免疫熒光法在微生物快速檢驗中的應用研究

艾春英

免疫熒光法在微生物快速檢驗中的應用研究

艾春英

目的探討免疫熒光法在呼吸道感染患者快速檢測中的臨床應用效果。方法采用免疫熒光法對2011年9月~2013年9月本院所接受治療的200例上呼吸道感染患者鼻、咽分泌物標本進行快速檢驗, 檢測呼吸道感染患者感染病毒種類及其感染率。結果200例患者中, 病毒感染陽性者178例, 病毒感染率為89%。包括呼吸道合胞病毒陽性者24例, 腺病毒者49例, 流感病毒A、B者各38例、29例, 副流感病毒1、2、3各10、16、12例, 感染率分別為13.48%、27.53%、21.35%、16.29%、5.62%、8.99%、6.42%。上呼吸道感染患者中病毒感染者占絕大多數, 其中尤以腺病毒感染率最高。結論免疫熒光能快速檢測患者病毒感染種類且敏感性高, 為上呼吸道感染患者治療有良好的效果, 值得臨床推廣使用。

免疫熒光法；上呼吸道感染；病毒檢驗

免疫熒光技術是指應用將抗原和抗體相結合的生物反應與形態學相結合的原理, 把血清學特異性、熒光色素的敏感性和顯微鏡檢查法融為一體。該方法由于特異性強、敏感性高、速度快成為今年來診斷學應用越來越廣的手段之一。目前已經應用于多種病毒、細菌、真菌的快速檢測中。急性上呼吸道感染95%以上均為病毒感染所引起, 主要常見的有呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒、副流感病毒等［1］。本文采用免疫熒光法檢測對200例上呼吸道感染患者進行快速診斷, 以對患者感染病毒種類進行快速診斷, 結果報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究所有對象均來自電子科技大學醫院2011年9月~2013年9月呼吸科所接受治療的上呼吸道感染患者200例, 包括男性128例、女性72例, 年齡在3~80歲之間, 平均年齡為(56.4±2.8)歲。包括喉部感染患者38例、咽部感染者69例、鼻部感染者93例。有13人并發急性心肌炎、10人伴有腎炎、8人并發風濕熱癥。

1.2研究方法

1.2.1檢測試劑 本研究共使用7項病毒熒光檢測試劑盒,均由美國DHI公司提供, 包括：熒光標志抗體試劑盒, 熒光標志的單克隆抗體試劑盒, 針對呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒1、2、3型試劑盒。除此之外還有濃縮洗滌液(40×), 封閉液、病原體相關對照玻片(包括陽性對照記陰性對照的點樣孔)。

1.2.2檢測方法 標本的收集及處理：①采取負壓吸引器先將患者鼻、咽、喉部的分泌物, 大約2~3 ml, 將分泌物移至無菌生理鹽水中。②反復吹打分泌物, 移至離心管中。③離心除去上清液, 轉速500 r/min, 時間為8 min。④將沉淀用磷酸鹽緩沖液洗滌, 混勻。⑤重復離心步驟, 除去上層,重復直至上清液不在粘稠。⑥將最后一次離心的沉淀溶解于0.5~1 ml磷酸鹽緩沖鹽溶液中, 吹打使其成為細胞懸液。⑦在病原體對照玻片中每孔點入25 μl的細胞懸液。⑧使點樣孔風干, 再用冷丙酮固定10 min。

熒光染色：主要包括3個步驟, ①在對照玻片樣孔中的細胞中滴加上1滴相對應的熒光抗體20 μl, 于37℃保濕盒中孵育0.5 h。即1~7號樣孔中一次滴加熒光標志抗體作陰性對照, 熒光標志單克隆抗體做陽性對照, 以及呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒1、2、3型試劑盒作樣品孔。②用洗滌液將玻片中細胞洗滌數次,數次之后再用蒸餾水洗滌1 min。③待蒸餾水風干后將玻片孔中滴加入1滴封閉液, 蓋上蓋玻片, 再用熒光顯微鏡觀察。

1.3診斷原則及判斷的依據 ①診斷原則：被熒光標志的相對應病毒特異性單克隆抗體與其抗原結合后, 形成結合復合物, 在熒光顯微鏡下可見綠色熒光, 而未被染色的則會被Evans藍染為紅色。② 陽性結果判斷標準：熒光顯微鏡下顯示綠色熒光為陽性, 無熒光為陰性, 當在顯微鏡放大倍數為200時, 有≥2個熒光細胞則認為標本為陽性。

1.4統計學方法 采用SPSS18.0數據統計分析軟件對所獲數據進行分析, 統計患者各種病毒種類感染例數及相應感染率。

2 結果

在所研究的200例患者中, 患者各種病毒感染數據如表1所示。

表1 上呼吸道病毒感染患者感染種類及感染率(n=178)

3 討論

免疫熒光法主要使用的試劑為患者血清以及其免疫熒光抗體。該試驗要求試劑對關鍵的部分抗原應具有高度的特異性, 即單特異性抗體制劑［2］。近年來, 在人工合成免疫原方面取得了進, 經研究判明, 沙門氏菌的群特異性抗原決定簇是一種雙糖［3］。于是, 人們用人工方法合成高純度的這種雙糖, 再與蛋白質結合成免疫原, 就可制出群特異性極強的單特異性抗體, 新近發展起來的制備單克隆抗體的技術, 也為制備各種單特異性抗體開辟了廣闊的道路［4］。

本研究通過將免疫熒光法應用于近兩年本院接收治療的上呼吸道感染患者200例, 通過對患者細胞標本與相對應的抗體作抗原抗體反應, 通過反應陽性與否判斷患者相對應的感染病毒種類。通過試驗結果顯示, 200例患者中有178例患者病毒感染陽性者178例, 病毒感染率為89%。呼吸道和胞病毒、腺病毒、流感病毒A、B, 副流感病毒1、2、3感染率分別為13.48%、27.53%、21.35%、16.29%、5.62%、8.99%、6.42%, 結果準確且快速。免疫熒光法能夠 準確且快速的檢測出患者感染呼吸道的種類, 效果可靠。該方法能夠在實驗室內2 h時間且在僅需要熒光顯微鏡的設備以及相對應試劑盒下即可檢測出患者感染病毒種類, 且簡單、廉價, 能為一般實驗室所開展。

總之, 免疫熒光技術用于微生物學快速檢驗已初露鋒芒,目前還在不斷與其它先進技術結合, 逐漸發展得更加完善。

［1］ 唐盛, 林恒先, 龔海濤, 等.免疫熒光法檢測奈瑟氏淋球菌方法的建立及其臨床應用評價.標記免疫分析與臨床, 2011, 18(2): 107-110.

［2］ 金之瑾, 陳健, 顧志芬, 等.間接免疫熒光法在弓形體檢測中的臨床應用.第六屆全國優生科學大會論文匯編, 2006(01): 147-149.

［3］ 黃秋林, 許翔, 蔣淑芳.直接免疫熒光法對多種呼吸道病毒檢測的臨床意義.檢驗醫學與臨床, 2008, 5(3):135-137.

［4］ 顏善活.免疫熒光檢測C-反應蛋白的臨床應用分析.中國臨床新醫學, 2010(30):19-21.

610054 電子科技大學校醫院檢驗科