小駁骨中總黃酮、總酚酸含量測定及其抗氧化活性研究

陳燕霞等

摘要：采用紫外-可見分光光度法測定小駁骨不同提取溶劑、不同部位總黃酮和總酚酸含量及其抗氧化性。結果表明，小駁骨莖總黃酮含量高于葉，莖水提取液總黃酮含量最高，為4.26%；小駁骨葉總酚酸含量高于莖，葉醇提取液總酚酸含量最高，為11.90%；在抗氧化性方面，莖水提液>莖醇提液>葉水提液>葉醇提液；小駁骨不同部位總黃酮、總有機酸含量、抗氧化性存在差異；總黃酮含量和抗氧化性具有相關性，表明抗氧化活性可能與黃酮類物質有關。

關鍵詞：小駁骨； 總黃酮； 總酚酸； 抗氧化性

中圖分類號： R284.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0258-02

收稿日期：2013-10-14

作者簡介：陳燕霞（1988—），女，廣東汕頭人，碩士研究生，研究方向為中藥炮制現代化、中藥飲片質量標準化。E-mail：973414396@qq.com。

通信作者：陳康，男，廣東陽江人，教授，研究方向為中藥炮制現代化、中藥飲片質量標準化及中藥新藥研究。E-mail：chenkang@gzucm.edu.cn。小駁骨（Gendarussa vulgaris Nees.）別名駁骨丹、接骨草、四季花、小還魂、百節芒、小葉金不換、小接骨草、裹籬樵、長生木、細骨風等，為雙子葉植物爵床科小駁骨屬植物小駁骨的干燥地上部分，全年均可采收，廣泛分布于我國的廣東、廣西、海南等地。小駁骨性味辛、溫，歸肝、腎經；功能為祛瘀止痛，續筋接骨；主用于跌打損傷，筋傷骨折，風濕骨痛，血瘀經閉，產后腹痛[1]。民間常取小駁骨鮮品搗爛，或用酒調后熱敷患處。據報道，小駁骨含有揮發油、無機元素、生物堿、黃酮苷、有機酸、糖類、氨基酸等[2-4]；盧勝明研究了小駁骨地上部分的95%乙醇提取物的化學成分，從中分離并鑒定了19個化合物[5]；江秀娟等對小駁骨藥材進行了性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別，對水分、總灰分、水溶性浸出物含量等進行了測定[6]。但目前關于小駁骨藥材的研究較少。本研究測定了小駁骨中總黃酮、總酚酸含量，并體外測定其抗氧化活性，以期為制定小駁骨的質量標準及其全面開發利用提供參考。

1材料與方法

1.1材料

小駁骨飲片購于廣東康美藥業股份有限公司康美中藥飲片廠，經廣州中醫藥大學炮制教研室陳康教授鑒定為爵床科小駁骨屬植物小駁骨。

蕓香苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707）；咖啡酸對照品（四川省維克奇生物科技有限公司，批號：110807）；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，梯希愛化成工業發展有限公司，批號：D0909）；無水乙醇為分析純；水為蒸餾水。

主要儀器：電子天平（上海精科天平有限公司，型號為MP200B）、8453E紫外-可見分光光度計（美國Agilent科技公司）、超聲波清洗器（東莞市科橋超聲波設備有限公司，型號為KQ-300）。

1.2方法

1.2.1樣品溶液制備（1）醇提液：分別稱取小駁骨莖、葉粉末樣品約2 g，置于100 mL錐形瓶中，加60%乙醇溶液 60 mL，超聲提取40 min，冷卻后補足重量差異，過濾即得。（2）水提液：分別稱取小駁骨莖、葉粉末樣品約2 g，置于 150 mL 圓底燒瓶中，加60 mL蒸餾水，回流提取1 h，冷卻后補足重量差異，過濾即得。

1.2.2水分含量測定按照《中國藥典》（2010年版）相關要求測定小駁骨藥材含水量。

1.2.3總黃酮含量測定

1.2.3.1蕓香苷標準曲線繪制采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色體系進行顯色分析[7]。稱取干燥至恒重的蕓香苷對照品2.07 mg，用乙醇溶解置于10 mL容量瓶，定容，即得蕓香苷對照品溶液（0.207 mg/mL）。分別移取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0 mL蕓香苷對照品溶液于10 mL容量瓶中，加5% NaNO2溶液0.3 mL，混勻，放置6 min；加10% Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；加1%NaOH溶液4 mL，用乙醇定容至刻度線，搖勻，放置15 min。以相應試劑為空白，在 510 nm 波長處測定吸光度，每個處理重復3次。以蕓香苷對照品溶液濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.3.2總黃酮含量測定分別移取樣品溶液5 mL于 10 mL 容量瓶中，按上述NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色體系方法進行操作，在510 nm波長處測定吸光度，每個處理重復3次，根據蕓香苷標準曲線計算樣品的總黃酮含量。

1.2.4總酚酸含量測定

1.2.4.1咖啡酸標準曲線繪制采用鐵氰化鉀-三氯化鐵顯色體系進行顯色分析[8]。稱取干燥至恒重的咖啡酸對照品1.45 mg，用乙醇溶解置于10 mL容量瓶，定容，即得咖啡酸對照品溶液（0.145 g/L）。分別移取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL 于25 mL容量瓶中，加乙醇至5 mL，加0.3%十二烷基硫酸鈉2 mL及0.6%三氯化鐵-0.9%鐵氰化鉀混合溶液（V ∶V=1 ∶1）1 mL，混勻，在暗處放置5 min，用0.1 mol/L鹽酸溶液定容，避光放置20 min。以相應試劑為空白，在 736 nm 波長處測定吸光度，每個處理重復3次。以咖啡酸濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.4.2總酚酸含量測定移取樣品溶液0.2 mL于25 mL容量瓶中，按上述鐵氰化鉀-三氯化鐵顯色體系方法進行操作，在736 nm波長處測定吸光度，每個處理重復3次，根據咖啡酸標準曲線計算樣品總酚酸含量。

1.2.5對DPPH清除活性的測定參照文獻中方法[9-11]并作改進，測定樣品對DPPH清除活性。稱取DPPH對照品 8 mg，用無水乙醇定容至100 mL的容量瓶中，配制成濃度為 0.08 g/L 的DPPH溶液，避光保存，現用現配。分別吸取樣品溶液4 mL至25 mL容量瓶中，定容，搖勻。取稀釋后的樣品溶液3 mL，加入2 mL DPPH溶液，搖勻，室溫、避光放置 30 min。以無水乙醇代替 DPPH 溶液為對照，以無水乙醇代替樣品提取液作空白。在521 nm波長處測吸光度，每個處理重復3次，計算樣品對DPPH自由基的清除率。endprint

DPPH清除率=（1-（D1-D2）D0）×100%

式中：D0為3 mL無水乙醇+2 mL DPPH溶液處理的吸光度；D1為3 mL樣品溶液+2 mL DPPH溶液處理的吸光度；D2為3 mL樣品溶液+2 mL無水乙醇處理的吸光度。

2結果與分析

2.1小駁骨藥材水分含量

2.3對DPPH自由基的清除作用

試驗表明，小駁骨莖醇提液、葉醇提液、莖水提液、葉水提液對DPPH自由基的清除率分別為67.8%、51.5%、82.6%、60.3%。小駁骨各樣品溶液對DPPH均有一定的清除能力，且對DPPH自由基的清除能力有差異。清除能力由強到弱分別為莖水提液>莖醇提液>葉水提液>葉醇提液，其中莖水提液清除能力最強，為82.6%。

3結論與討論

由于合成抗氧化劑對人類健康的潛在危害，近年來從天然植物中尋找天然抗氧化劑引起了人們極大的興趣。以往的研究表明，傳統中藥材具有很強的抗氧化活性，并且目前已知的抗氧化物質多為黃酮類和酚酸類成分。因此本研究采用了經典的顯色體系NaNO2-Al（NO3）3-NaOH和鐵氰化鉀-三氯化鐵，檢測了小駁骨藥材中不同提取溶劑、不同部位的總黃酮、總酚酸含量。其中莖水提液總黃酮含量最高，為4.26%，葉醇提液總酚酸含量最高，為11.90%。

DPPH法是常用的檢測化合物清除自由基活性的方法。本研究顯示，小駁骨各樣品溶液對DPPH均有一定的清除能力，且對DPPH自由基的清除能力有差異。不同樣品中總黃酮含量高低與不同樣品對DPPH清除率強弱的規律是一致的，可以推測小駁骨中總黃酮在清除DPPH自由基中發揮主要的作用，這也與以往研究結果[12]一致。此外，小駁骨是療效確切、顯著的民間常用藥，同時被作為綠籬廣泛種植，藥材來源豐富。為了提高小駁骨的綜合利用度，還應對小駁骨的抗氧化活性部位進行活性成分篩選，為今后開發利用奠定基礎。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 中國藥典：一部[M]. 北京：化學工業出版社，2010：44.

[2]陳青，蘇玲，朱華，等. 駁骨丹的生藥學研究[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（4）：896-898.

[3]蘇玲，蔡毅，朱華，等. 小駁骨揮發油化學成分GC-MS分析[J]. 廣西中醫學院學報，2009，12（2）：56-58.

[4]劉文粢，黃愛東，顧熊飛.小駁骨丹無機元素的含量測定[J]. 廣東微量元素科學，2002，9（8）：57-58.

[5]盧勝明. 五楓藤、小駁骨和川西茶藨的化學成分研究[D]. 成都：中國科學院成都生物研究所，2008.

[6]江秀娟，林惠蓉，陳新.中藥材小駁骨的質量標準研究[J]. 臨床醫學工程，2009，16（10）：26-28.

[7]馬陶陶，張群林，李俊.中藥總黃酮的含量測定方法[J]. 安徽醫藥，2007，11（11）：1030-1032.

[8]馬強，董玉，那生桑，等. 冬葵果中總酚酸的含量測定[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（10）：2583-2584.

[9]Chen W，Weng Y M，Tseng C Y. Antioxidative and antimutagenic activities of healthy herbal drinks from Chinese medicinal herbs[J]. The American Journal of Chinese Medicine，2003，31（4）：523-532.

[10]彭長連，陳少薇，林植芳，等. 用清除有機自由基DPPH法評價植物抗氧化能力[J]. 生物化學與生物物理進展，2000，27（6）：658-661.

[11]李忠紅，胡浩彬，杜冠華. 天然蟲草和人工蟲草菌絲體的抗氧化活性比較研究[J]. 中國醫藥導報，2008，5（16）：13-16.

[12]烏蘭格日樂，白海泉，翁慧. 黃酮的抗氧化活性研究進展[J]. 內蒙古民族大學學報：自然科學版，2008，23（3）：277-280.endprint

DPPH清除率=（1-（D1-D2）D0）×100%

式中：D0為3 mL無水乙醇+2 mL DPPH溶液處理的吸光度；D1為3 mL樣品溶液+2 mL DPPH溶液處理的吸光度；D2為3 mL樣品溶液+2 mL無水乙醇處理的吸光度。

2結果與分析

2.1小駁骨藥材水分含量

2.3對DPPH自由基的清除作用

試驗表明，小駁骨莖醇提液、葉醇提液、莖水提液、葉水提液對DPPH自由基的清除率分別為67.8%、51.5%、82.6%、60.3%。小駁骨各樣品溶液對DPPH均有一定的清除能力，且對DPPH自由基的清除能力有差異。清除能力由強到弱分別為莖水提液>莖醇提液>葉水提液>葉醇提液，其中莖水提液清除能力最強，為82.6%。

3結論與討論

由于合成抗氧化劑對人類健康的潛在危害，近年來從天然植物中尋找天然抗氧化劑引起了人們極大的興趣。以往的研究表明，傳統中藥材具有很強的抗氧化活性，并且目前已知的抗氧化物質多為黃酮類和酚酸類成分。因此本研究采用了經典的顯色體系NaNO2-Al（NO3）3-NaOH和鐵氰化鉀-三氯化鐵，檢測了小駁骨藥材中不同提取溶劑、不同部位的總黃酮、總酚酸含量。其中莖水提液總黃酮含量最高，為4.26%，葉醇提液總酚酸含量最高，為11.90%。

DPPH法是常用的檢測化合物清除自由基活性的方法。本研究顯示，小駁骨各樣品溶液對DPPH均有一定的清除能力，且對DPPH自由基的清除能力有差異。不同樣品中總黃酮含量高低與不同樣品對DPPH清除率強弱的規律是一致的，可以推測小駁骨中總黃酮在清除DPPH自由基中發揮主要的作用，這也與以往研究結果[12]一致。此外，小駁骨是療效確切、顯著的民間常用藥，同時被作為綠籬廣泛種植，藥材來源豐富。為了提高小駁骨的綜合利用度，還應對小駁骨的抗氧化活性部位進行活性成分篩選，為今后開發利用奠定基礎。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 中國藥典：一部[M]. 北京：化學工業出版社，2010：44.

[2]陳青，蘇玲，朱華，等. 駁骨丹的生藥學研究[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（4）：896-898.

[3]蘇玲，蔡毅，朱華，等. 小駁骨揮發油化學成分GC-MS分析[J]. 廣西中醫學院學報，2009，12（2）：56-58.

[4]劉文粢，黃愛東，顧熊飛.小駁骨丹無機元素的含量測定[J]. 廣東微量元素科學，2002，9（8）：57-58.

[5]盧勝明. 五楓藤、小駁骨和川西茶藨的化學成分研究[D]. 成都：中國科學院成都生物研究所，2008.

[6]江秀娟，林惠蓉，陳新.中藥材小駁骨的質量標準研究[J]. 臨床醫學工程，2009，16（10）：26-28.

[7]馬陶陶，張群林，李俊.中藥總黃酮的含量測定方法[J]. 安徽醫藥，2007，11（11）：1030-1032.

[8]馬強，董玉，那生桑，等. 冬葵果中總酚酸的含量測定[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（10）：2583-2584.

[9]Chen W，Weng Y M，Tseng C Y. Antioxidative and antimutagenic activities of healthy herbal drinks from Chinese medicinal herbs[J]. The American Journal of Chinese Medicine，2003，31（4）：523-532.

[10]彭長連，陳少薇，林植芳，等. 用清除有機自由基DPPH法評價植物抗氧化能力[J]. 生物化學與生物物理進展，2000，27（6）：658-661.

[11]李忠紅，胡浩彬，杜冠華. 天然蟲草和人工蟲草菌絲體的抗氧化活性比較研究[J]. 中國醫藥導報，2008，5（16）：13-16.

[12]烏蘭格日樂，白海泉，翁慧. 黃酮的抗氧化活性研究進展[J]. 內蒙古民族大學學報：自然科學版，2008，23（3）：277-280.endprint

DPPH清除率=（1-（D1-D2）D0）×100%

式中：D0為3 mL無水乙醇+2 mL DPPH溶液處理的吸光度；D1為3 mL樣品溶液+2 mL DPPH溶液處理的吸光度；D2為3 mL樣品溶液+2 mL無水乙醇處理的吸光度。

2結果與分析

2.1小駁骨藥材水分含量

2.3對DPPH自由基的清除作用

試驗表明，小駁骨莖醇提液、葉醇提液、莖水提液、葉水提液對DPPH自由基的清除率分別為67.8%、51.5%、82.6%、60.3%。小駁骨各樣品溶液對DPPH均有一定的清除能力，且對DPPH自由基的清除能力有差異。清除能力由強到弱分別為莖水提液>莖醇提液>葉水提液>葉醇提液，其中莖水提液清除能力最強，為82.6%。

3結論與討論

由于合成抗氧化劑對人類健康的潛在危害，近年來從天然植物中尋找天然抗氧化劑引起了人們極大的興趣。以往的研究表明，傳統中藥材具有很強的抗氧化活性，并且目前已知的抗氧化物質多為黃酮類和酚酸類成分。因此本研究采用了經典的顯色體系NaNO2-Al（NO3）3-NaOH和鐵氰化鉀-三氯化鐵，檢測了小駁骨藥材中不同提取溶劑、不同部位的總黃酮、總酚酸含量。其中莖水提液總黃酮含量最高，為4.26%，葉醇提液總酚酸含量最高，為11.90%。

DPPH法是常用的檢測化合物清除自由基活性的方法。本研究顯示，小駁骨各樣品溶液對DPPH均有一定的清除能力，且對DPPH自由基的清除能力有差異。不同樣品中總黃酮含量高低與不同樣品對DPPH清除率強弱的規律是一致的，可以推測小駁骨中總黃酮在清除DPPH自由基中發揮主要的作用，這也與以往研究結果[12]一致。此外，小駁骨是療效確切、顯著的民間常用藥，同時被作為綠籬廣泛種植，藥材來源豐富。為了提高小駁骨的綜合利用度，還應對小駁骨的抗氧化活性部位進行活性成分篩選，為今后開發利用奠定基礎。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 中國藥典：一部[M]. 北京：化學工業出版社，2010：44.

[2]陳青，蘇玲，朱華，等. 駁骨丹的生藥學研究[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（4）：896-898.

[3]蘇玲，蔡毅，朱華，等. 小駁骨揮發油化學成分GC-MS分析[J]. 廣西中醫學院學報，2009，12（2）：56-58.

[4]劉文粢，黃愛東，顧熊飛.小駁骨丹無機元素的含量測定[J]. 廣東微量元素科學，2002，9（8）：57-58.

[5]盧勝明. 五楓藤、小駁骨和川西茶藨的化學成分研究[D]. 成都：中國科學院成都生物研究所，2008.

[6]江秀娟，林惠蓉，陳新.中藥材小駁骨的質量標準研究[J]. 臨床醫學工程，2009，16（10）：26-28.

[7]馬陶陶，張群林，李俊.中藥總黃酮的含量測定方法[J]. 安徽醫藥，2007，11（11）：1030-1032.

[8]馬強，董玉，那生桑，等. 冬葵果中總酚酸的含量測定[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（10）：2583-2584.

[9]Chen W，Weng Y M，Tseng C Y. Antioxidative and antimutagenic activities of healthy herbal drinks from Chinese medicinal herbs[J]. The American Journal of Chinese Medicine，2003，31（4）：523-532.

[10]彭長連，陳少薇，林植芳，等. 用清除有機自由基DPPH法評價植物抗氧化能力[J]. 生物化學與生物物理進展，2000，27（6）：658-661.

[11]李忠紅，胡浩彬，杜冠華. 天然蟲草和人工蟲草菌絲體的抗氧化活性比較研究[J]. 中國醫藥導報，2008，5（16）：13-16.

[12]烏蘭格日樂，白海泉，翁慧. 黃酮的抗氧化活性研究進展[J]. 內蒙古民族大學學報：自然科學版，2008，23（3）：277-280.endprint