微波法提取狼把草總黃酮工藝研究

王亞紅　祝波

摘要：以木犀草素、槲皮素、芹黃素為對照品，以總黃酮提取率為考察指標，采用單因素和正交試驗優化狼把草總黃酮的微波提取工藝，確定乙醇體積分數75%、微波功率500 W、提取時間35 min、料液比1 g ∶20 mL為狼把草總黃酮最佳提取工藝條件；該條件下總黃酮平均提取率為0.507 2%。

關鍵詞：狼把草；總黃酮；微波輔助提取；正交試驗

中圖分類號： R284.2 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0235-02

收稿日期：2013-08-29

基金項目：吉林化工學院項目（編號：吉化院合字第2012第061號）。

作者簡介：王亞紅（1970—），女，吉林吉林人，碩士，教授，從事天然產物研究開發。E-mail：wangyahong99999@163.com。狼把草（Bidens tripartita L.）為菊科鬼針草屬植物，別名鬼叉、接力草、針線包等，廣泛分布于我國大部分地區。狼把草藥用歷史悠久，其藥用價值在《本草拾遺》《本草綱目》等文獻中多有記載[1]，主要功效為養陰益肺、清利濕熱，主治氣管炎、肺結核、咽喉炎及丹毒、癬瘡等，其藥用主要有效成分為黃酮化合物木犀草素、槲皮素、芹黃素及糖苷[2]。黃酮類化合物是一種生理活性物質，具有抗病毒、抗炎、抗癌防癌、降低血壓、防止動脈粥樣硬化和抗氧化、防衰老等作用[3-8]，該化合物已成為國內外醫藥界研究的熱門話題，是一類具有廣泛開發前景的天然藥物[9]。本試驗以總黃酮提取率為指標，采用單因素和正交試驗，優選狼把草的微波提取工藝，為狼把草的綜合利用及相關領域的深入研究提供依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器與設備微波輔助萃取儀（MAS-Ⅱ，上海新儀器微波化學科技有限公司）；高效液相色譜儀（LC-20AT，日本島津）；紫外檢測器（SPD-20A，日本島津）；色譜柱（Shim-pack VP-ODS，日本島津）；超聲波清洗器（AS3120，天津奧特賽恩斯）；旋轉蒸發儀（RE-52A，上海亞榮生化儀器廠）；電子分析天平（FA2004N，上海精密科學儀器有限公司）。

1.1.2試驗材料狼把草購自吉林市江城大藥房，經鑒定為狼把草（Bidens tripartita L.）干燥全草；木犀草素、槲皮素、芹黃素由北京捷誠科遠化工技術研究院提供；無水甲醇、乙酸均為分析純。

1.2狼把草總黃酮含量測定

1.2.1色譜條件色譜柱為C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 ∶水 ∶乙酸為75 ∶30 ∶0.4，用前微孔濾膜過濾并經超聲脫氣處理；檢測波長為254 nm，流速為0.7 mL/min；柱溫為室溫；測試樣品每次進樣量為10 μL。

1.2.2對照品溶液的制備與線性試驗精密稱取干燥至恒重的木犀草素、槲皮素、芹黃素標準品，用流動相溶解并定容制成60.5、30.3、26.3 mg/mL的對照品溶液；分別精密吸取1、3、5、7、9 mL，用流動相定容至10 mL，用高效液相色譜儀進行測定。以峰面積（A）對濃度C進行線性回歸，得回歸方程為：木犀草素A=7.65×103C+685，r=0.999 7，濃度范圍605～60.59 μg/mL；槲皮素A=2.02×104C-1.65×103，r=0999 8，濃度范圍3.03～30.39 μg/mL；芹黃素A=5.61×103C+395，r=0.999 7，濃度范圍2.63～26.39 μg/mL。

1.2.3供試品溶液的制備與測定準確稱取5.0 g狼把草生藥粉末于三頸瓶中，加入一定量75%乙醇溶液作溶劑，在設定的試驗參數下進行微波萃取，抽濾，濾渣加入等量75%乙醇提取第2次；合并2次提取液旋蒸，所得溶液放入坩堝，在70 ℃水浴鍋中水浴蒸發；在烘箱中干燥至恒重得干浸膏，取一定量干浸膏用流動相溶解定容，用高效液相色譜儀測定狼把草中木犀草素、槲皮素、芹黃素的含量。

1.2.4總黃酮提取率計算加和每次提取得到浸膏的木犀草素、槲皮素、芹黃素3類黃酮化合物質量作為浸膏中總黃酮質量。狼把草總黃酮提取率計算公式為：狼把草總黃酮提取率=浸膏中總黃酮質量（g）/所用狼把草粉末量（g）×100%。

1.3精確度與穩定性試驗

1.3.1精密度試驗精密吸取木犀草素、槲皮素、芹黃素3個對照品溶液，按照色譜條件連續進樣5次，求得相應含量，并計算相對標準偏差RSD。

1.3.2重現性試驗在平行條件下，稱取6份狼把草藥粉各5.0 g，測定樣品溶液中木犀草素、槲皮素、芹黃素含量，并計算RSD。

1.3.3穩定性試驗取供試品溶液，用高效液相色譜儀每隔2 h測定1次樣品溶液中木犀草素、槲皮素、芹黃素含量，并計算RSD。

1.3.4加樣回收試驗取6份1.5 g狼把草，加入木犀草素、槲皮素、芹黃素標準品適量，按照供試樣品提取條件，提取并制備相應溶液，測定木犀草素、槲皮素、芹黃素含量，并計算RSD。

1.4單因素試驗

1.4.1料液比設定微波功率700 W、微波溫度70 ℃、提取時間30 min、乙醇體積分數75%，分別按1 ∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25、1 ∶30（g ∶mL）的料液比進行微波萃取。

1.4.2微波功率設定微波溫度70 ℃、提取時間30 min、料液比為1 g ∶20 mL、乙醇體積分數75%，分別按400、500、600、700、800 W的微波功率進行微波萃取。

1.4.3乙醇體積分數設定微波功率600 W、微波溫度 70 ℃、提取時間30 min、料液比1 g ∶20 mL，分別加入體積分數為45%、55%、65%、75%、85%的乙醇進行微波萃取。endprint

1.4.4微波時間設定微波功率600 W、微波溫度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇體積分數75%，分別微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交試驗

3小結

本試驗采用微波工藝提取狼把草黃酮，該方法加熱耗能少，成本低，簡單方便。優化所得最佳提取工藝條件為：乙醇體積分數75%、微波功率500 W、提取時間35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波溫度70 ℃，該優化條件下的平均提取率為0507 2%。該研究結果對狼把草總黃酮在藥物、食品等領域的深入開發提供了一定參考。

參考文獻：

[1]江蘇新醫學院. 中藥大辭典[M]. 上海：上海科學技術出版社，1979：1901.

[2]王天勇，南鳳仙，楊文遠. RP-HPLC法同時測定狼把草中的木犀草素、槲皮素和芹黃素[J]. 寧夏大學學報：自然科學版，1996，17（4）：18-21.

[3]萬洪善，李凡. 鹽生植物堿蓬黃酮類物質的提取及抗氧化活性研究[J]. 江蘇農業科學，2012，40（4）：296-298.

[4]鄢春旻. 黃酮類化合物抗病毒及抗炎活性研究[D]. 南京：南京大學，2012：32.

[5]才金玲，單群，陸軍，等. 大豆黃酮對衰老小鼠腦組織的保護作用[J]. 江蘇農業科學，2012，40（6）：289-291.

[6]Aquila S，Giner R M，Recio M C，et al. Anti-inflammatory activity of flavonoids from Cayaponia tayuya roots[J]. Journal of Ethnopharmacology，2009，121（2）：333-337.

[7]張宇，曲佐寅，劉立新，等. 萬壽菊莖葉中2種黃酮類化合物的體外抗腫瘤活性[J]. 中國實驗方劑學雜志，2013，19（13）：233-237.

[8]張海生，陳錦屏. 蜂蛹黃酮的提取及體外抗氧化作用的研究[J]. 食品科學，2008，29（2）：158-162.

[9]尹愛群，穆惠軍，江雪欣，等. 黃酮類化合物研究進展[J]. 中國藥事，2005，19（11）：50-53.endprint

1.4.4微波時間設定微波功率600 W、微波溫度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇體積分數75%，分別微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交試驗

3小結

本試驗采用微波工藝提取狼把草黃酮，該方法加熱耗能少，成本低，簡單方便。優化所得最佳提取工藝條件為：乙醇體積分數75%、微波功率500 W、提取時間35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波溫度70 ℃，該優化條件下的平均提取率為0507 2%。該研究結果對狼把草總黃酮在藥物、食品等領域的深入開發提供了一定參考。

參考文獻：

[1]江蘇新醫學院. 中藥大辭典[M]. 上海：上海科學技術出版社，1979：1901.

[2]王天勇，南鳳仙，楊文遠. RP-HPLC法同時測定狼把草中的木犀草素、槲皮素和芹黃素[J]. 寧夏大學學報：自然科學版，1996，17（4）：18-21.

[3]萬洪善，李凡. 鹽生植物堿蓬黃酮類物質的提取及抗氧化活性研究[J]. 江蘇農業科學，2012，40（4）：296-298.

[4]鄢春旻. 黃酮類化合物抗病毒及抗炎活性研究[D]. 南京：南京大學，2012：32.

[5]才金玲，單群，陸軍，等. 大豆黃酮對衰老小鼠腦組織的保護作用[J]. 江蘇農業科學，2012，40（6）：289-291.

[6]Aquila S，Giner R M，Recio M C，et al. Anti-inflammatory activity of flavonoids from Cayaponia tayuya roots[J]. Journal of Ethnopharmacology，2009，121（2）：333-337.

[7]張宇，曲佐寅，劉立新，等. 萬壽菊莖葉中2種黃酮類化合物的體外抗腫瘤活性[J]. 中國實驗方劑學雜志，2013，19（13）：233-237.

[8]張海生，陳錦屏. 蜂蛹黃酮的提取及體外抗氧化作用的研究[J]. 食品科學，2008，29（2）：158-162.

[9]尹愛群，穆惠軍，江雪欣，等. 黃酮類化合物研究進展[J]. 中國藥事，2005，19（11）：50-53.endprint

1.4.4微波時間設定微波功率600 W、微波溫度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇體積分數75%，分別微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交試驗

3小結

本試驗采用微波工藝提取狼把草黃酮，該方法加熱耗能少，成本低，簡單方便。優化所得最佳提取工藝條件為：乙醇體積分數75%、微波功率500 W、提取時間35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波溫度70 ℃，該優化條件下的平均提取率為0507 2%。該研究結果對狼把草總黃酮在藥物、食品等領域的深入開發提供了一定參考。

參考文獻：

[1]江蘇新醫學院. 中藥大辭典[M]. 上海：上海科學技術出版社，1979：1901.

[2]王天勇，南鳳仙，楊文遠. RP-HPLC法同時測定狼把草中的木犀草素、槲皮素和芹黃素[J]. 寧夏大學學報：自然科學版，1996，17（4）：18-21.

[3]萬洪善，李凡. 鹽生植物堿蓬黃酮類物質的提取及抗氧化活性研究[J]. 江蘇農業科學，2012，40（4）：296-298.

[4]鄢春旻. 黃酮類化合物抗病毒及抗炎活性研究[D]. 南京：南京大學，2012：32.

[5]才金玲，單群，陸軍，等. 大豆黃酮對衰老小鼠腦組織的保護作用[J]. 江蘇農業科學，2012，40（6）：289-291.

[6]Aquila S，Giner R M，Recio M C，et al. Anti-inflammatory activity of flavonoids from Cayaponia tayuya roots[J]. Journal of Ethnopharmacology，2009，121（2）：333-337.

[7]張宇，曲佐寅，劉立新，等. 萬壽菊莖葉中2種黃酮類化合物的體外抗腫瘤活性[J]. 中國實驗方劑學雜志，2013，19（13）：233-237.

[8]張海生，陳錦屏. 蜂蛹黃酮的提取及體外抗氧化作用的研究[J]. 食品科學，2008，29（2）：158-162.

[9]尹愛群，穆惠軍，江雪欣，等. 黃酮類化合物研究進展[J]. 中國藥事，2005，19（11）：50-53.endprint