雙波長分光光度法測定銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量

焦銘等

摘要：采用雙波長分光光度法檢測銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。利用淀粉與碘反應的顯色作用繪制淀粉紫外吸收曲線，選擇直鏈淀粉檢測波長為462、610 nm，支鏈淀粉檢測波長為516、728 nm，根據標準樣品的回歸方程可得到直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。雙波長分光光度法檢測銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量，操作簡單，重復性高，可用于工業上批量檢測。

關鍵詞：雙波長分光光度法；直鏈淀粉；支鏈淀粉；銀杏葉

中圖分類號： R284.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0275-02

收稿日期：2013-10-04

基金項目：湖北省教育廳科學研究計劃（編號：B2013050、Q20122802）；湖北科技學院國家級大學生創新創業訓練計劃（編號：201210927025）。

作者簡介：焦銘（1977—），男，湖北武漢人，博士，講師，主要從事植物分子遺傳學研究。E-mail：jiaoming@whu.edu.cn。

通信作者：黃俊潮，主要從事植物生物化學研究。E-mail：jchuang77@163.com。銀杏（Ginkgo biloba L.）屬于裸子植物，是銀杏科銀杏屬唯一存在的物種，是我國珍貴的植物資源[1]。銀杏的藥用價值主要體現在銀杏葉成分，銀杏葉中淀粉含量是其自身營養物質，決定了其他成分的含量和比例[2]。測定銀杏葉中淀粉含量，有助于了解銀杏藥用成分的構成比，提高藥用價值。淀粉可分為直鏈淀粉、支鏈淀粉，支鏈淀粉含量越高，銀杏葉品質越高。以往的淀粉測定方法只能得到總淀粉量，無法區分直鏈淀粉和支鏈淀粉。本研究利用雙波長分光光度法，直接、準確測定了銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量，以期為工業上批量檢測銀杏淀粉含量提供依據。

1材料與方法

1.1材料

銀杏葉取材于湖北省安陸市銀杏國家公園植物研究所。

直鏈淀粉、支鏈淀粉標準樣品（美國Sigma公司）；無水乙醇、碘化鉀、氫氧化鉀、乙醚、氯化鉀、碘、石油醚、鹽酸（均為市售分析純）。

1.2儀器設備

1.3方法

1.3.1溶液制備直鏈淀粉、支鏈淀粉標準溶液配制：稱取2種淀粉樣品各0.1 g，轉移至100 mL燒杯中，加入2 mol/L氫氧化鉀溶液10 mL，溶解后移到容量瓶，加蒸餾水定容到100 mL，分別得到1 g/L直鏈淀粉、支鏈淀粉標準溶液。

碘溶液配制：按常規方法配制2 g/L碘試劑，儲存于棕色瓶中待用。

1.3.2樣品處理采用酸式提取法[3]提取銀杏葉中的淀粉，提取條件：亞硫酸濃度0.19%，液固比7 mL ∶1 g，浸提時間16 h。提取淀粉的工藝流程為：稱取10 g銀杏葉，將銀杏葉用蒸餾水反復清洗3次，剪去主脈、支脈，在粉碎機中將銀杏葉樣品磨成粉末，加入亞硫酸溶液進行勻漿，用研磨器將勻漿液研磨呈糊狀，用325目篩過篩，5 000 r/min離心10 min，棄上清，沉淀用無水乙醇、丙酮、乙醚反復洗滌，直至上清液變成無色。40 ℃干燥，研磨后用60目過篩，將銀杏葉粉末用紗布包裹并保存待用。

1.3.3雙波長直鏈淀粉標準曲線分別吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL直鏈淀粉標準溶液，放入不同的 50 mL 容量瓶。向每個容量瓶中加入30 mL蒸餾水，用 0.1 mol/L 鹽酸調節pH值至3，加入0.5 mL碘試劑，用蒸餾水定容至50 mL。靜置15 min，在λ1、λ2波長下分別測定吸光度（Dλ1、Dλ2），即得ΔD直=Dλ1-Dλ2。以ΔD直為縱坐標，直鏈淀粉濃度為橫坐標，繪制雙波長直鏈淀粉標準曲線。

1.3.4雙波長支鏈淀粉標準曲線分別吸取1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL支鏈淀粉標準溶液，其他流程同上。

1.3.5直鏈淀粉、支鏈淀粉含量測定稱取0.1 g處理過的淀粉樣品，加入0.5 mol/L氫氧化鉀溶液10 mL，溶解后轉入100 mL容量瓶，用蒸餾水定容。取樣品液2.5 mL，調節pH值為3，加入碘試劑，定容靜置。分別測定波長為λ1、λ2、λ3、λ4下的吸收值Dλ1、Dλ2、Dλ3、Dλ4，得到ΔD直、ΔD支。分別在直鏈淀粉、支鏈淀粉標準曲線中查詢，可計算出樣品中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。

2結果與分析

2.1淀粉檢測雙波長的選擇

根據雙波長分光光度法測定原理[4]，采用作圖法選定參比波長、測定波長（圖1）。用UV-2550紫外-可見分光光度計對淀粉溶液進行掃描可得到淀粉吸收光譜，根據作圖法原理和掃描圖譜，直鏈淀粉、支鏈淀粉最大吸收波長分別為610、516 nm，確定直鏈淀粉測定雙波長為462、610 nm，支鏈淀粉測定雙波長為516、728 nm。

2.2直鏈淀粉、支鏈淀粉的標準曲線

2.3雙波長分光光度法精密度檢驗

3結論

銀杏葉中淀粉含量是衡量其果實營養成分的主要指標之一，采用雙波長分光光度法測定銀杏葉中淀粉含量，可以一次性獲得直鏈淀粉、支鏈淀粉、總淀粉含量，節省時間，適宜工業化推廣。與傳統蒽酮法相比，雙波長法檢測結果偏低，這可能是由于蒽酮法無法排除樣品中天然糖分對測定結果的干擾，使結果偏高。

參考文獻：

[1]張曉莉，孫英春. 銀杏葉制劑臨床應用的研究進展[J]. 中國社區醫師：醫學專業，2012，14（21）：12-13.

[2]黃其春，張桂招，林梅香，等. 銀杏葉提取物及其含藥血清對仔豬腸道菌的體外抑菌作用[J]. 江蘇農業科學，2012，40（10）：185-187.

[3]何云，張海棠，劉長忠，等. 銀杏葉及其提取物在家禽日糧中的應用研究進展[J]. 江蘇農業科學，2009（3）：277-278.

[4]廈門大學化學系分析化學教研室. 雙波長分光光度法原理簡介[J]. 分析化學，1978，6（3）：224-231.endprint

摘要：采用雙波長分光光度法檢測銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。利用淀粉與碘反應的顯色作用繪制淀粉紫外吸收曲線，選擇直鏈淀粉檢測波長為462、610 nm，支鏈淀粉檢測波長為516、728 nm，根據標準樣品的回歸方程可得到直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。雙波長分光光度法檢測銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量，操作簡單，重復性高，可用于工業上批量檢測。

關鍵詞：雙波長分光光度法；直鏈淀粉；支鏈淀粉；銀杏葉

中圖分類號： R284.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0275-02

收稿日期：2013-10-04

基金項目：湖北省教育廳科學研究計劃（編號：B2013050、Q20122802）；湖北科技學院國家級大學生創新創業訓練計劃（編號：201210927025）。

作者簡介：焦銘（1977—），男，湖北武漢人，博士，講師，主要從事植物分子遺傳學研究。E-mail：jiaoming@whu.edu.cn。

通信作者：黃俊潮，主要從事植物生物化學研究。E-mail：jchuang77@163.com。銀杏（Ginkgo biloba L.）屬于裸子植物，是銀杏科銀杏屬唯一存在的物種，是我國珍貴的植物資源[1]。銀杏的藥用價值主要體現在銀杏葉成分，銀杏葉中淀粉含量是其自身營養物質，決定了其他成分的含量和比例[2]。測定銀杏葉中淀粉含量，有助于了解銀杏藥用成分的構成比，提高藥用價值。淀粉可分為直鏈淀粉、支鏈淀粉，支鏈淀粉含量越高，銀杏葉品質越高。以往的淀粉測定方法只能得到總淀粉量，無法區分直鏈淀粉和支鏈淀粉。本研究利用雙波長分光光度法，直接、準確測定了銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量，以期為工業上批量檢測銀杏淀粉含量提供依據。

1材料與方法

1.1材料

銀杏葉取材于湖北省安陸市銀杏國家公園植物研究所。

直鏈淀粉、支鏈淀粉標準樣品（美國Sigma公司）；無水乙醇、碘化鉀、氫氧化鉀、乙醚、氯化鉀、碘、石油醚、鹽酸（均為市售分析純）。

1.2儀器設備

1.3方法

1.3.1溶液制備直鏈淀粉、支鏈淀粉標準溶液配制：稱取2種淀粉樣品各0.1 g，轉移至100 mL燒杯中，加入2 mol/L氫氧化鉀溶液10 mL，溶解后移到容量瓶，加蒸餾水定容到100 mL，分別得到1 g/L直鏈淀粉、支鏈淀粉標準溶液。

碘溶液配制：按常規方法配制2 g/L碘試劑，儲存于棕色瓶中待用。

1.3.2樣品處理采用酸式提取法[3]提取銀杏葉中的淀粉，提取條件：亞硫酸濃度0.19%，液固比7 mL ∶1 g，浸提時間16 h。提取淀粉的工藝流程為：稱取10 g銀杏葉，將銀杏葉用蒸餾水反復清洗3次，剪去主脈、支脈，在粉碎機中將銀杏葉樣品磨成粉末，加入亞硫酸溶液進行勻漿，用研磨器將勻漿液研磨呈糊狀，用325目篩過篩，5 000 r/min離心10 min，棄上清，沉淀用無水乙醇、丙酮、乙醚反復洗滌，直至上清液變成無色。40 ℃干燥，研磨后用60目過篩，將銀杏葉粉末用紗布包裹并保存待用。

1.3.3雙波長直鏈淀粉標準曲線分別吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL直鏈淀粉標準溶液，放入不同的 50 mL 容量瓶。向每個容量瓶中加入30 mL蒸餾水，用 0.1 mol/L 鹽酸調節pH值至3，加入0.5 mL碘試劑，用蒸餾水定容至50 mL。靜置15 min，在λ1、λ2波長下分別測定吸光度（Dλ1、Dλ2），即得ΔD直=Dλ1-Dλ2。以ΔD直為縱坐標，直鏈淀粉濃度為橫坐標，繪制雙波長直鏈淀粉標準曲線。

1.3.4雙波長支鏈淀粉標準曲線分別吸取1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL支鏈淀粉標準溶液，其他流程同上。

1.3.5直鏈淀粉、支鏈淀粉含量測定稱取0.1 g處理過的淀粉樣品，加入0.5 mol/L氫氧化鉀溶液10 mL，溶解后轉入100 mL容量瓶，用蒸餾水定容。取樣品液2.5 mL，調節pH值為3，加入碘試劑，定容靜置。分別測定波長為λ1、λ2、λ3、λ4下的吸收值Dλ1、Dλ2、Dλ3、Dλ4，得到ΔD直、ΔD支。分別在直鏈淀粉、支鏈淀粉標準曲線中查詢，可計算出樣品中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。

2結果與分析

2.1淀粉檢測雙波長的選擇

根據雙波長分光光度法測定原理[4]，采用作圖法選定參比波長、測定波長（圖1）。用UV-2550紫外-可見分光光度計對淀粉溶液進行掃描可得到淀粉吸收光譜，根據作圖法原理和掃描圖譜，直鏈淀粉、支鏈淀粉最大吸收波長分別為610、516 nm，確定直鏈淀粉測定雙波長為462、610 nm，支鏈淀粉測定雙波長為516、728 nm。

2.2直鏈淀粉、支鏈淀粉的標準曲線

2.3雙波長分光光度法精密度檢驗

3結論

銀杏葉中淀粉含量是衡量其果實營養成分的主要指標之一，采用雙波長分光光度法測定銀杏葉中淀粉含量，可以一次性獲得直鏈淀粉、支鏈淀粉、總淀粉含量，節省時間，適宜工業化推廣。與傳統蒽酮法相比，雙波長法檢測結果偏低，這可能是由于蒽酮法無法排除樣品中天然糖分對測定結果的干擾，使結果偏高。

參考文獻：

[1]張曉莉，孫英春. 銀杏葉制劑臨床應用的研究進展[J]. 中國社區醫師：醫學專業，2012，14（21）：12-13.

[2]黃其春，張桂招，林梅香，等. 銀杏葉提取物及其含藥血清對仔豬腸道菌的體外抑菌作用[J]. 江蘇農業科學，2012，40（10）：185-187.

[3]何云，張海棠，劉長忠，等. 銀杏葉及其提取物在家禽日糧中的應用研究進展[J]. 江蘇農業科學，2009（3）：277-278.

[4]廈門大學化學系分析化學教研室. 雙波長分光光度法原理簡介[J]. 分析化學，1978，6（3）：224-231.endprint

摘要：采用雙波長分光光度法檢測銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。利用淀粉與碘反應的顯色作用繪制淀粉紫外吸收曲線，選擇直鏈淀粉檢測波長為462、610 nm，支鏈淀粉檢測波長為516、728 nm，根據標準樣品的回歸方程可得到直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。雙波長分光光度法檢測銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量，操作簡單，重復性高，可用于工業上批量檢測。

關鍵詞：雙波長分光光度法；直鏈淀粉；支鏈淀粉；銀杏葉

中圖分類號： R284.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0275-02

收稿日期：2013-10-04

基金項目：湖北省教育廳科學研究計劃（編號：B2013050、Q20122802）；湖北科技學院國家級大學生創新創業訓練計劃（編號：201210927025）。

作者簡介：焦銘（1977—），男，湖北武漢人，博士，講師，主要從事植物分子遺傳學研究。E-mail：jiaoming@whu.edu.cn。

通信作者：黃俊潮，主要從事植物生物化學研究。E-mail：jchuang77@163.com。銀杏（Ginkgo biloba L.）屬于裸子植物，是銀杏科銀杏屬唯一存在的物種，是我國珍貴的植物資源[1]。銀杏的藥用價值主要體現在銀杏葉成分，銀杏葉中淀粉含量是其自身營養物質，決定了其他成分的含量和比例[2]。測定銀杏葉中淀粉含量，有助于了解銀杏藥用成分的構成比，提高藥用價值。淀粉可分為直鏈淀粉、支鏈淀粉，支鏈淀粉含量越高，銀杏葉品質越高。以往的淀粉測定方法只能得到總淀粉量，無法區分直鏈淀粉和支鏈淀粉。本研究利用雙波長分光光度法，直接、準確測定了銀杏葉中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量，以期為工業上批量檢測銀杏淀粉含量提供依據。

1材料與方法

1.1材料

銀杏葉取材于湖北省安陸市銀杏國家公園植物研究所。

直鏈淀粉、支鏈淀粉標準樣品（美國Sigma公司）；無水乙醇、碘化鉀、氫氧化鉀、乙醚、氯化鉀、碘、石油醚、鹽酸（均為市售分析純）。

1.2儀器設備

1.3方法

1.3.1溶液制備直鏈淀粉、支鏈淀粉標準溶液配制：稱取2種淀粉樣品各0.1 g，轉移至100 mL燒杯中，加入2 mol/L氫氧化鉀溶液10 mL，溶解后移到容量瓶，加蒸餾水定容到100 mL，分別得到1 g/L直鏈淀粉、支鏈淀粉標準溶液。

碘溶液配制：按常規方法配制2 g/L碘試劑，儲存于棕色瓶中待用。

1.3.2樣品處理采用酸式提取法[3]提取銀杏葉中的淀粉，提取條件：亞硫酸濃度0.19%，液固比7 mL ∶1 g，浸提時間16 h。提取淀粉的工藝流程為：稱取10 g銀杏葉，將銀杏葉用蒸餾水反復清洗3次，剪去主脈、支脈，在粉碎機中將銀杏葉樣品磨成粉末，加入亞硫酸溶液進行勻漿，用研磨器將勻漿液研磨呈糊狀，用325目篩過篩，5 000 r/min離心10 min，棄上清，沉淀用無水乙醇、丙酮、乙醚反復洗滌，直至上清液變成無色。40 ℃干燥，研磨后用60目過篩，將銀杏葉粉末用紗布包裹并保存待用。

1.3.3雙波長直鏈淀粉標準曲線分別吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL直鏈淀粉標準溶液，放入不同的 50 mL 容量瓶。向每個容量瓶中加入30 mL蒸餾水，用 0.1 mol/L 鹽酸調節pH值至3，加入0.5 mL碘試劑，用蒸餾水定容至50 mL。靜置15 min，在λ1、λ2波長下分別測定吸光度（Dλ1、Dλ2），即得ΔD直=Dλ1-Dλ2。以ΔD直為縱坐標，直鏈淀粉濃度為橫坐標，繪制雙波長直鏈淀粉標準曲線。

1.3.4雙波長支鏈淀粉標準曲線分別吸取1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL支鏈淀粉標準溶液，其他流程同上。

1.3.5直鏈淀粉、支鏈淀粉含量測定稱取0.1 g處理過的淀粉樣品，加入0.5 mol/L氫氧化鉀溶液10 mL，溶解后轉入100 mL容量瓶，用蒸餾水定容。取樣品液2.5 mL，調節pH值為3，加入碘試劑，定容靜置。分別測定波長為λ1、λ2、λ3、λ4下的吸收值Dλ1、Dλ2、Dλ3、Dλ4，得到ΔD直、ΔD支。分別在直鏈淀粉、支鏈淀粉標準曲線中查詢，可計算出樣品中直鏈淀粉、支鏈淀粉含量。

2結果與分析

2.1淀粉檢測雙波長的選擇

根據雙波長分光光度法測定原理[4]，采用作圖法選定參比波長、測定波長（圖1）。用UV-2550紫外-可見分光光度計對淀粉溶液進行掃描可得到淀粉吸收光譜，根據作圖法原理和掃描圖譜，直鏈淀粉、支鏈淀粉最大吸收波長分別為610、516 nm，確定直鏈淀粉測定雙波長為462、610 nm，支鏈淀粉測定雙波長為516、728 nm。

2.2直鏈淀粉、支鏈淀粉的標準曲線

2.3雙波長分光光度法精密度檢驗

3結論

銀杏葉中淀粉含量是衡量其果實營養成分的主要指標之一，采用雙波長分光光度法測定銀杏葉中淀粉含量，可以一次性獲得直鏈淀粉、支鏈淀粉、總淀粉含量，節省時間，適宜工業化推廣。與傳統蒽酮法相比，雙波長法檢測結果偏低，這可能是由于蒽酮法無法排除樣品中天然糖分對測定結果的干擾，使結果偏高。

參考文獻：

[1]張曉莉，孫英春. 銀杏葉制劑臨床應用的研究進展[J]. 中國社區醫師：醫學專業，2012，14（21）：12-13.

[2]黃其春，張桂招，林梅香，等. 銀杏葉提取物及其含藥血清對仔豬腸道菌的體外抑菌作用[J]. 江蘇農業科學，2012，40（10）：185-187.

[3]何云，張海棠，劉長忠，等. 銀杏葉及其提取物在家禽日糧中的應用研究進展[J]. 江蘇農業科學，2009（3）：277-278.

[4]廈門大學化學系分析化學教研室. 雙波長分光光度法原理簡介[J]. 分析化學，1978，6（3）：224-231.endprint