液相法檢測乳與乳制品中糖精鈉等標準品配制的研究

于敏，吳騰，趙桂榮，張河霞，烏恩其木格，秦培林

(內蒙古蒙牛乳業集團股份有限公司，呼和浩特011550)

0 引 言

糖精鈉(學名：鄰磺酰苯酰亞胺鈉 )[1]，甜度是蔗糖的500倍，溶液濃度大時有苦味[2，3]。苯甲酸是羧基直接相連接在苯環碳原子的最簡單的芳香酸[4]。是一種常用的食品消毒防腐劑[5]。山梨酸(化學名稱：2，4-己二烯)[6]，還能抑制有害微生物的繁殖與生長[7-8]。安賽蜜是目前世界上第四代甜味劑。

乳與乳制品中檢測糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、安賽蜜等項目時如何配置標準品國標方法中沒有明確規定，在開展檢測項目時會遇到新舊標準品如何比對的問題。一般情況下標準品配制成單標標準品和混合標準品后使用，配制方法對標準品的比對有一定的影響。通過實驗對不同的配制方法進行研究滿足不同批次標準品的對比要求。

1 實 驗

1.1 儀器與設備

Dionex U3000型 高效液相色譜儀(配有紫外檢測器)， 恒溫水浴鍋，10 mL容量瓶，100 mL容量瓶，10～100 L移液器

1.2 試劑

(1)苯甲酸單標標準品10 mg/L。準確吸取苯甲酸標準物質(1.00 g/L)100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(2)山梨酸單標標準品10 mg/L。準確吸取山梨酸標準物質(1.00 g/L)100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(3)安賽蜜單標標準品10 mg/L。準確吸取安賽蜜標準物質(1 000 mg/L)100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(4)糖精鈉單標標準品10 mg/L。準確吸取糖精鈉標準物質(1.00g/L)100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(5)苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉混標標準品10 mg/L。準確吸取苯甲酸標準物質(1.00 g/L)、山梨酸標準物質(1.00 g/L)、安賽蜜標準物質(1 000 mg/L)、糖精鈉標準物質(1.00 g/L)各100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(6)磷酸鹽緩沖鹽。分別稱取2.5 g磷酸二氫鉀和2.5 g磷酸氫二鉀，用水溶解并定容于1 000 mL的容量瓶中。

1.3 色譜條件

流動相為磷酸緩沖鹽-甲醇(95:5)；色譜柱為C18柱(250×4.6mm,5um)；流速為1.0 mL/min；柱溫為38℃；進樣量為10 uL；波長為227 nm。

1.4 樣品處理

稱樣20 g于100 mL容量瓶,加入25 mL氫氧化鈉(濃度0.1 mol/L)搖勻，70℃水浴15 min,冷卻后用硫酸溶液(濃度0.5 mol/L)調pH值為7.0～8.0，加入2 mL亞鐵氰化鉀和2 mL乙酸鋅，用力搖勻，靜置15 min，用甲醇定容至刻度，至少放置2 h，過濾上機檢測。

2 方 法

2.1 陽性樣品檢測

取糖精鈉陽性樣品處理后，在上述色譜條件下檢測，分別用糖精鈉單標標準品和苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉混標標準品作為標準品進行檢測糖精鈉。檢測數據如表1所示。

表1 單混標標準品檢測糖精鈉結果及精密度

由表1可以看出，糖精鈉單標工作液與混標工作液檢測結果精密度不符合GB 21703-2010,乳與乳制品中苯甲酸和山梨酸的測定方法要求。

2.2 峰面積測量

不同日期，分別配制苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉單標標準品與苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉混標標準品，在上述同一色譜條件下，檢測峰面積，結果如表2～表6所示。

表2 苯甲酸單混標標準品峰面積對比數據 mAu·min

表3 山梨酸單混標標準品峰面積對比數據 mAu·min

表4 安賽蜜單混標標準品峰面積對比數據 mAu·min

由表2～表6結果可以看出，苯甲酸、山梨酸單標工作液與混標工作液峰面積沒有顯著的差異。

表5 糖精鈉單混標標準品峰面積對比數據 mAu·min

表6 單混標標準品檢測苯甲酸回收率數據

安賽蜜、糖精鈉單標工作液與混標工作液峰面積有顯著的差異，即：在相同檢測條件下檢測混標工作液的峰面積要大于單標工作的峰面積。

2.3 回收率檢測

選取一個滅菌乳樣品，在其中分別添加2個不同質量分數苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉，分別用苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉單標標準品和苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉混標標準品作為標準品，進行回收率平行實驗，結果如表6-表9所示。

表7 單混標標準品檢測山梨酸回收率數據

表8 單混標標準品檢測安賽蜜回收率數據

由表6～表9可以看出，混標標準品與單標標準品檢測苯甲酸回收率都符合GB 21703-2010,乳與乳制品中苯甲酸和山梨酸的測定方法中回收率的要求；混標標準品與單標標準品檢測山梨酸回收率其檢測值沒有顯著的差異；混標標準品檢測安賽蜜、糖精鈉回收率其檢測值較小，且符合GB 21703-2010,乳與乳制品中苯甲酸和山梨酸的測定方法中回收率的要求。而用單標標準品檢測安賽蜜、糖精鈉回收率其檢測值較大，回收率超出GB 21703-2010,乳與乳制品中苯甲酸和山梨酸的測定方法中回收率的要求。

表9 單混標標準品檢測糖精鈉回收率數據

3 結 論

通過上述實驗結果表明：安賽蜜、糖精鈉單標標準品與混標標準品峰面積有顯著的差異，驗收安賽蜜、糖精鈉標準品時，最好使用相同的配置方法。即：新舊標準品都配成單標工作液或都配成混標工作液進行驗收比對，否則很可能會出現驗收不合格而實際標準品是合格的情況。

通過回收率試驗結果表明，安賽蜜、糖精鈉用混標標準品檢測時，其回收率符合GB 21703-2010,乳與乳制品中苯甲酸和山梨酸的測定方法中回收率的要求。而用單標標準品檢測時其回收率超出GB 21703-2010,乳與乳制品中苯甲酸和山梨酸的測定方法中回收率的要求，檢測安賽蜜、糖精鈉樣品和回收率時最好使用混標標準品；苯甲酸、山梨酸檢測用單標標準品與混標標準品時，沒有顯著的差異。

[1]萬年星.乳制品中防腐劑高效液相色譜檢測方法的研究[D].山東大學：2007.

[2]王冬梅，王家保，李俊玲.液相色譜法同時測定乳制品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸[N].中國衛生檢驗雜志，2005(8):18-19.

[3]肖素榮,李京東.天然食品防腐劑及其發展前景[J].中國食品與營養,2007(6)：30-33.

[4]石立三,吳慧清.我國食品防腐劑應用狀況及未來發展趨勢[J].食品研究與開發,2008,29(3):157-161.

[5]衷明華,李云.毛細管電泳法分離測定潮汕涼果中的山梨酸、苯甲酸、糖精鈉[J].光譜實驗室,2009,26(6):1568-1571.

[6]劉紹.食品分析與檢驗[M].武漢:華中科技大學出版社,2011.

[7]GB 21703-2010,乳與乳制品中苯甲酸和山梨酸的測定[S].

[8]曉唐.糖精鈉對人體有哪些危害[J].監督與選擇,2004(7):11.

[9]GB/T 5009.140-2003,飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定[S].

[10]GB/T 5009.28-2003,食品中糖精鈉的測定[S].

[11]GB/T23495-2009,食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法[S].