11種殺菌劑對白術根腐病病菌的室內毒力測定

陳小均等

摘要：為篩選高效、安全的殺菌劑用于生產防治，采用菌絲生長速率法在室內進行了11種殺菌劑對白術根腐病病原菌的毒力測定。篩選出了6種殺菌劑對Fusarium oxysporum菌絲有顯著的抑制作用，其毒力順序為：25%咪鮮胺乳油>1%申嗪霉素懸浮劑>30%氟菌唑可濕性粉劑>43%戊唑醇懸浮劑>10%苯醚甲環唑水分散粒劑>50%多菌靈可濕性粉劑；EC50-EC90分別為0020 9 μg/mL-0.305 3 μg/mL、0.100 7 μg/mL-3.851 2 μg/mL、0.153 9 μg/mL-8.380 9 μg/mL、0.235 5 μg/mL-5.029 6 μg/mL、0.337 μg/mL-83766 μg/mL和0.998 3 μg/mL-1.882 4 μg/mL。F. oxysporum對50%多菌靈可濕性粉劑敏感。

關鍵詞：殺菌劑；白術根腐病；尖孢鐮刀菌；毒力測定

中圖分類號： S435.672 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）03-0084-02

白術（Atractylodes macrocephala Koidz.）屬菊科草本植物，被列為中醫四大名貴藥材之一，主要以根入藥，具有健脾益氣、燥濕利水之功效[1]。近年來，貴州省白術種植面積不斷擴大，由于連作，導致白術根腐病發生日趨嚴重，成為白術生產栽培中主要的病害之一。白術根腐病主要病原菌為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）[2-4]，引起干腐。然而，劉英慧等[3]、臧少先等[4]、段明華等[5]報道還包括半裸鐮刀菌（F.semitectum）、茄病鐮刀菌（F.solani）、燕麥鐮刀菌（F.avenaceum）、木賊鐮刀菌（F. equiseti）、串珠鐮刀菌（F. moniliforme Sheldon）和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）等病原，常引起根莖腐爛致死苗，重病田塊死苗率高達80%以上，嚴重制約了貴州白術產業的發展。為了篩選出防治白術根腐病的殺菌劑，本試驗在室內選擇了幾種殺菌劑對F. osysporum進行了毒力測定，為田間防治提供依據。

1 材料方法

1.1 供試病原菌

白術根腐病標樣采自貴州省開陽縣，用組織分離法[6]獲得病原菌。在PDA培養基上進行培養，純化后將試管保存于4 ℃下備用。經鑒定為尖孢鐮刀菌F. oxysporum。

1.2 供試藥劑

供試藥劑共11種，藥劑名稱、生產廠家及試驗濃度詳見表1。

1.3 毒力測定

利用生長速率法對菌絲生長進行室內毒力測定。確定藥劑試驗濃度后并配制供試藥劑母液，按照系列稀釋的方法將供試藥劑加入溶化并冷卻至60 ℃左右的PDA培養基中，搖勻后制成不同濃度梯度（表1）的含藥平板。

將待測定菌株接種于PDA平板上于28 ℃培養4 d，用打孔器在菌落邊緣打塊，菌餅直徑為5 mm，將這些菌餅轉接于有毒培養基中央，帶菌絲一面朝下，以加等量無菌水的PDA培養基為空白對照。每個藥劑設6個處理，4次重復，28 ℃恒溫培養5 d，待對照的菌落接近長滿培養皿，用“十”字交叉法測量各處理菌落直徑，取平均值，計算抑制率。利用統計軟件DPS 7.05進行統計分析，將數據轉換成幾率值作為縱坐標，以藥劑濃度對數為橫坐標，求毒力回歸方程、相關系數（r），計算出各藥劑對病原菌的抑制中濃度 EC50和EC90。

1.4 計算公式

抑制率=（對照菌落直徑-5 mm）-（處理菌落直徑-5 mm）對照菌落直徑-5 mm×100%

2 結果與分析

2.1 不同殺菌劑對白術根腐病尖孢鐮刀菌的毒力活性

供試藥劑對白術根腐病菌F. osysporum表現出一定的毒力作用。結果（表2）顯示，不同殺菌劑或同一殺菌劑的不同處理濃度之間均表現出不同的殺菌效果，相關系數均達到顯著水平。25%咪鮮胺乳油、1%申嗪霉素懸浮劑、10%苯醚甲唑水分散粒劑、30%氟菌唑可濕性粉劑、43%戊唑醇懸浮劑和50%多菌靈可濕性粉劑等6種殺菌劑對白術根腐病菌表現出較強的毒力活性，EC50、EC90分別為0.020 9、0.305 3 μg/mL，0100 7、3.851 2 μg/mL，0.337、3.766 μg/mL，0.153 9、8.380 9 μg/mL，0.235 5、5.029 6 μg/mL，0.998 3、1.882 4 μg/mL。其中25%咪鮮胺乳油對白術根腐病菌的毒力最強，毒力回歸方程為y=1.099 8x+6.848 4；其次，1%申嗪霉素懸浮劑，毒力回歸方程為y=0.809 7x+5807 4。

2.2 白術根腐病菌F. oxysporum對殺菌劑敏感性比較

表1和圖1的EC50值及斜率綜合結果表明，F. oxysporum對多種殺菌劑均有不同程度的敏感性，其中50%多菌靈可濕性粉劑的斜率最大，表明F. oxysporum對其敏感性最強；對25%咪鮮胺乳油、1%申嗪霉素懸浮劑、30%氟菌唑可濕性粉劑、43%戊唑醇懸浮劑和10%苯醚甲環唑水分散粒劑的EC50和斜率比較接近，表明這4種藥劑對白術根腐病菌的毒力相當。雖然24%噻呋酰胺懸浮劑和45%敵磺鈉可濕性粉劑的斜率較大，但EC50非常大，表明病原菌對這2種藥的敏感性較弱，對菌絲的抑制能力不理想。

3 討論

試驗結果表明，供試藥劑中有6種殺菌劑對白術根腐病菌有很強的毒力活性，從EC50數值來看，不同殺菌劑的毒力依次為：25%咪鮮胺乳油>1%申嗪霉素懸浮劑>30%氟菌唑可濕性粉劑>43%戊唑醇懸浮劑>10%苯醚甲唑水分散粒劑>50%多菌靈可濕性粉劑。其中，25%咪鮮胺乳油對F. oxysporum菌絲的抑制效果最好；其次，為1%申嗪霉素懸浮劑。以上6種殺菌劑均為高效、低毒、低殘留和廣譜等特點，為了防止連續單一用藥使病原產生抗藥性的風險，因此應根據這些藥的作用機制不同進行輪流施用，以延緩病原菌抗藥性的產生。

化學防治是農業病害控制一種重要的防治措施，然而，白術作為特殊的經濟作物，對農藥的殘留要求很嚴格。但是選擇適宜的防治時間和防治方法，可以有效地防治白術根腐病等土傳病害，同時也可以降低農藥在白術中的殘留。引起白術根腐病的病原較為復雜，因此應選殺菌譜較廣的殺菌劑才能有效控制不同病原。土壤帶菌和白術栽培材料帶菌是引起白術根腐病的初侵染源，對土壤和白術栽培材料進行藥劑處理，減少初侵染源是有效的防治技術。結合生態學考慮，以農業防治技術為主，合理運用化學、生物防治技術實行綜合防治，達到控制病害的目的。

本研究在室內采用病原菌菌絲生長速率法進行毒力測定，但是在大田中環境條件復雜，因此，篩選出的藥劑劑量直接應用于大田防治有無明顯的防治效果，尚需進一步試驗研究。

參考文獻：

[1]朱意麟，易 蔚，黃克南. 新編中草藥彩色圖譜[M]. 北京：化學工業出版社，2011：495.

[2]俞永信. 白術根腐病及其防治[J]. 中草藥，1980，11（2）：81-82.

[3]劉英慧，趙來順.白術根腐病研究初報[J]. 植物病理學報，1991，1（1）：38.

[4]臧少先，安信伯，石麗軍，等. 白術根腐病癥狀類型及病原鑒定[J]. 河北農業大學學報，2005，28（3）：73-76.

[5]段明華，原雅玲，趙錦麗，等. 白術根莖腐爛與栽培措施的相關性[J]. 西北植物學報，1996，16（5）：24-27.

[6]方中達. 植病研究方法[M]. 北京：中國農業出版社，1998：122.

摘要：為篩選高效、安全的殺菌劑用于生產防治，采用菌絲生長速率法在室內進行了11種殺菌劑對白術根腐病病原菌的毒力測定。篩選出了6種殺菌劑對Fusarium oxysporum菌絲有顯著的抑制作用，其毒力順序為：25%咪鮮胺乳油>1%申嗪霉素懸浮劑>30%氟菌唑可濕性粉劑>43%戊唑醇懸浮劑>10%苯醚甲環唑水分散粒劑>50%多菌靈可濕性粉劑；EC50-EC90分別為0020 9 μg/mL-0.305 3 μg/mL、0.100 7 μg/mL-3.851 2 μg/mL、0.153 9 μg/mL-8.380 9 μg/mL、0.235 5 μg/mL-5.029 6 μg/mL、0.337 μg/mL-83766 μg/mL和0.998 3 μg/mL-1.882 4 μg/mL。F. oxysporum對50%多菌靈可濕性粉劑敏感。

關鍵詞：殺菌劑；白術根腐??；尖孢鐮刀菌；毒力測定

中圖分類號： S435.672 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）03-0084-02

白術（Atractylodes macrocephala Koidz.）屬菊科草本植物，被列為中醫四大名貴藥材之一，主要以根入藥，具有健脾益氣、燥濕利水之功效[1]。近年來，貴州省白術種植面積不斷擴大，由于連作，導致白術根腐病發生日趨嚴重，成為白術生產栽培中主要的病害之一。白術根腐病主要病原菌為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）[2-4]，引起干腐。然而，劉英慧等[3]、臧少先等[4]、段明華等[5]報道還包括半裸鐮刀菌（F.semitectum）、茄病鐮刀菌（F.solani）、燕麥鐮刀菌（F.avenaceum）、木賊鐮刀菌（F. equiseti）、串珠鐮刀菌（F. moniliforme Sheldon）和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）等病原，常引起根莖腐爛致死苗，重病田塊死苗率高達80%以上，嚴重制約了貴州白術產業的發展。為了篩選出防治白術根腐病的殺菌劑，本試驗在室內選擇了幾種殺菌劑對F. osysporum進行了毒力測定，為田間防治提供依據。

1 材料方法

1.1 供試病原菌

白術根腐病標樣采自貴州省開陽縣，用組織分離法[6]獲得病原菌。在PDA培養基上進行培養，純化后將試管保存于4 ℃下備用。經鑒定為尖孢鐮刀菌F. oxysporum。

1.2 供試藥劑

供試藥劑共11種，藥劑名稱、生產廠家及試驗濃度詳見表1。

1.3 毒力測定

利用生長速率法對菌絲生長進行室內毒力測定。確定藥劑試驗濃度后并配制供試藥劑母液，按照系列稀釋的方法將供試藥劑加入溶化并冷卻至60 ℃左右的PDA培養基中，搖勻后制成不同濃度梯度（表1）的含藥平板。

將待測定菌株接種于PDA平板上于28 ℃培養4 d，用打孔器在菌落邊緣打塊，菌餅直徑為5 mm，將這些菌餅轉接于有毒培養基中央，帶菌絲一面朝下，以加等量無菌水的PDA培養基為空白對照。每個藥劑設6個處理，4次重復，28 ℃恒溫培養5 d，待對照的菌落接近長滿培養皿，用“十”字交叉法測量各處理菌落直徑，取平均值，計算抑制率。利用統計軟件DPS 7.05進行統計分析，將數據轉換成幾率值作為縱坐標，以藥劑濃度對數為橫坐標，求毒力回歸方程、相關系數（r），計算出各藥劑對病原菌的抑制中濃度 EC50和EC90。

1.4 計算公式

抑制率=（對照菌落直徑-5 mm）-（處理菌落直徑-5 mm）對照菌落直徑-5 mm×100%

2 結果與分析

2.1 不同殺菌劑對白術根腐病尖孢鐮刀菌的毒力活性

供試藥劑對白術根腐病菌F. osysporum表現出一定的毒力作用。結果（表2）顯示，不同殺菌劑或同一殺菌劑的不同處理濃度之間均表現出不同的殺菌效果，相關系數均達到顯著水平。25%咪鮮胺乳油、1%申嗪霉素懸浮劑、10%苯醚甲唑水分散粒劑、30%氟菌唑可濕性粉劑、43%戊唑醇懸浮劑和50%多菌靈可濕性粉劑等6種殺菌劑對白術根腐病菌表現出較強的毒力活性，EC50、EC90分別為0.020 9、0.305 3 μg/mL，0100 7、3.851 2 μg/mL，0.337、3.766 μg/mL，0.153 9、8.380 9 μg/mL，0.235 5、5.029 6 μg/mL，0.998 3、1.882 4 μg/mL。其中25%咪鮮胺乳油對白術根腐病菌的毒力最強，毒力回歸方程為y=1.099 8x+6.848 4；其次，1%申嗪霉素懸浮劑，毒力回歸方程為y=0.809 7x+5807 4。

2.2 白術根腐病菌F. oxysporum對殺菌劑敏感性比較

表1和圖1的EC50值及斜率綜合結果表明，F. oxysporum對多種殺菌劑均有不同程度的敏感性，其中50%多菌靈可濕性粉劑的斜率最大，表明F. oxysporum對其敏感性最強；對25%咪鮮胺乳油、1%申嗪霉素懸浮劑、30%氟菌唑可濕性粉劑、43%戊唑醇懸浮劑和10%苯醚甲環唑水分散粒劑的EC50和斜率比較接近，表明這4種藥劑對白術根腐病菌的毒力相當。雖然24%噻呋酰胺懸浮劑和45%敵磺鈉可濕性粉劑的斜率較大，但EC50非常大，表明病原菌對這2種藥的敏感性較弱，對菌絲的抑制能力不理想。

3 討論

試驗結果表明，供試藥劑中有6種殺菌劑對白術根腐病菌有很強的毒力活性，從EC50數值來看，不同殺菌劑的毒力依次為：25%咪鮮胺乳油>1%申嗪霉素懸浮劑>30%氟菌唑可濕性粉劑>43%戊唑醇懸浮劑>10%苯醚甲唑水分散粒劑>50%多菌靈可濕性粉劑。其中，25%咪鮮胺乳油對F. oxysporum菌絲的抑制效果最好；其次，為1%申嗪霉素懸浮劑。以上6種殺菌劑均為高效、低毒、低殘留和廣譜等特點，為了防止連續單一用藥使病原產生抗藥性的風險，因此應根據這些藥的作用機制不同進行輪流施用，以延緩病原菌抗藥性的產生。

化學防治是農業病害控制一種重要的防治措施，然而，白術作為特殊的經濟作物，對農藥的殘留要求很嚴格。但是選擇適宜的防治時間和防治方法，可以有效地防治白術根腐病等土傳病害，同時也可以降低農藥在白術中的殘留。引起白術根腐病的病原較為復雜，因此應選殺菌譜較廣的殺菌劑才能有效控制不同病原。土壤帶菌和白術栽培材料帶菌是引起白術根腐病的初侵染源，對土壤和白術栽培材料進行藥劑處理，減少初侵染源是有效的防治技術。結合生態學考慮，以農業防治技術為主，合理運用化學、生物防治技術實行綜合防治，達到控制病害的目的。

本研究在室內采用病原菌菌絲生長速率法進行毒力測定，但是在大田中環境條件復雜，因此，篩選出的藥劑劑量直接應用于大田防治有無明顯的防治效果，尚需進一步試驗研究。

參考文獻：

[1]朱意麟，易 蔚，黃克南. 新編中草藥彩色圖譜[M]. 北京：化學工業出版社，2011：495.

[2]俞永信. 白術根腐病及其防治[J]. 中草藥，1980，11（2）：81-82.

[3]劉英慧，趙來順.白術根腐病研究初報[J]. 植物病理學報，1991，1（1）：38.

[4]臧少先，安信伯，石麗軍，等. 白術根腐病癥狀類型及病原鑒定[J]. 河北農業大學學報，2005，28（3）：73-76.

[5]段明華，原雅玲，趙錦麗，等. 白術根莖腐爛與栽培措施的相關性[J]. 西北植物學報，1996，16（5）：24-27.

[6]方中達. 植病研究方法[M]. 北京：中國農業出版社，1998：122.

摘要：為篩選高效、安全的殺菌劑用于生產防治，采用菌絲生長速率法在室內進行了11種殺菌劑對白術根腐病病原菌的毒力測定。篩選出了6種殺菌劑對Fusarium oxysporum菌絲有顯著的抑制作用，其毒力順序為：25%咪鮮胺乳油>1%申嗪霉素懸浮劑>30%氟菌唑可濕性粉劑>43%戊唑醇懸浮劑>10%苯醚甲環唑水分散粒劑>50%多菌靈可濕性粉劑；EC50-EC90分別為0020 9 μg/mL-0.305 3 μg/mL、0.100 7 μg/mL-3.851 2 μg/mL、0.153 9 μg/mL-8.380 9 μg/mL、0.235 5 μg/mL-5.029 6 μg/mL、0.337 μg/mL-83766 μg/mL和0.998 3 μg/mL-1.882 4 μg/mL。F. oxysporum對50%多菌靈可濕性粉劑敏感。

關鍵詞：殺菌劑；白術根腐病；尖孢鐮刀菌；毒力測定

中圖分類號： S435.672 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）03-0084-02

白術（Atractylodes macrocephala Koidz.）屬菊科草本植物，被列為中醫四大名貴藥材之一，主要以根入藥，具有健脾益氣、燥濕利水之功效[1]。近年來，貴州省白術種植面積不斷擴大，由于連作，導致白術根腐病發生日趨嚴重，成為白術生產栽培中主要的病害之一。白術根腐病主要病原菌為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）[2-4]，引起干腐。然而，劉英慧等[3]、臧少先等[4]、段明華等[5]報道還包括半裸鐮刀菌（F.semitectum）、茄病鐮刀菌（F.solani）、燕麥鐮刀菌（F.avenaceum）、木賊鐮刀菌（F. equiseti）、串珠鐮刀菌（F. moniliforme Sheldon）和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）等病原，常引起根莖腐爛致死苗，重病田塊死苗率高達80%以上，嚴重制約了貴州白術產業的發展。為了篩選出防治白術根腐病的殺菌劑，本試驗在室內選擇了幾種殺菌劑對F. osysporum進行了毒力測定，為田間防治提供依據。

1 材料方法

1.1 供試病原菌

白術根腐病標樣采自貴州省開陽縣，用組織分離法[6]獲得病原菌。在PDA培養基上進行培養，純化后將試管保存于4 ℃下備用。經鑒定為尖孢鐮刀菌F. oxysporum。

1.2 供試藥劑

供試藥劑共11種，藥劑名稱、生產廠家及試驗濃度詳見表1。

1.3 毒力測定

利用生長速率法對菌絲生長進行室內毒力測定。確定藥劑試驗濃度后并配制供試藥劑母液，按照系列稀釋的方法將供試藥劑加入溶化并冷卻至60 ℃左右的PDA培養基中，搖勻后制成不同濃度梯度（表1）的含藥平板。

將待測定菌株接種于PDA平板上于28 ℃培養4 d，用打孔器在菌落邊緣打塊，菌餅直徑為5 mm，將這些菌餅轉接于有毒培養基中央，帶菌絲一面朝下，以加等量無菌水的PDA培養基為空白對照。每個藥劑設6個處理，4次重復，28 ℃恒溫培養5 d，待對照的菌落接近長滿培養皿，用“十”字交叉法測量各處理菌落直徑，取平均值，計算抑制率。利用統計軟件DPS 7.05進行統計分析，將數據轉換成幾率值作為縱坐標，以藥劑濃度對數為橫坐標，求毒力回歸方程、相關系數（r），計算出各藥劑對病原菌的抑制中濃度 EC50和EC90。

1.4 計算公式

抑制率=（對照菌落直徑-5 mm）-（處理菌落直徑-5 mm）對照菌落直徑-5 mm×100%

2 結果與分析

2.1 不同殺菌劑對白術根腐病尖孢鐮刀菌的毒力活性

供試藥劑對白術根腐病菌F. osysporum表現出一定的毒力作用。結果（表2）顯示，不同殺菌劑或同一殺菌劑的不同處理濃度之間均表現出不同的殺菌效果，相關系數均達到顯著水平。25%咪鮮胺乳油、1%申嗪霉素懸浮劑、10%苯醚甲唑水分散粒劑、30%氟菌唑可濕性粉劑、43%戊唑醇懸浮劑和50%多菌靈可濕性粉劑等6種殺菌劑對白術根腐病菌表現出較強的毒力活性，EC50、EC90分別為0.020 9、0.305 3 μg/mL，0100 7、3.851 2 μg/mL，0.337、3.766 μg/mL，0.153 9、8.380 9 μg/mL，0.235 5、5.029 6 μg/mL，0.998 3、1.882 4 μg/mL。其中25%咪鮮胺乳油對白術根腐病菌的毒力最強，毒力回歸方程為y=1.099 8x+6.848 4；其次，1%申嗪霉素懸浮劑，毒力回歸方程為y=0.809 7x+5807 4。

2.2 白術根腐病菌F. oxysporum對殺菌劑敏感性比較

表1和圖1的EC50值及斜率綜合結果表明，F. oxysporum對多種殺菌劑均有不同程度的敏感性，其中50%多菌靈可濕性粉劑的斜率最大，表明F. oxysporum對其敏感性最強；對25%咪鮮胺乳油、1%申嗪霉素懸浮劑、30%氟菌唑可濕性粉劑、43%戊唑醇懸浮劑和10%苯醚甲環唑水分散粒劑的EC50和斜率比較接近，表明這4種藥劑對白術根腐病菌的毒力相當。雖然24%噻呋酰胺懸浮劑和45%敵磺鈉可濕性粉劑的斜率較大，但EC50非常大，表明病原菌對這2種藥的敏感性較弱，對菌絲的抑制能力不理想。

3 討論

試驗結果表明，供試藥劑中有6種殺菌劑對白術根腐病菌有很強的毒力活性，從EC50數值來看，不同殺菌劑的毒力依次為：25%咪鮮胺乳油>1%申嗪霉素懸浮劑>30%氟菌唑可濕性粉劑>43%戊唑醇懸浮劑>10%苯醚甲唑水分散粒劑>50%多菌靈可濕性粉劑。其中，25%咪鮮胺乳油對F. oxysporum菌絲的抑制效果最好；其次，為1%申嗪霉素懸浮劑。以上6種殺菌劑均為高效、低毒、低殘留和廣譜等特點，為了防止連續單一用藥使病原產生抗藥性的風險，因此應根據這些藥的作用機制不同進行輪流施用，以延緩病原菌抗藥性的產生。

化學防治是農業病害控制一種重要的防治措施，然而，白術作為特殊的經濟作物，對農藥的殘留要求很嚴格。但是選擇適宜的防治時間和防治方法，可以有效地防治白術根腐病等土傳病害，同時也可以降低農藥在白術中的殘留。引起白術根腐病的病原較為復雜，因此應選殺菌譜較廣的殺菌劑才能有效控制不同病原。土壤帶菌和白術栽培材料帶菌是引起白術根腐病的初侵染源，對土壤和白術栽培材料進行藥劑處理，減少初侵染源是有效的防治技術。結合生態學考慮，以農業防治技術為主，合理運用化學、生物防治技術實行綜合防治，達到控制病害的目的。

本研究在室內采用病原菌菌絲生長速率法進行毒力測定，但是在大田中環境條件復雜，因此，篩選出的藥劑劑量直接應用于大田防治有無明顯的防治效果，尚需進一步試驗研究。

參考文獻：

[1]朱意麟，易 蔚，黃克南. 新編中草藥彩色圖譜[M]. 北京：化學工業出版社，2011：495.

[2]俞永信. 白術根腐病及其防治[J]. 中草藥，1980，11（2）：81-82.

[3]劉英慧，趙來順.白術根腐病研究初報[J]. 植物病理學報，1991，1（1）：38.

[4]臧少先，安信伯，石麗軍，等. 白術根腐病癥狀類型及病原鑒定[J]. 河北農業大學學報，2005，28（3）：73-76.

[5]段明華，原雅玲，趙錦麗，等. 白術根莖腐爛與栽培措施的相關性[J]. 西北植物學報，1996，16（5）：24-27.

[6]方中達. 植病研究方法[M]. 北京：中國農業出版社，1998：122.