高效液相色譜法測定膚舒寧噴霧劑中大黃素和蘆薈苷含量*

宮 麗，袁 兵，卞 俊

（中國人民解放軍第411醫院藥學科，上海 200081）

膚舒寧噴霧劑為醫院制劑，主要成分為虎杖、蘆薈、冰片等藥物，用于治療輕中度燒燙傷。其研究目前還處于試驗階段，動物燙傷試驗結果表明，可加速結痂，且有一定的抗炎、促進組織生長和抑制瘢痕產生的作用。本試驗中采用高效液相色譜法測定了膚舒寧噴霧劑中大黃素和蘆薈苷的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－10AT／LC－ATVP型高效液相色譜儀（日本島津公司）；AB104－N型電子分析天平（梅特勒－托利多上海儀器有限公司）；SK3300H型超聲波清洗儀（上海科導超聲儀器有限公司）；R206型旋轉蒸發儀（上海申生科技有限公司）。大黃素對照品（批號為 110756－200110）、蘆薈苷對照品（批號為 110787－200504），均購自中國藥品生物制品檢定所；膚舒寧噴霧劑，由本實驗室自制；甲醇（上海化學試劑研究所）為色譜純；乙腈（Merck公司）為色譜純，水為純化水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件[1]與系統適用性試驗

2．1．1 大黃素

色譜柱：C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 －0．1%磷酸（80 ∶20）；檢測波長：254 nm；流速：1．0 mL ／min；柱溫：30℃；進樣量為20 μL。理論板數按大黃素峰計算不低于3 000。在上述色譜條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．1．2 蘆薈苷

色譜柱：C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動相：以乙腈 －水（25 ∶75）；檢測波長：355 nm；流速：1．0 mL ／min；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。理論板數按蘆薈苷峰計算不低于2 000。在上述色譜條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

取虎杖90．0 g、蘆薈20．0 g等藥材，用75%乙醇1 L密封浸泡7 d，每天攪拌1次，過濾，照上法重復浸泡2次，合并3次濾液，回收乙醇，再加入1．5 g冰片，加水至500 mL即得膚舒寧藥液。取大黃素對照品0．002 4 g，精密稱定，加甲醇溶解，定容至50 mL，即得大黃素對照品溶液。稱取蘆薈苷對照品0．005 0 g，精密稱定，加甲醇溶解，定容至50 mL，即得蘆薈苷對照品溶液。精密量取膚舒寧藥液1 mL，置100 mL圓底燒瓶內，精密加入三氯甲烷25 mL和2．5 mol／L硫酸溶液20 mL，精密稱定，置80℃水浴中加熱回流2 h，冷卻至室溫，再精密稱定，用三氯甲烷補足減少的質量，搖勻。分取三氯甲烷液，精密量取10 mL，蒸干，殘渣甲甲醇稀釋至刻度，搖勻，取適量，過0．45 μm濾膜，即得大黃素供試品溶液。精密量取膚舒寧藥液10 mL置100 mL容量瓶內，加入甲醇適量，超聲處理（功率 250w，頻率 33Hz）30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，取適量，過0．45 μm濾膜，即得蘆薈苷供試品溶液。分別取缺虎杖、蘆薈藥材各3份樣品，按比例同供試品溶液制備方法制得缺大黃素陰性對照品溶液。分別取缺蘆薈藥材，按比例同供試品溶液制備方法制得缺蘆薈苷陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察[2]：分別精密量取大黃素與蘆薈苷對照品溶液各 0．5，1．0，2．0，4．0，8．0 mL，置 10 mL 容量瓶內，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μL。以峰面積（Y）為縱坐標、對照品質量濃度為（X）為橫坐標進行線性回歸，得大黃素回歸方程Y＝ 23 151X－3 768．2，r＝0．999 9（n＝5），線性范圍為 2．400 ～48．00 μg／mL；蘆薈苷回歸方程為Y＝7 220．4X－ 2 476，r＝0．999 9（n＝5），線性范圍為 5．000 ～100．0 μg／mL。

精密度試驗：分別精密吸取同一大黃素和蘆薈苷對照品溶液20 μL，按擬訂色譜條件連續進樣5次。結果大黃素峰面積的RSD為 0．46%（n＝5），蘆薈苷峰面積的RSD為 0．50%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：分別取同一大黃素和蘆薈苷供試品溶液，于制備 0，2，4，6，8，10 h 時按擬訂色譜條件進樣 20 μL，記錄峰面積。結果大黃素峰面積的RSD為1．26%（n＝6），蘆薈苷峰面積的RSD為0．49%（n＝6），表明大黃素和蘆薈苷供試品溶液在12 h內穩定性良好。

重復性試驗：取同一膚舒寧藥液樣品5份，分別依法制備大黃素和蘆薈苷供試品溶液，按擬訂色譜條件，分別進樣20 μL。結果樣品中大黃素含量的RSD為0．48%（n＝5），蘆薈苷含量的

RSD為1．56%（n＝5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗[3－4]：精密量取已知大黃素含量的膚舒寧藥液（含量為0．304 mg／mL）1 mL 6份，分別加入已知含量的大黃素對照品溶液（48．00 μg／mL）2，4，6 mL，同法重復一組。依法制備大黃素供試品溶液，按擬訂項色譜條件進樣20 μL，計算回收率，結果見表1。精密量取已知蘆薈苷含量的膚舒寧藥液（0．341 g／L）2 mL 6份，分別加入已知含量的蘆薈苷對照品溶液（100．0 μg／mL）1，2，3 mL，同法重復一組。依法制備蘆薈苷供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣20 μL，計算回收率。結果見表1。

表1 大黃素和蘆薈苷加樣回收試驗結果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

分別精密吸取大黃素對照品溶液（48．00 μg／mL）與 3份大黃素供試品溶液、蘆薈苷對照品溶液（100 μg／mL）與 3 份蘆薈苷供試品溶液各 20 μL，按擬訂色譜條件進樣分析，外標法以峰面積計算大黃素和蘆薈苷的含量。結果見表2。

3 討論

虎杖的陰性對照試驗中，先前制備的是缺虎杖陰性對照品溶液，但隨后發現蘆薈中也含有大黃素，則改成缺虎杖及蘆薈的陰性對照品溶液。

蘆薈苷對照品試驗中，發現蘆薈苷前面有一峰，估計為其分解產物，且隨著存放時間越長，產物峰面積越來越大，而蘆薈苷峰面積則變小。該溶液見光不穩定后，立即新配對照品溶液且改用棕色瓶避光保存，縮短存放時間，并加快試驗進度。在此過程中，還發現蘆薈峰稍有拖尾現象，本試驗色譜條件參考《中國藥典（一部）》，因試驗效果良好及時間緊張，未深究其色譜條件。

表2 樣品含量測定結果（g／L）

本研究中采用高效液相色譜法，選用大黃素和蘆薈苷作為指標成分對膚舒寧噴霧劑進行含量測定，并對精密度、重復性、穩定性和加樣回收率進行了考察，都得到了良好結果，證明此法能夠有效控制膚舒寧噴霧劑的質量。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[S]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：22，151．

[2]劉 戎，運 委，張建蘋．蘆薈膏中蘆薈苷的含量測定[J]．時珍國醫國藥，2007，18（11）：2 728．

[3]盛 燕，汪培鈞，張文婷，等．高效液相色譜法測定婦樂顆粒中大黃素和大黃酚含量[J]．中國藥業，2010，19（8）：46 －47．

[4]高 鈞，畢開順，王 璽，等．高效液相色譜法測定蘆薈中蘆薈苷的含量[J]．藥物分析雜志，2001，21（6）：387 －389．