

[6]Han Z，Zheng Y，Chen N，et al. Simultaneous determination of four alkaloids in Lindera aggregata by ultra-high-pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A，2008，1212（1/2）：76-81.

[7]Gan L S，Yao W，Mo J X，et al. Alkaloids from Lindera aggregata[J]. Natural Product Communications，2009，4（1）：43-46.

[8]蔣愛芳，楊義芳，黃文武. 酸性染料比色法測定總生物堿的研究進展[J]. 中草藥，2006，37（增刊）：359-362.

[9]蔡大可，李 耿，彭紹忠，等. 酸性染料比色法測定痹痛消膏中烏頭生物堿的含量[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2007，18（1）：57-59.

[10]敖茂宏，劉 海，吳明開. 酸性染料比色法測定不同產地流蘇石斛中總生物堿的含量[J]. 江蘇農業科學，2012，40（10）：282-283.endprint

摘要：用紫外分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。先用索氏提取法提取烏藥中的總生物堿，再以小檗堿為對照品，在pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，以溴甲酚綠指示液為顯色劑，在628 nm波長下利用分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。結果表明，小檗堿對照品在2.0～12.0 mg/L范圍內呈線性關系，回歸方程為D=0.008 2C+0167 1，r=0.999 1，烏藥中的總生物堿含量為0.301 4%。本方法操作簡便、迅速，測定結果準確、可靠。

關鍵詞：烏藥；總生物堿；分光光度法

中圖分類號：R284.1；O657.32 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2014）03-0266-02

烏藥[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒屬（Lindera）植物，為傳統的理氣止痛藥[1]，具有溫中散寒、理氣止痛的功效，最早記載于唐代陳藏器《本草拾遺》。現代藥理學研究表明，烏藥具有廣泛的藥理活性[2-3]。烏藥根的主要有效成分為異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜[4]，其中生物堿和呋喃倍半萜及其內酯類成分是烏藥的特征性成分[5-7]，具有較強的專屬性，也具有一定的活性。為了確保烏藥的質量標準評價有具體的量化指標，根據烏藥中所含成分的特點，本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的生物堿含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

主要儀器：紫外可見分光光度計（尤尼柯UV-4802）；98-1-C數顯控溫電熱套（天津泰斯特）；索式提取器；電子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚綠（AR）；小檗堿標準品（成都領航者生物技術有限公司）；pH值45的醋酸-醋酸鈉緩沖液；0.01 mol/L氫氧化鈉溶液（用乙醇溶解）。

試驗所用中藥材烏藥樣品采自江西贛南。

1.2 試驗方法

本研究所用試驗方法參照文獻[8-10]的方法并加以改進。

1.2.1 緩沖液的配制 pH值4.5緩沖液的配制：將 0.2 mol/L 氫氧化鈉滴加至冰醋酸中，調節pH值為45，即得醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。0.04%溴甲酚綠溶液的配制：稱取40 mg溴甲酚綠，加100 mL pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液溶解，過濾。

1.2.2 標準曲線的制備 稱取2 mg干燥至恒重的小檗堿對照品于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，搖勻。分別取1.2、2.4、3.6、4.8、6.0、7.2 mL標準溶液于 20 mL 量瓶中，用三氯甲烷稀釋至10 mL，分別加入5.0 mL pH值為45的緩沖液、2.0 mL 0.04%溴甲酚綠溶液，劇烈振搖5 min后靜置30 min。取5 mL下層液體，加入1.0 mL 0.01 mol/L 氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測吸光度。以小檗堿含量（C）為橫坐標，吸光度（D）為縱坐標制作標準曲線，得回歸方程。

1.2.3 空白溶液的制備 取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）、2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min。取 5 mL 下層液，加入1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液搖勻，作為空白溶液。

1.2.4 烏藥中總生物堿的提取 準確稱取0.5 g烏藥，用適量氨水濕潤后密封放置30 min，索式提取2 h后將提取液置于TLC（薄層色譜），滴加碘化鉍鉀溶液至不顯色為止；回收三氯甲烷，將殘留物放冷至室溫，再用三氯甲烷溶解并定容至20 mL。分別取 0.2 mL 提取物于量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混勻作為樣品液。分別取10 mL樣品液于3個20 mL容量瓶中，再分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）和2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min；取5 mL下層液，加 1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測定吸光度，計算生物堿含量與回收率，回收率計算公式為：

3 結論

本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的總生物堿含量，其原理是生物堿鹽的陽離子與酸性染料的陰離子定量結合生成有色的絡合物，可以定量地被某種有機溶劑萃取，因此通過測定萃取液的吸光度可以測定藥材中總生物堿含量。在本試驗中采用的生物堿的酸性染料為溴甲酚綠。同時考察了本方法的線性范圍、穩定性、精密度、回收率，結果表明本方法符合紫外可見分光光度法的測試條件，可以作為烏藥中總生物堿含量的測試方法。

生物堿大多具有復雜的環狀結構，具有顯著的生物活性，是烏藥中重要的有效成分。本試驗測得烏藥中總生物堿含量為0.301 4%（n=3）。本試驗建立的烏藥中總生物堿含量的測試方法可以為烏藥種源質量的篩選提供試驗方法和參考依據。

參考文獻：

[1]肖培根. 新編中藥志[M]. 北京：化學工業出版社，2002：230.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[S]. 北京：化學工業出版社，2005：53.

[3]中國醫學科學院藥物研究所.中藥志：第二冊[M]. 北京：人民衛生出版社，1981：926.

[4]程顯隆，魏 鋒，馮玉飛，等. RP-HPLC法測定烏藥中烏藥醚內酯和烏藥內酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2003，23（3）：225-227.

[5]許海丹，顧霞敏，葉文國. 烏藥化學成分的分布特性研究[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（1）：100-101.

[6]Han Z，Zheng Y，Chen N，et al. Simultaneous determination of four alkaloids in Lindera aggregata by ultra-high-pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A，2008，1212（1/2）：76-81.

[7]Gan L S，Yao W，Mo J X，et al. Alkaloids from Lindera aggregata[J]. Natural Product Communications，2009，4（1）：43-46.

[8]蔣愛芳，楊義芳，黃文武. 酸性染料比色法測定總生物堿的研究進展[J]. 中草藥，2006，37（增刊）：359-362.

[9]蔡大可，李 耿，彭紹忠，等. 酸性染料比色法測定痹痛消膏中烏頭生物堿的含量[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2007，18（1）：57-59.

[10]敖茂宏，劉 海，吳明開. 酸性染料比色法測定不同產地流蘇石斛中總生物堿的含量[J]. 江蘇農業科學，2012，40（10）：282-283.endprint